倪 妮，馬格非， 楊 曄

(安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230032)

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地龍顆粒劑的制備工藝及質(zhì)量初步評(píng)價(jià)

倪 妮，馬格非， 楊 曄

(安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230032)

優(yōu)選地龍最佳提取工藝，制備地龍顆粒劑，并對(duì)地龍顆粒劑質(zhì)量進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。正交試驗(yàn)法優(yōu)選出地龍藥材最佳提取工藝條件，濕法制得地龍顆粒，并對(duì)顆粒質(zhì)量進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)。 地龍藥材最佳提取條件：加10倍量水，浸泡40 min，煎煮30 min；以淀粉(m):糊精(m):10%淀粉漿(V):地龍?zhí)崛饪s液(1 g生藥/mL)(V)=7:3:1:1為條件，制備地龍顆粒。結(jié)果表明該提取方法操作簡(jiǎn)單，制備的顆粒劑流動(dòng)性好，不易吸濕，方便保存。

地龍；正交實(shí)驗(yàn)；顆粒；質(zhì)量評(píng)價(jià)

地龍(Lumbricus)為我國(guó)傳統(tǒng)動(dòng)物藥材，其性寒、味咸，歸肝、肺、膀胱經(jīng)，具有清熱定驚、平肝息風(fēng)、平喘、通絡(luò)[3]?，F(xiàn)代藥理研究表明地龍具有止咳平喘、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗炎、降血脂、降壓、抗心律失常、抗凝血、溶血栓等功效[2]。地龍的臨床給藥方式多為以飲片為原料的湯劑。而飲片由于產(chǎn)地、采收、季節(jié)、炮制等原因易造成質(zhì)量不穩(wěn)定，從而影響臨床藥效。同時(shí)，飲片需要煎煮，對(duì)于現(xiàn)在快節(jié)奏的生活方式顯得不相適應(yīng)[3]。本研究通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)法得到地龍最佳提取工藝條件，以該條件提取獲得地龍?zhí)崛∫翰饪s，以濕法制得地龍顆粒，最后對(duì)地龍顆粒進(jìn)行流動(dòng)性、堆密度、吸濕性等進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 儀器、藥品與試劑

1.1 儀 器

烘箱202-1A型，上海陽(yáng)光實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；電子天平AR2202CN型，梅特勒-托利多儀器上海有限公司；D-37520 Osterode 低溫高速離心機(jī)，德國(guó)賽默飛世爾科技公司；757分光光度計(jì)，上海精密科學(xué)儀器有限公司；TH恒溫恒濕試驗(yàn)箱，東莞市泓進(jìn)儀器檢測(cè)有限公司。

1.2 藥品與試劑

地龍，安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，批號(hào) 20151117，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)劉守金教授鑒定為地龍(Lumbricus)干燥體；磷酸，上海蘇懿化學(xué)試劑有限公司；考馬斯亮藍(lán)G-250，天津市光復(fù)細(xì)化工研究所；淀粉、糊精，江蘇強(qiáng)盛化工有限公司；正丁醇，天津市光復(fù)細(xì)化工研究所。

2 方 法

2.1 測(cè)定方法

2.1.1 蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法(考馬斯亮藍(lán)法)[4]

精密吸取100 μg/mL牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，加蒸餾水將終體積補(bǔ)足至1.0 mL，加考馬斯亮藍(lán)G-250溶液5.0 mL，混合均勻，以蒸餾水為空白，595 nm 處測(cè)吸光度，以蛋白濃度(C)對(duì)吸光度值(A)進(jìn)行回歸處理，得回歸方程：A=0.006 C+0.107(R2=0.999)，蛋白濃度在20～100 μg/mL間呈良好線性關(guān)系。

2.1.2 提取率計(jì)算

精密吸取樣品液50 mL至干燥蒸發(fā)皿中，蒸干，105 ℃干燥5 h，移至干燥器中冷卻30 min，稱(chēng)重，按藥材量計(jì)算得率。

2.2 正交實(shí)驗(yàn)

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道可知影響地龍蛋白提取的主要因素有加水量、浸泡時(shí)間、煎煮時(shí)間[5-6]。通過(guò)單因素預(yù)實(shí)驗(yàn)確定各因素影響地龍藥材提取有意義的水平，進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)[7]。

表1 地龍藥材提取工藝L9(34)正交實(shí)驗(yàn)因素水平表

按表1正交因素水平設(shè)計(jì)L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。以蛋白含量和出膏率為指標(biāo)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行方差分析[8]。

