張 亞, 王 翀, 劉雙清, 廖曉蘭,3*, 馬文月

(1. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院, 長(zhǎng)沙 410128; 2. 植物病蟲害生物學(xué)與防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 長(zhǎng)沙 410128;3. 湖南省生物農(nóng)藥與農(nóng)藥制劑加工工程技術(shù)研究中心,長(zhǎng)沙 410128; 4. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院, 長(zhǎng)沙 410128)

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湖南省草莓灰霉病菌對(duì)4種殺菌劑的抗藥性檢測(cè)

張 亞1,2, 王 翀4, 劉雙清1, 廖曉蘭1,2,3*, 馬文月1

(1. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院, 長(zhǎng)沙 410128; 2. 植物病蟲害生物學(xué)與防控湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 長(zhǎng)沙 410128;3. 湖南省生物農(nóng)藥與農(nóng)藥制劑加工工程技術(shù)研究中心,長(zhǎng)沙 410128; 4. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院, 長(zhǎng)沙 410128)

為明確湖南省草莓灰霉病菌菌株的抗藥性狀況,2013-2015年從湖南省不同地區(qū)草莓灰霉病病果或病葉上經(jīng)單孢分離獲得草莓灰霉病菌454株,采用最小抑制濃度法(MIC)檢測(cè)不同地區(qū)草莓灰霉病菌株對(duì)多菌靈、腐霉利、異菌脲、嘧霉胺的抗藥性。結(jié)果表明:草莓灰霉病菌對(duì)多菌靈、腐霉利、異菌脲、嘧霉胺的抗性頻率分別為55.73%,77.31%、3.52%和77.31%;所測(cè)菌株對(duì)4種殺菌劑的敏感性類型有CbzRPcmRIpdRPmtR、CbzSPcmRIpdRPmtR、CbzRPcmRIpdSPmtR、CbzSPcmRIpdSPmtS、CbzRPcmSIpdSPmtR、CbzSPcmRIpdSPmtR等6種,其所占比例分別為33.26%、5.07%、41.41%、4.63%、3.96%、11.67%，未發(fā)現(xiàn)對(duì)4種殺菌劑均敏感的類型,表明湖南省草莓灰霉病菌已對(duì)多菌靈、腐霉利和嘧霉胺產(chǎn)生抗藥性,對(duì)異菌脲的抗藥性較低。

