蔡麗娜 尚偉

摘 要： 乙肝嚴(yán)重危害著人類的生命與健康，尋找更為敏感準(zhǔn)確的檢測(cè)指標(biāo)對(duì)乙肝患者的診斷和預(yù)后具有十分重要的意義。本文抽取427例病毒性肝炎患者的血清標(biāo)本，分別采用ELISA和RT-PCR兩種方法檢測(cè)對(duì)乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物HBV-M、HBV-DNA、Pre-S1進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示HBV-DNA（83.1%）、Pre-S1（73%）有較高的陽性檢出率，可以作為更敏感的血清標(biāo)志物，與傳統(tǒng)的“乙肝兩對(duì)半”進(jìn)行聯(lián)合應(yīng)用，以更好的進(jìn)行乙肝患者的早期診斷和預(yù)后治療。

關(guān)鍵詞：乙型肝炎 HBV-DNA Pre-S1 HBV-M RT-PCR

中圖分類號(hào)：R446.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1003-9082（2016）08-0245-01

乙型肝炎是我國(guó)常見的傳染病之一，嚴(yán)重危害著人類的生命與健康，乙型肝炎病毒是引起乙肝的主要原因，因此乙型肝炎病毒復(fù)制和活動(dòng)情況的判斷對(duì)乙肝患者的診斷和預(yù)后具有十分重要的意義[1]。目前，臨床上對(duì)乙型肝炎病毒血清免疫學(xué)標(biāo)志物（HBV-M）和乙型肝炎病毒前Sl抗原（Pre-S1）進(jìn)行測(cè)定主要采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELSIA），以此作為乙肝病毒復(fù)制和活動(dòng)情況的判斷，但此種方法有其局限性，無法達(dá)到較高的陽性檢出率；隨著分子生物學(xué)和生物化學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）技術(shù)檢測(cè)乙型肝炎病毒基因組（HBV-DNA）被越來越多的應(yīng)用到醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和臨床診斷乙型肝炎，其檢測(cè)結(jié)果可以達(dá)到更高的陽性率[2-3]。

本文抽取427例病毒性肝炎患者的血清標(biāo)本，分別采用ELISA和RT-PCR兩種方法針對(duì)乙型肝炎病毒標(biāo)志物水平進(jìn)行檢測(cè)，主要包括HBV-DNA、Pre-S1和HBV-M，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析比較，判斷更敏感的乙型肝炎病毒標(biāo)志物，用于更好的指導(dǎo)臨床診斷及治療。

一、臨床資料

1.一般資料

427例病毒性肝炎患者，選自2014年1月至2015年7月來我院門診及感染科治療的病毒性肝炎患者，所有的患者均經(jīng)臨床確診。其中，男性患者有279例，女性患者有148例，年齡24-66歲，平均年齡為37.8±1.1歲。上述患者都已經(jīng)排除嚴(yán)重的全身性疾病如心、腎功能不全以及血液性疾病等情況。

2. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析運(yùn)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理和數(shù)據(jù)分析，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P<0.05為存在差異，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1.檢測(cè)方法及儀器設(shè)備

427例病毒性肝炎患者在空腹條件下抽取6mL的靜脈血，然后立即在室溫條件下以1500g離心15min分離出血清，將血清于適當(dāng)?shù)臈l件下保存，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成HBV-DNA、pre-S1和HBV-M三種指標(biāo)的測(cè)定。采用ELISA檢測(cè)Pre-S1和HBV-M，其中HBv-M即乙肝五項(xiàng)，包括乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗體（抗-HBs）、乙型肝炎核心抗體（抗-HBc）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗體（抗-HBe），檢測(cè)試劑盒購(gòu)自中山生物公司，操作步驟按照說明書進(jìn)行。另外，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)HBV-DNA，從血清中提取DNA加入反應(yīng)管，放入擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)結(jié)束后由電腦自動(dòng)分析結(jié)果；PCR擴(kuò)增儀購(gòu)自美國(guó)MJ公司，熒光定量HBV-DNA試劑盒購(gòu)自上?？迫A生物技術(shù)有限公司，反應(yīng)結(jié)束后電腦自動(dòng)分析結(jié)果。

