王博琳，常耘，司升云

（1.河南平頂山市第一中學(xué)，467000；2.武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)研究院蔬菜科學(xué)研究所）

煙青蟲(chóng)初孵幼蟲(chóng)的高效快速收集方法

王博琳1，常耘1，司升云2

（1.河南平頂山市第一中學(xué)，467000；2.武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)研究院蔬菜科學(xué)研究所）

比較了常用的煙青蟲(chóng)人工收集方法和新研發(fā)的煙青蟲(chóng)初孵幼蟲(chóng)快速收集方法的效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，與人工收集方法相比，快速收集方法獲得初孵幼蟲(chóng)所用時(shí)間少，收集的初孵幼蟲(chóng)存活率搞，達(dá)96.33%，且收集的幼蟲(chóng)發(fā)育更加整齊，雌、雄蛹單頭質(zhì)量（雌蛹295.33 mg，雄蛹284.66 mg）略大；還可節(jié)省大量人力，避免了人工挑蟲(chóng)對(duì)初孵幼蟲(chóng)的傷害，保障了煙青蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)種群的大量?jī)?yōu)質(zhì)擴(kuò)繁。

煙青蟲(chóng)；初孵幼蟲(chóng)；快速收集法

煙青蟲(chóng)（Helicoverpa assulta）又稱(chēng)煙草夜蛾，屬鱗翅目（Lepidoptera）夜蛾科。煙青蟲(chóng)在田間主要為害煙草和辣椒，為害辣椒時(shí)，以幼蟲(chóng)蛀食辣椒的葉片和花果，常年蛀果率為20%～30%，嚴(yán)重為害時(shí)，蛀果率高達(dá)30%～50%［1，2］，經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重；幼蟲(chóng)可鉆入果內(nèi)，啃食果皮、胎座，并在果內(nèi)綴絲，排留大量糞便，致使果實(shí)不能食用，降低商品價(jià)值。

為了降低田間煙青蟲(chóng)為害，為高效防控?zé)熐嘞x(chóng)提供科學(xué)基礎(chǔ)和理論指導(dǎo)，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)需要開(kāi)展針對(duì)煙青蟲(chóng)生物學(xué)和生態(tài)學(xué)研究、對(duì)化學(xué)藥劑的敏感度及其變異測(cè)定及毒理學(xué)參數(shù)等試驗(yàn)，因此需要室內(nèi)繼代飼養(yǎng)和繁育煙青蟲(chóng)試蟲(chóng)種群，而抗藥性研究中還需要長(zhǎng)期保存敏感和抗性或亞致死處理種群等［3］。目前采用人工飼料進(jìn)行煙青蟲(chóng)室內(nèi)大規(guī)模繁育和繼代保種技術(shù)已經(jīng)成功實(shí)現(xiàn)，并進(jìn)一步改進(jìn)［4］，節(jié)約了大量的人力和物力。但是在煙青蟲(chóng)的種群擴(kuò)繁過(guò)程中，其成蟲(chóng)通常在紗布上產(chǎn)卵，當(dāng)卵孵化后，需要用細(xì)小毛筆將初孵幼蟲(chóng)非常小心地從紗布上挑取到人工飼料上飼養(yǎng)，這個(gè)過(guò)程中存在較多的問(wèn)題，一是人工挑蟲(chóng)要特別小心，且耗時(shí)較長(zhǎng)；二是即使非常小心，用毛筆挑取也很容易傷害或者致死初孵幼蟲(chóng)，降低后代飼養(yǎng)數(shù)量；三是如果卵在夜晚孵化，則無(wú)法及時(shí)挑取初孵幼蟲(chóng)到人工飼料上，而幼蟲(chóng)孵化后6 h內(nèi)接觸不到飼料即餓死。因此，如何自動(dòng)無(wú)傷害地收集初孵幼蟲(chóng)一直是煙青蟲(chóng)乃至其他鱗翅目昆蟲(chóng)種群擴(kuò)繁的制約因子之一。