草莓; 灰霉病菌; 殺菌劑; 抗藥性

草莓味道鮮美,營(yíng)養(yǎng)豐富,是重要的水果。草莓在生長(zhǎng)的過(guò)程中常受到各種因素的干擾,如:氣候條件、地理環(huán)境、種植制度、各種病蟲害等,其中病害是影響草莓產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素。草莓灰霉病是草莓開花至結(jié)果期發(fā)生最嚴(yán)重的病害,每年引起的經(jīng)濟(jì)損失達(dá)10%～30%,嚴(yán)重的達(dá)89%[1]。迄今為止,尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)草莓灰霉病高抗的品種[2-3]。為有效控制草莓灰霉病的發(fā)生,采用化學(xué)藥劑防治是最有效的手段[4]。目前,生產(chǎn)上主要使用的化學(xué)藥劑有苯并咪唑類殺菌劑多菌靈、二甲酰亞胺類殺菌劑腐霉利和異菌脲、苯氨基嘧啶類殺菌劑嘧霉胺等。由于草莓灰霉病菌遺傳變異頻繁、適合度高、生長(zhǎng)快,連續(xù)使用同一種化學(xué)藥劑,極易使其對(duì)殺菌劑產(chǎn)生抗藥性[5]。國(guó)內(nèi)許多研究已經(jīng)證實(shí)草莓灰霉病菌對(duì)多菌靈、腐霉利、乙霉威、異菌脲等多種化學(xué)藥劑產(chǎn)生了抗藥性[6-9]。法國(guó)、希臘等國(guó)家也有關(guān)于草莓灰霉病菌對(duì)一些農(nóng)藥產(chǎn)生抗藥性的報(bào)道[10-11]。在中國(guó),已有一些地區(qū),如遼寧、河北、河南、山東、江蘇、浙江等,報(bào)道過(guò)草莓灰霉病菌具有抗藥性，還有一些草莓種植區(qū)一直未見灰霉病菌抗藥性的報(bào)道[12-17]。湖南作為草莓生產(chǎn)的重要基地,近十年來(lái)種植面積逐年擴(kuò)大,但湖南位于長(zhǎng)江以南,氣候特征與長(zhǎng)江以北各省顯著不同,尤其在草莓開花結(jié)果期,陰雨連綿,低溫高濕的氣候給草莓灰霉病的發(fā)生和流行創(chuàng)造了條件,加速了草莓灰霉病的發(fā)生。本課題組前期調(diào)查了湖南省不同地區(qū)草莓灰霉病的發(fā)生和防治情況,發(fā)現(xiàn)湖南各地區(qū)草莓灰霉病的發(fā)病率較高,部分地區(qū)病情嚴(yán)重,甚至絕收[18]。為減少草莓灰霉病帶來(lái)的損失,保障草莓的安全生產(chǎn),湖南各地普遍使用多菌靈、腐霉利、異菌脲、嘧霉胺來(lái)控制草莓灰霉病的發(fā)生,不少地區(qū)用藥史超過(guò)20年,但有關(guān)湖南省草莓灰霉病菌抗藥性研究一直未見報(bào)道。本課題組在前期研究的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步明確了湖南省草莓灰霉病對(duì)4種農(nóng)藥的抗藥性、抗藥頻率以及敏感性類型等,旨在為制定防治草莓灰霉病的新方案或措施,以及指導(dǎo)合理用藥提供決策依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株

2013-2015年2-5月分別從湖南的湘南(郴州、永州、衡陽(yáng))、湘中(長(zhǎng)沙、瀏陽(yáng))、湘北(常德、岳陽(yáng))、湘西(張家界、邵陽(yáng))、湘東(湘潭、株洲)等24個(gè)地區(qū)采集草莓灰霉病樣,并進(jìn)行純化獲得純度較高的灰霉病菌菌株(表1)。

1.1.2 供試藥劑

蔗糖,購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;瓊脂,購(gòu)自福建省泉州市泉港化工廠;97%多菌靈原藥(carbendazim),由天津希恩思生化科技有限公司生產(chǎn),用微量0.1 mol/L鹽酸溶解后,無(wú)菌水稀釋配成母液;98%腐霉利原藥(procymidone),由上海阿拉丁生化科技股份有限公司生產(chǎn),用微量丙酮溶解后,無(wú)菌水稀釋配成母液;97%異菌脲原藥(iprodione),由天津希恩思生化科技有限公司生產(chǎn),用微量丙酮溶解后,無(wú)菌水稀釋配成母液;97%嘧霉胺原藥(pyrimethanil),由上海畢得醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn),用微量丙酮溶解后,無(wú)菌水稀釋配成母液。

表1 供試草莓灰霉病菌菌株及其來(lái)源Table 1 Isolates and sources of Botrytis cinerea in this study

1.1.3 供試儀器及常用器皿

SW-CJ-1B超凈工作臺(tái),由蘇州尚田潔凈技術(shù)有限公司生產(chǎn);SYQ-DSX-280B滅菌鍋,由上海申安醫(yī)療器械廠生產(chǎn);MJP-250培養(yǎng)箱,由上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司生產(chǎn);BCD-539WT冰箱,由青島海爾股份有限公司生產(chǎn);ME204G電子天平,由梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司生產(chǎn);鑷子、挑針、打孔器、接種環(huán)、電爐、三角瓶、容量瓶、棕色廣口瓶、封口膜、直尺等為實(shí)驗(yàn)室常用耗材。