2.3 地龍藥材提取濃縮液的制備

地龍藥材剪碎，打粉，稱(chēng)取地龍藥材粉末50 g，加10倍量水，浸泡40 min，煎煮30 min，5000 rpm離心10 min，合并上清液，水浴加熱濃縮至50 mL，得地龍?zhí)崛饪s液。4 ℃保存，備用。

2.4 地龍藥材配方顆粒制備

2.4.1 輔料種類(lèi)的篩選[9]

目前常用的輔料有淀粉、糊精等，本實(shí)驗(yàn)考察了淀粉、糊精兩種單一輔料及淀粉和糊精(1:1)的混合輔料，分別將三種輔料與地龍?zhí)崛饪s液以2:1(w:V)比例混合，在相對(duì)濕度75% 條件下測(cè)定吸濕百分率。

2.4.2 輔料比例的優(yōu)化

為優(yōu)化淀粉和糊精的比例，將二者以不同比例混合，與地龍?zhí)崛饪s液以10 :1混勻，計(jì)算24 h吸濕百分率。

2.4.3 黏合劑用量選擇[10]

本實(shí)驗(yàn)選淀粉漿作為黏合劑，取相同地龍?zhí)崛饪s液及輔料，分別與不同體積10% 淀粉漿混勻，制軟材，過(guò)16目篩，50 ℃干燥30 min，整粒，能通過(guò)10目篩且不能通過(guò)12 目篩的顆粒為成品，以顆粒得率選擇10% 淀粉漿用量。

2.4.4 顆粒中總蛋白含量測(cè)定

稱(chēng)取地龍干燥顆粒1.030 g，加5 mL蒸餾水，使溶解，取上清液1 mL，加考馬斯亮藍(lán)溶液5 mL，混合均勻，595 nm波長(zhǎng)處測(cè) 定吸光值。

2.4.5 地龍顆粒鑒別

取地龍藥材粉末1 g，加水10 mL，加熱至沸，放冷，離心，取上清液作為對(duì)照品，另取地龍藥材顆粒，以相同方法制備供試品，吸取上述2種溶液各3 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇:冰醋酸:水(4:1:1，V : V: V)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰(2015版《中國(guó)藥典》一部地龍藥材項(xiàng)下鑒別方法)。

2.5 地龍顆粒一般檢查

2.5.1 流動(dòng)性的考察

以測(cè)定休止角方法(2015版《中國(guó)藥典》 4 部附錄Ⅺ ⅩC 原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則)考察顆粒的流動(dòng)性，實(shí)驗(yàn)重復(fù)5次，休止角越小，顆粒均勻性越好。

2.5.2 堆密度的考察

取顆粒4.0 g，置10 mL量筒中，手持量筒于5 cm高度落在木板上，反復(fù)5次振動(dòng)后，測(cè)藥粉的容積，計(jì)算堆密度。堆密度越大，顆粒的均勻性越好。

堆密度(g/mL)= 藥粉重量(g)/容積(mL)

2.5.3 吸濕性實(shí)驗(yàn)考察

將地龍顆粒平鋪于干燥的稱(chēng)量瓶中，厚約2 mm，在相對(duì)濕度75%條件下按照吸濕性測(cè)定方法(2015版《中國(guó)藥典》4 部附錄Ⅺ ⅩC 原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則)，分別測(cè)定2、8、24、48、58、82、106、130 h顆粒吸濕百分率。

3 結(jié)果與討論

3.1 地龍?zhí)崛」に囌粚?shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

注：以x1max=100，x1mix=50，y1=50/(x1max-x1mix)x1i+50；以x2max=50，x2mix=0，y2=50/(x2max-x1min)x2i+0；y=y1+y2。

表3 正交實(shí)驗(yàn)方差分析

注：臨界值F0.05(2，2)=19；F0.01(2,2)=99。

由極差分析可知，各因素對(duì)地龍藥材提取的影響為：煎煮時(shí)間(B)>浸泡時(shí)間(C)>加水量(A)；由方差分析結(jié)果可知，各因素對(duì)藥材提取的影響沒(méi)有顯著性差異；綜合考慮，選擇A2B1C2， 即加水量為10倍，煎煮時(shí)間30 min，浸泡時(shí)間40 min為最佳提取條件。且通過(guò)對(duì)該提取條件的驗(yàn)證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該方法重復(fù)性好，穩(wěn)定性高。