在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)煙青蟲(chóng)時(shí)，常將裝有卵布的塑料袋放置在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，發(fā)現(xiàn)孵化后的幼蟲(chóng)清晨全部集聚在朝向窗戶(hù)一側(cè)，由此推測(cè)煙青蟲(chóng)初孵幼蟲(chóng)的趨光性較強(qiáng)。基于此，擬設(shè)置黑暗的卵孵化環(huán)境，正常環(huán)境的裝有人工飼料的塑料盒作為幼蟲(chóng)收集盒，二者之間采用玻璃管相通，從收集時(shí)間、幼蟲(chóng)存活率和煙青蟲(chóng)蛹質(zhì)量3個(gè)指標(biāo)研究比較了該方法與常規(guī)人工收集方法的不同、優(yōu)勢(shì)以及是否適合用于煙青蟲(chóng)初孵化幼蟲(chóng)的收集。

表1　煙青蟲(chóng)幼蟲(chóng)人工飼料配方

1　材料與方法

1.1試蟲(chóng)及人工飼料制作

試驗(yàn)用蟲(chóng)為采集自煙草田的煙青蟲(chóng)幼蟲(chóng)，室內(nèi)在人工飼料上飼養(yǎng)超過(guò)3代。人工飼料的配方參照董鈞鋒等［4］的方法，具體成分及用量見(jiàn)表1。

其中，大豆粉在用前經(jīng)高壓滅菌鍋滅菌處理30 min，蒸熟后自然晾干，用粉碎機(jī)再次粉碎備用。麥胚粉制作方法：將小麥粒洗干凈，鋪于玻璃槽內(nèi)薄薄一層，每隔12 h灑水1次，保持小麥潮濕，當(dāng)小麥根長(zhǎng)超過(guò)種子長(zhǎng)度時(shí)，再次洗凈后放入電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中60℃干燥，最后加工成粉末備用。

人工飼料的具體制作方法如下：按表1所示份量，分別稱(chēng)取各組分。先將瓊脂粉倒入不銹鋼鍋中，然后加入500 mL蒸餾水并在電磁爐上加熱，同時(shí)不斷攪拌，以確保瓊脂粉充分溶解。瓊脂粉煮沸3次后倒入九陽(yáng)料理機(jī)中，加入稱(chēng)量過(guò)的麥胚粉、辣椒粉、麥麩、酵母粉、熟大豆粉及亞油酸，攪拌1 min。攪拌均勻后放在超凈工作臺(tái)內(nèi)吹風(fēng)輔助降溫，待溫度降到50～60℃時(shí)，加入山梨酸、尼泊金、抗壞血酸等再次攪拌1 min，最后將攪勻的飼料倒入直徑18 cm的滅菌玻璃培養(yǎng)皿中，置于超凈工作臺(tái)中冷卻凝固，然后放入4℃冰箱中備用。

1.2煙青蟲(chóng)飼養(yǎng)過(guò)程

試蟲(chóng)在養(yǎng)蟲(chóng)室內(nèi)不接觸藥劑的情況下一直飼養(yǎng)在人工飼料上。養(yǎng)蟲(chóng)室室內(nèi)溫度（27±2）°C，濕度（60±10）%，光暗周期比為L(zhǎng)/D=16 h/8 h。具體飼養(yǎng)過(guò)程如下。

①帶卵紗布消毒將帶卵紗布放入500 mL燒杯中，加入4%甲醛溶液浸泡10～12 min，清水漂洗2～3次，置于超凈工作臺(tái)內(nèi)微風(fēng)吹干表面水分后放入保鮮袋中，然后放入光照恒溫培養(yǎng)箱中等待孵化。

②幼蟲(chóng)飼養(yǎng)初孵幼蟲(chóng)群體飼養(yǎng)，卵孵化4 h內(nèi)，用軟毛筆將初孵幼蟲(chóng)小心接入滅菌的裝有足夠人工飼料的指形管（平底）內(nèi)，每管接5頭。用滅菌的脫脂棉塞住指形管，幼蟲(chóng)進(jìn)入3齡后分管飼養(yǎng)，直至幼蟲(chóng)在試管中化蛹，飼料視情況更換。