2.患者分組及HBV-DNA陽性指標(biāo)界定

按照HBV-M的ELISA檢測(cè)結(jié)果將所有患者分成5組，Ⅰ組（“大三陽”組）為HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽性，Ⅱ組（“小三陽”組）為HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽性，Ⅲ組為抗-HBs、抗HBe、抗-HBc陽性，Ⅳ組為HBsAg、抗-HBc陽性；Ⅴ組為抗-HBs陽性；未提及者即為陰性。HBV-DNA ≤500copy/mL為陰性，>500copy/mL為陽性，陽性檢測(cè)結(jié)果分為3個(gè)水平，分別是500-104、104-106、>106。

3.結(jié)果

3.1HBV血清標(biāo)志物ELISA檢測(cè)結(jié)果

在427例乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果中，HBV-M檢測(cè)分為五種感染模式，其結(jié)果分別為：Ⅰ組所占百分率為29%（124人），Ⅱ組占有率較高，可達(dá)42.4%（181人）；Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組百分率分別為16.2%（69人）、10.5%（45人）和1.9%（8人），t檢驗(yàn)比較組間差異，p<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Pre-S1的陽性檢出率為73%（312人），其中Ⅰ、Ⅱ組陽性檢出率較高，分別是89%、66.4%，與其余組比較，差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.2HBV-DNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果

HBV-DNA的陽性率為83.1%（355人），其中大三陽組HBV-DNA陽性檢出率高達(dá)94%，而小三陽組HBV-DNA陽性檢出率為72.9%，與其余陽性檢出率較低三組比較，p<0.05，差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而陽性檢出率較低的三組之間比較，差異不顯著，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

三、討論

我國(guó)是乙型肝炎病毒的高發(fā)流行區(qū)域，由于肝炎病毒的入侵，急慢性肝炎患者的肝細(xì)胞受到嚴(yán)重的損害。由于HBV感染早期的臨床表現(xiàn)不典型，大量乙型肝炎患者就診時(shí)已出現(xiàn)并發(fā)癥，這給乙型肝炎的臨床治療帶來了很大的困難，極大地影響患者預(yù)后。因此，選擇準(zhǔn)確和具有特異性的檢測(cè)指標(biāo)對(duì)臨床上提高乙型肝炎的排查率非常關(guān)鍵。乙型肝炎血清標(biāo)志物HBV-M檢測(cè)是目前診斷乙肝最常用的指標(biāo)，其結(jié)果顯示出乙肝病毒在人體內(nèi)的復(fù)制情況及人體對(duì)乙肝病毒的免疫反應(yīng)狀態(tài)以及相應(yīng)的病程轉(zhuǎn)化過程。Pre-S1是HBV前S1基因表達(dá)的產(chǎn)物，與病毒的復(fù)制有著高度的一致性，現(xiàn)在也被用作乙型肝炎的血清標(biāo)志物檢測(cè)而應(yīng)用到臨床實(shí)踐中。HBV-DNA檢測(cè)常用于觀察 HBV的復(fù)制情況及乙肝病人抗病毒治療的效果和傳染性強(qiáng)弱[3]。本研究針對(duì)427例在我院治療的病毒性肝炎患者，分別采用ELISA方法檢測(cè)其乙肝血清標(biāo)志物HBV-M、Pre-S1以及采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)患者血清中的HBV-DNA，通過比較不同組別的陽性檢出率，尋找較敏感準(zhǔn)確的乙肝早期診斷指標(biāo)。

研究結(jié)果顯示，Ⅰ組（大三陽組）124人（29%）中乙型肝炎病毒前Sl抗原89%為陽性，乙型肝炎病毒基因組陽性率為94%；Ⅱ組（小三陽組）181人（42.4%）中，乙型肝炎病毒前Sl抗原66.4%為陽性，乙型肝炎病毒基因組陽性率為72.9%；其余三組感染模式Pre-S1及HBV-DNA陽性檢出率均較低，組間并無顯著差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在臨床上應(yīng)聯(lián)合應(yīng)用HBV-M和Pre-S1、HBV-DNA等多種檢測(cè)手段來共同確診，以提高乙肝陽性檢出率，為更好的治療和控制慢性乙肝患者的病情，降低發(fā)生肝硬化甚至轉(zhuǎn)化為肝癌的風(fēng)險(xiǎn)提供了更有利的理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]鄒繼紅.86例乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果的分析[J]中國(guó)醫(yī)藥指南，2014，12（19）：171-172.

[2]連楚楠，林若玲，林振，等.1128例HBV-DNA定量和乙肝血清學(xué)標(biāo)志物定量結(jié)果之間的相關(guān)性研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)，2013，23（2）：351-354.

[3]羅瀾.HBV-DNA檢測(cè)在乙型肝炎診斷中的價(jià)值分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床2015，12（6）：827-829.