3.2 地龍顆粒輔料種類(lèi)篩選結(jié)果

圖1 不同輔料吸濕率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由圖1可以看出，混合輔料與單一輔料糊精相比，可降低吸濕率。從降低吸濕性和經(jīng)濟(jì)角度考慮，選擇糊精:淀粉(1:1)的混合輔料。

3.3 輔料比例的優(yōu)化結(jié)果

表4 不同比例淀粉與糊精的混合輔料篩選結(jié)果

由表4可知，當(dāng)糊精與淀粉以7:3比例混和，藥粉吸濕性最小，故以此為糊精與淀粉混合輔料比例。

3.4 黏合劑用量實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表5 黏合劑10%淀粉漿用量

由表5可知，當(dāng)加入黏合劑的量為500 μL，即藥材提取濃縮液(V):黏合劑(V)為1:1 時(shí)，藥材顆粒得率最高。

3.5 地龍顆?？偟鞍缀繙y(cè)定結(jié)果

表6 地龍顆粒樣品吸光值測(cè)定結(jié)果

由表6結(jié)果可知，1 g地龍藥材顆粒至少含有蛋白成分0.2 mg，結(jié)合提取實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可知1 g地龍藥材顆粒相當(dāng)于0.018 g地龍藥材 。

3.6 地龍顆粒鑒別結(jié)果

圖2 地龍顆粒TLC檢定結(jié)果

由圖2可知，地龍顆粒與原藥材相比，在相應(yīng)位置上，出現(xiàn)相同顏色斑點(diǎn)。

3.7 地龍顆粒一般性檢查結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：該顆粒休止角為(37.300±1.332)°，休止角小于 40°，顆粒流動(dòng)性好，易于分裝。堆密度為(0.453±0.010) g/mL，在相對(duì)濕度75%條件下放置130 h，吸濕增重為0.015%，說(shuō)明顆粒吸濕性較低。

4 結(jié) 論

中藥配方顆粒是以單味中藥飲片為原料，經(jīng)現(xiàn)代工藝提取，濃縮，干燥，制粒等工序精制而成的粉末或顆粒狀制劑，供中醫(yī)臨床配方時(shí)使用，它是湯劑與飲片結(jié)合的最佳體現(xiàn)，既保留了飲片原有的性、味，又融入了湯劑的隨癥加減性質(zhì)，更重要的是符合當(dāng)代人們快節(jié)奏的生活方式。

本實(shí)驗(yàn)主要研究了地龍藥材提取工藝顆粒制備工藝，并對(duì)顆粒質(zhì)量進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)。地龍顆粒提取工藝路線的選擇是依據(jù)地龍傳統(tǒng)水煎的臨床應(yīng)用方式，并綜合有效成分、劑型需要以及生產(chǎn)可行性和生產(chǎn)成本等多方面考慮的結(jié)果。在提取工藝研究中，以蛋白含量、提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，優(yōu)選出最佳地龍?zhí)崛l件，既保留了地龍藥材原有的性質(zhì)，又充分體現(xiàn)了現(xiàn)代中藥新制劑研究的科學(xué)性。從地龍顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢查結(jié)果可以看出，顆粒大小均勻，流動(dòng)性好，且不易吸濕，質(zhì)量穩(wěn)定，易于保存；與藥材相比，較完備的保留了主要成分，且可以定量檢出。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，地龍顆粒劑和原有湯劑的比較，具有質(zhì)量穩(wěn)定、易于保存、服用方便、服用量減少等優(yōu)點(diǎn)，并且其制備工藝簡(jiǎn)單，適合于放大生產(chǎn)。

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Preparation and Quality Evaluation of Lumbricus(Dilong) Granules

NINi,MAGe-fei,YANGYe

(School of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine, Anhui Hefei 230032, China)

The extraction process of lumbricus was optimized to prepare lumbricus granules, and the quality of granules was evaluated.Orthogonal test was used to select the best conditions of lumbricus extraction, lumbricus granules were prepared by wet granulation technique.The quality of granules was preliminary evaluated.The optimal extraction process was as follows: the lumbricus was soaked with 10 times amount of water for 40 min, then decocted for 30 min.The prescription of lumbricus granules contained starch, dextrin, 10% starches, lumbricus extraction (1 g crude drug/mL) with ratio of 7:3:1:1 (w/w/V/V).Those results indicated that the extraction method was simple and the lumbricus granules had good flowability and low moisture absorption.

lumbricus; orthogonal test; granules; quality evaluation

倪妮(1990-)，女，碩士研究生。

馬格非，男，博士，研究方向：心腦血管藥物及制劑。

R944.2+7

B

1001-9677(2016)019-0080-04