③蛹老熟幼蟲(chóng)化蛹后第3天，將健康蛹從指形管內(nèi)取出來(lái)，并將雌、雄蛹分別放入標(biāo)記過(guò)的塑料培養(yǎng)皿中（直徑90 mm）。隨后，放進(jìn)500 mL燒杯中，加入4%甲醛溶液浸泡10～12 min，用自來(lái)水沖洗并晾干后，按照雌雄分別放入羽化籠內(nèi)。

④成蟲(chóng)成蟲(chóng)羽化后轉(zhuǎn)移到交配籠中，并放入浸蘸10%蜂蜜水的脫脂棉供其補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)。成蟲(chóng)開(kāi)始在紗布上產(chǎn)卵后，每天更換卵布。

1.3煙青蟲(chóng)初孵幼蟲(chóng)收集

①常規(guī)人工收集法帶卵紗布上出現(xiàn)初孵幼蟲(chóng)后，在卵孵化4 h內(nèi)，用軟毛筆將初孵幼蟲(chóng)人工接入養(yǎng)蟲(chóng)盒內(nèi)，養(yǎng)蟲(chóng)盒內(nèi)加入足夠的人工飼料，每盒接100頭進(jìn)行群體飼養(yǎng)。該部分由2位測(cè)試者（一位是在實(shí)驗(yàn)室工作超過(guò)2 a的熟練工人，另一位是在實(shí)驗(yàn)室工作不超過(guò)半年的非熟練工人）分別采用毛筆人工收集幼蟲(chóng)，再轉(zhuǎn)移到人工飼料上。每個(gè)測(cè)試處理重復(fù)3次。

②快速收集法用1個(gè)四周包上黑布的黑色塑料盒子作孵化盒，將消毒后的帶卵紗布放入孵化盒中；設(shè)置第二個(gè)裝有人工飼料的幼蟲(chóng)收集盒，孵化盒和幼蟲(chóng)收集盒分別在接近底部的側(cè)面部位開(kāi)1個(gè)圓孔，2個(gè)盒子之間用一根棕色玻璃管連接，初孵幼蟲(chóng)白天基于趨光性從玻璃管中間自行爬到幼蟲(chóng)收集盒的人工飼料上去取食；夜間在幼蟲(chóng)收集盒旁邊放置一盞打開(kāi)的LED臺(tái)燈，借助燈光誘導(dǎo)夜間孵化幼蟲(chóng)爬行到幼蟲(chóng)收集盒中，每個(gè)收集盒中初孵幼蟲(chóng)數(shù)量達(dá)到100頭左右時(shí)及時(shí)更換另外一個(gè)新的幼蟲(chóng)收集盒。該處理重復(fù)3次。

③幼蟲(chóng)存活率和蛹重將2種方法收集的煙青蟲(chóng)初孵幼蟲(chóng)分別飼養(yǎng)在人工飼料上，飼養(yǎng)8 d后（3齡幼蟲(chóng)階段），計(jì)算存活率，存活率（%）=（初孵幼蟲(chóng)數(shù)量-生長(zhǎng)至3齡幼蟲(chóng)的數(shù)量）/初孵幼蟲(chóng)數(shù)量× 100%。將存活幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)至指形管內(nèi)單頭飼養(yǎng)至化蛹，化蛹3 d后稱(chēng)取蛹質(zhì)量；每個(gè)處理測(cè)定雌、雄蛹質(zhì)量各20頭，設(shè)3次重復(fù)。