1.2 方法

1.2.1 PSA培養(yǎng)基的制備

將馬鈴薯洗凈去皮,稱取200 g并切成小方塊,加水煮沸20～30 min,至能被玻璃棒戳破即可,用四層紗布過(guò)濾,加熱,根據(jù)實(shí)際試驗(yàn)需要加17～20 g瓊脂,繼續(xù)加熱攪拌混勻,待瓊脂溶解完全后,加入蔗糖,攪拌均勻,稍冷卻后再補(bǔ)足水分至1 000 mL,分裝三角瓶,加塞、包扎,置于滅菌鍋中濕熱滅菌(121℃)20 min,冷卻后貯存?zhèn)溆肹19]。

1.2.2 病樣的采集與分離

采用單孢分離法分離病菌。把采集的典型病樣(病果或病葉)置于解剖鏡下,尋找目標(biāo)孢子,最初先在低倍鏡下(4×10)尋找,再在高倍鏡下(40×10)觀察是否為單孢子。找到單個(gè)孢子后,將挑孢針在酒精燈上高溫滅菌,稍待冷卻,用挑孢針把孢子粘上,在酒精燈火焰上方移入試管PSA斜面培養(yǎng)基上,標(biāo)上記號(hào),置于20～23℃恒溫培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)24～48 h,待長(zhǎng)出純菌落,放入4℃冰箱備用[20]。

1.2.3 草莓灰霉病菌對(duì)多菌靈、腐霉利、異菌脲、嘧霉胺的抗藥性測(cè)定

采用最低抑制濃度法(MIC) 檢測(cè)草霉灰霉病菌對(duì)各藥劑的抗藥性[21]。參考周明國(guó)等[21]、韓巨才等[22]、禮茜等[17]、陳仁等[23]的方法并做適當(dāng)?shù)男薷?設(shè)置多菌靈、腐霉利、異菌脲、嘧霉胺的鑒別濃度為:5.0 μg/mL、1.0 μg/mL、5.0 μg/mL、1.0 μg/mL。于PSA培養(yǎng)基約45℃時(shí)加入各藥劑,分別制成含藥平板,將待檢測(cè)的灰霉病菌接在PSA平板上培養(yǎng)3 d后取直徑為5 mm的菌餅移至各含藥平板上,置于22℃培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng)3 d,觀察生長(zhǎng)情況,不能在各藥劑的鑒別濃度下生長(zhǎng)的為敏感菌株,能生長(zhǎng)的為抗性菌株,計(jì)算各地敏感和抗性菌株的發(fā)生頻率。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析

采用Excel軟件分析采集的相關(guān)數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 湖南省草莓灰霉病菌抗性頻率及分布

通過(guò)單孢分離法共從湖南省不同地區(qū)分離得到草莓灰霉病菌454株,其中湘南99株,湘中184株,湘東47株,湘北77株,湘西47株。采用最小抑制濃度法(MIC)測(cè)定各菌株對(duì)多菌靈、腐霉利、異菌脲、嘧霉胺的抗藥性。結(jié)果表明,多菌靈敏感菌株201株,抗性菌株253株;腐霉利敏感菌株103株,抗性菌株351株;異菌脲敏感菌株438株,抗性菌株16株;嘧霉胺敏感菌株103株,抗性菌株351株;湖南省草莓灰霉病菌對(duì)多菌靈、腐霉利、異菌脲、嘧霉胺的抗性頻率平均值分別為55.73%,77.31%、3.52%、77.31%(表2),其中對(duì)腐霉利和嘧霉胺的抗藥性最強(qiáng),多菌靈次之,對(duì)異菌脲的抗藥性較低。分析湖南各地情況,湘中和湘北地區(qū)草莓灰霉病菌的抗藥性最強(qiáng),其對(duì)多菌靈、腐霉利、異菌脲、嘧霉胺的抗性頻率分別為52.71%、85.33%、2.17%、70.65%,85.71%、55.36%、1.79%、83.93%(表2);湘西和湘東地區(qū)草莓灰霉病菌抗藥性次之,湘南地區(qū)的抗藥性最弱。說(shuō)明在湖南省施用腐霉利和嘧霉胺防控草莓灰霉病的效果不佳,多菌靈也不理想,施用異菌脲可能有一定的效果,建議混用或輪用作用機(jī)制不同的農(nóng)藥,提高防病效果。

2.2 湖南省草莓灰霉病菌敏感性類型

由表3可知,根據(jù)抗、感程度不同,可將從湖南省不同地區(qū)分離的454株草莓灰霉病菌分為CbzRPcmRIpdRPmtR(對(duì)多菌靈、腐霉利、異菌脲、嘧霉胺均表現(xiàn)抗性)、CbzSPcmRIpdRPmtR(對(duì)多菌靈表現(xiàn)敏感,對(duì)腐霉利、異菌脲、嘧霉胺表現(xiàn)抗性)、CbzRPcmRIpdSPmtR(對(duì)多菌靈、腐霉利、嘧霉胺表現(xiàn)抗性,對(duì)異菌脲表現(xiàn)敏感)、CbzSPcmRIpdSPmtS(對(duì)多菌靈、異菌脲和嘧霉胺表現(xiàn)敏感,對(duì)腐霉利表現(xiàn)抗性)、CbzRPcmSIpdSPmtR(對(duì)多菌靈和嘧霉胺表現(xiàn)抗性,對(duì)腐霉利和異菌脲表現(xiàn)敏感)、CbzSPcmRIpdSPmtR(對(duì)多菌靈和異菌脲表現(xiàn)敏感,對(duì)腐霉利和嘧霉胺表現(xiàn)抗性)6種類型,其中CbzRPcmRIpdSPmtR類型的菌有188株,所占比例為41.41%,CbzRPcmRIpdRPmtR類型的菌有151株,占33.26%,CbzSPcmRIpdSPmtR類型的有53株,占11.67%,其他敏感性類型按照所占比例從大到小依次為CbzSPcmRIpdRPmtR>CbzSPcmRIpdSPmtS>CbzRPcmSIpdSPmtR,未發(fā)現(xiàn)對(duì)4種殺菌劑均敏感的類型。說(shuō)明湖南省不同地區(qū)草莓灰霉病菌的抗藥性以CbzRPcmRIpdSPmtR為主,不同地區(qū)在防治草莓灰霉病時(shí),連續(xù)施用多菌靈、腐霉利、嘧霉胺,導(dǎo)致草莓灰霉病菌對(duì)這3種藥劑產(chǎn)生抗藥性。異菌脲對(duì)草莓灰霉病菌的防控效果較好,可以與生產(chǎn)上其他藥劑混用或輪用,但不可與腐霉利混用,以免失效。另外,在被檢測(cè)的菌株中,未發(fā)現(xiàn)對(duì)多菌靈、腐霉利、異菌脲、嘧霉胺全部都敏感的菌株,這進(jìn)一步說(shuō)明湖南省各地草莓灰霉病菌對(duì)4種藥劑已普遍產(chǎn)生抗藥性,同時(shí),也說(shuō)明不同地區(qū)莓農(nóng)存在用藥不規(guī)范情況,如:單一使用藥劑,隨意增加用藥量,濫用或亂用藥劑等,這無(wú)形中增大了防治的難度,因此,生產(chǎn)上,應(yīng)堅(jiān)持科學(xué)混用或輪用,或使用新藥劑,延緩病菌產(chǎn)生抗藥性,才能有效提高防病效果。

表2 草莓灰霉病菌對(duì)4種殺菌劑的抗藥性Table 2 Resistance of Botrytis cinerea from strawberry to four fungicides

表3 草莓灰霉病菌對(duì)4種殺菌劑的敏感性類型1)Table 3 Susceptibility types of Botrytis cinereafrom strawberry to four fungicides

1) 多菌靈:Cbz; 腐霉利:Pcm; 異菌脲:Ipd; 嘧霉胺:Pmt; 抗性:R; 敏感:S。

Carbendazim: Cbz; Procymidone: Pcm; Iprodione: Ipd; Pyrimethanil: Pmt; Resistant: R; Susceptible: S.