1.4數(shù)據(jù)處理

用Sigmaplot 12.0作圖、SPSS 19.0軟件分析差異顯著性（p＜0.05），多重比較采用LSD法。

圖1　初孵幼蟲(chóng)不同收集方法耗費(fèi)時(shí)間比較

2　結(jié)果與分析

2.1不同收集方法耗費(fèi)時(shí)間比較

3種處理耗時(shí)差異很大。非熟練工人采用毛筆挑取100頭初孵幼蟲(chóng)到飼料上需52.67 min，熟練工人挑取100頭初孵幼蟲(chóng)到飼料上需31.33 min，而采用快速收集法更換幼蟲(chóng)收集盒（約計(jì)100頭/盒）1次，100頭幼蟲(chóng)從孵化盒中爬行到幼蟲(chóng)收集盒中耗時(shí)13.43 min（圖1）。結(jié)果表明，對(duì)于收集同樣數(shù)量的幼蟲(chóng)而言，快速收集法將幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到人工飼料上所需時(shí)間顯著少于人工挑蟲(chóng)法，可節(jié)約大量人力。

2.2不同收集方法的幼蟲(chóng)存活率比較

由表2可以看出，熟練工人挑蟲(chóng)的存活率平均為83.67%，個(gè)別超過(guò)85%，非熟練工人挑蟲(chóng)成活率低于50%，平均為46.00%，二者之間差異顯著；而人工快速收集方法的初孵幼蟲(chóng)存活率達(dá)96.33%，遠(yuǎn)高于非熟練人工挑蟲(chóng)處理的，但與熟練工人挑蟲(chóng)的存活率之間差異不顯著，說(shuō)明該快速收集法能大大提高初孵幼蟲(chóng)的存活率。

2.3不同收集方法的蛹質(zhì)量比較

由表3可以看出，快速收集法的雌雄蛹質(zhì)量均略高于人工挑蟲(chóng)處理，但不同收集方法的雌性蛹質(zhì)量之間、雄性蛹質(zhì)量之間均無(wú)顯著差異。從標(biāo)準(zhǔn)差數(shù)據(jù)來(lái)看，快速收集法不同蛹質(zhì)量之間的差異較小，而人工挑蟲(chóng)法蛹質(zhì)量之間差異較大，說(shuō)明快速收集法得到的煙青蟲(chóng)蛹更加整齊。

表2　不同方法收集幼蟲(chóng)的存活率比較

3　小結(jié)與討論

煙青蟲(chóng)成蟲(chóng)趨光性強(qiáng)，很早就有報(bào)道［5］，田間也常利用該特點(diǎn)采用頻振式殺蟲(chóng)燈有效誘殺煙青蟲(chóng)成蟲(chóng)，降低成蟲(chóng)落卵率，抑制煙青蟲(chóng)的繁殖［6，7］；而關(guān)于幼蟲(chóng)趨光性的報(bào)道較少，張漢鵠［8］報(bào)道，大袋蛾（Clania variegata Snellen）幼蟲(chóng)具有喜光性，常在灌木、矮樹(shù)等上聚集為害，但未明確不同齡期幼蟲(chóng)間喜光性是否存在差異；另有研究發(fā)現(xiàn)，文山松毛蟲(chóng)（Dendrolimus punctatus wenshanensis）幼蟲(chóng)的趨光性強(qiáng)，但不同齡期幼蟲(chóng)對(duì)光的敏感度差異及光源強(qiáng)度的高低尚需要進(jìn)一步研究［9］。

基于前期實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的多次觀(guān)察，確定煙青蟲(chóng)初孵幼蟲(chóng)具有朝向光源的特性，由此設(shè)計(jì)光源通道，讓初孵幼蟲(chóng)自行爬向具有人工飼料的幼蟲(chóng)飼養(yǎng)盒內(nèi)，大大降低了人工挑蟲(chóng)耗費(fèi)的大量時(shí)間和精力，同時(shí)減少了人工操作帶來(lái)的不可避免的傷害。同時(shí)，由該方法得到的初孵幼蟲(chóng)存活率高，后期發(fā)育的蛹整齊度高；另外，該法可實(shí)現(xiàn)初孵幼蟲(chóng)的優(yōu)勝劣汰，淘汰不能成功爬行至收集盒內(nèi)的弱小幼蟲(chóng)；而夜間開(kāi)啟的LED燈還可誘導(dǎo)夜間孵化的幼蟲(chóng)及時(shí)爬行到人工飼料上取食，保障了實(shí)驗(yàn)種群的大量?jī)?yōu)質(zhì)擴(kuò)繁。該方法可以擴(kuò)展到其他具有相同特性的鱗翅目昆蟲(chóng)的室內(nèi)種群飼養(yǎng)及擴(kuò)繁工作中。