3 結(jié)論與討論

3.1 草莓灰霉病菌對(duì)4種殺菌劑的抗藥性

本研究表明，湖南省草莓灰霉病菌對(duì)多菌靈、腐霉利、嘧霉胺已產(chǎn)生抗藥性，其抗性頻率分別為55.73%、77.31%、77.31%，如果單獨(dú)施用這3種藥劑控制草莓灰霉病將達(dá)不到應(yīng)有的效果。草莓灰霉病菌對(duì)異菌脲的抗性頻率較低(3.52%)，繼續(xù)施用還可有一定的防效。由于灰霉病菌具有繁殖速度快、變異性大，適應(yīng)能力強(qiáng)的特點(diǎn)，盲目增加用藥量和用藥次數(shù)，極易誘發(fā)病原菌產(chǎn)生抗藥性。周明國(guó)等[21]最早發(fā)現(xiàn)江蘇省草莓灰霉病菌對(duì)多菌靈產(chǎn)生了抗性，其抗性頻率為37.69%。潘以樓等[16]2013年的研究結(jié)果顯示江蘇省草莓灰霉病菌對(duì)多菌靈和異菌脲的抗性比湖南高，其抗性頻率分別為67.5%和63.6%，但對(duì)腐霉利的抗性比湖南低，其抗性頻率僅為11.2%。劉圣明等[14]認(rèn)為河南省番茄灰霉病菌對(duì)多菌靈和腐霉利的抗藥頻率為81.29%和80.58%，明顯高于湖南省草莓灰霉病菌對(duì)這兩種藥劑的抗性頻率，這可能跟不同省份的用藥史和用藥水平不同有關(guān)。禮茜等[17]發(fā)現(xiàn)浙江省建德市草莓灰霉病菌對(duì)異菌脲的抗性頻率達(dá)17.5%，顯著高于湖南地區(qū)。宋晰等[24]的研究表明，內(nèi)蒙古和遼寧的灰霉病菌對(duì)腐霉利的抗性頻率超過(guò)90%，顯著高于其他省份。韓巨才等[22]研究了山西省灰霉病菌對(duì)多菌靈和腐霉利的抗藥性，發(fā)現(xiàn)晉南地區(qū)抗藥性較高。紀(jì)明山等[12]研究了遼寧省各地番茄灰霉病菌對(duì)嘧霉胺的抗藥性，結(jié)果表明灰霉病菌對(duì)嘧霉胺存在抗藥性，抗性頻率為20%。張瑋等[25]研究了國(guó)內(nèi)不同省份葡萄灰霉病菌對(duì)嘧霉胺的抗藥性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各地區(qū)的葡萄灰霉病菌對(duì)嘧霉胺均存在抗性，而且抗性頻率最高可達(dá)44.23%，建議限制其使用，或者輪用，以減緩抗藥性。劉超等[15]研究了山東省各地灰霉病菌對(duì)腐霉利的抗藥性，結(jié)果表明山東省各地灰霉病菌的抗性頻率為67.69%，但只發(fā)現(xiàn)了中、低抗菌株，未發(fā)現(xiàn)高抗菌株。綜上所述，我國(guó)草莓灰霉病菌抗藥性的產(chǎn)生與各地地理特征有一定的相關(guān)性，但無(wú)必然性，不論從北到南，還是從西到東，隨著緯度和地勢(shì)的降低，溫濕條件更有利于病害的發(fā)生。不科學(xué)用藥導(dǎo)致病菌普遍產(chǎn)生抗藥性。