本研究表明，煙青蟲(chóng)低齡幼蟲(chóng)的趨光性強(qiáng)，且證實(shí)了初孵幼蟲(chóng)高效快速收集方法的可行性。田間觀(guān)察也發(fā)現(xiàn)，1～2齡煙青蟲(chóng)幼蟲(chóng)通常在葉片和花果向陽(yáng)的一側(cè)取食，3齡后為害辣椒時(shí)則多蛀食果實(shí)。生產(chǎn)上可利用此特點(diǎn)，抓住3齡幼蟲(chóng)前這一關(guān)鍵時(shí)期，噴施無(wú)內(nèi)吸性的病毒制劑、白僵菌和微孢子蟲(chóng)等生防制劑，或者釋放棉鈴蟲(chóng)齒唇姬蜂（Campoletis chlorideae Uchida）［10］、中紅側(cè)溝繭蜂（Microplitis mediatorHalidag）等防治煙青蟲(chóng)，效果良好。

表3　不同方法收集的幼蟲(chóng)化蛹后蛹質(zhì)量比較

［1］魏林，梁志懷，張屹，等.辣椒煙青蟲(chóng)為害特點(diǎn)及其綜合防治［J］.長(zhǎng)江蔬菜，2015（21）：51-52.

［2］伍龍秋.辣椒煙青蟲(chóng)的綜合防治技術(shù)［J］.農(nóng)村經(jīng)濟(jì)與科技，2014（1）：79.

［3］王凱.溴氰蟲(chóng)酰胺對(duì)煙青蟲(chóng)的亞致死效應(yīng)［D］.洛陽(yáng)：河南科技大學(xué)，2015.

［4］董鈞鋒，許曉利，牛東升，等.煙青蟲(chóng)人工飼料的改進(jìn)研究［J］.應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)，2013，50（1）：261-267.

［5］丁巖欽.夜蛾趨光特性的研究：煙青蟲(chóng)成蟲(chóng)對(duì)雙色光與光強(qiáng)度的反應(yīng)［J］.昆蟲(chóng)學(xué)，1978，21（1）：1-6.

［6］李躍輝.頻振式殺蟲(chóng)燈與性誘劑誘殺煙青蟲(chóng)效果比較［J］.中國(guó)農(nóng)技推廣，2005（5）：42-43.

［7］韓學(xué)儉.棉鈴蟲(chóng)煙青蟲(chóng)對(duì)辣椒的危害及其防治［J］.辣椒雜志，2005（3）：34-36.

［8］張漢鵠.大袋蛾發(fā)生規(guī)律與防治研究［J］.安徽農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，1991，18（1）：1-7.

［9］柴守權(quán)，段兆堯，謝開(kāi)立.文山松毛蟲(chóng)幼蟲(chóng)耐饑餓及燈誘試驗(yàn)［J］.林業(yè)科技，2002，27（4）：24-26.

［10］顏增光，閻云花，王琛柱.棉鈴蟲(chóng)和煙青蟲(chóng)取食誘導(dǎo)的煙草揮發(fā)物吸引棉鈴蟲(chóng)齒唇姬蜂［J］.科學(xué)通報(bào)，2005，50（12）：1 220-1 227.

10.3865/j.issn.1001-3547.2016.20.032

S436.412.2+1

A

1001-3547（2016）20-0083-04

王博琳（1999-），男，E-mail：442428624@qq.com

司升云（1970-），男，通信作者，高級(jí)農(nóng)藝師，主要從事蔬菜害蟲(chóng)綜合治理研究，E-mail：sishengyun@126.com

2016-05-24