3.2 草莓灰霉病菌對(duì)4種殺菌劑敏感性類型

本研究發(fā)現(xiàn)，湖南省草莓灰霉病菌對(duì)多菌靈、腐霉利、異菌脲和嘧霉胺的敏感性類型有6種，分別為CbzRPcmRIpdRPmtR、CbzSPcmRIpdRPmtR、CbzRPcmRIpdSPmtR、CbzSPcmRIpdSPmtS、CbzRPcmSIpdSPmtR、CbzSPcmRIpdSPmtR，其中以CbzRPcmRIpdSPmtR類型為主，所占比例為41.41%，未發(fā)現(xiàn)對(duì)4種藥劑都敏感的菌株，說(shuō)明湖南省草莓灰霉病菌對(duì)4種藥劑已普遍產(chǎn)生了抗藥性。由于我國(guó)各地地理特征、環(huán)境條件、農(nóng)民的安全意識(shí)水平不同，在科學(xué)用藥方面差異很大，不同地區(qū)的灰霉病菌對(duì)不同藥劑的敏感類型也不同。劉圣明[14]等研究了河南地區(qū)番茄灰霉病菌對(duì)多菌靈、腐霉利、乙霉威的抗性，發(fā)現(xiàn)共有6種表現(xiàn)型，其中以BenRDicRNPCR類型為主，所占比例為71.22%。喬廣行等[26]認(rèn)為北京地區(qū)的灰霉病菌對(duì)多菌靈、腐霉利和乙霉威的抗性表現(xiàn)類型共有4種，以BenRDicRNPCR類型為主，所占比例為56.22%。潘以樓等[16]認(rèn)為江蘇地區(qū)草莓灰霉病菌對(duì)腐霉利、多菌靈、乙霉威、異菌脲、嘧霉胺5種藥劑的敏感性類型主要有17種，其中對(duì)多菌靈、異菌脲、嘧霉胺表現(xiàn)抗藥性及對(duì)腐霉利、乙霉威表現(xiàn)敏感的菌株共有63個(gè)，所占比例為30.6%，而且敏感性類型明顯比河南、湖南、福建地區(qū)豐富。不同地區(qū)敏感性類型不同，說(shuō)明各地在用藥歷史，用藥水平、施藥方法、氣候特征、栽培條件等存在差異。而各地敏感性類型的多少常跟被測(cè)試藥劑多少有關(guān)。目前，各地檢測(cè)的敏感性類型在6～20種之間，有些藥劑在生產(chǎn)上應(yīng)用了很久，但未被檢測(cè)，而且全國(guó)范圍內(nèi)的敏感性類型屬于哪種，還有待今后深入研究。

通過(guò)本研究結(jié)果可知，湖南省草莓灰霉病菌已對(duì)多菌靈、腐霉利、嘧霉胺產(chǎn)生抗性，但其抗性分子機(jī)制尚不清楚，需要今后重點(diǎn)研究。

3.3 草莓灰霉病菌對(duì)殺菌劑的交互抗性

植物病原菌對(duì)一種農(nóng)藥產(chǎn)生抗藥性后，對(duì)另外一種或幾種作用機(jī)理相同或類似的農(nóng)藥也產(chǎn)生抗性稱為交互抗性。有研究證實(shí)腐霉利和異菌脲存在交互抗性[17]，而本研究檢測(cè)的454株草莓灰霉病菌對(duì)腐霉利的抗性頻率為77.31%，高于50%；對(duì)異菌脲的抗性頻率僅為3.52%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于20%，抗藥性較弱，并不完全表現(xiàn)交互抗性。本研究的結(jié)果與潘以樓等[16]的結(jié)果一致。這兩種藥劑的作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。另外，病菌產(chǎn)生交互抗性后衍生的一些問(wèn)題，如除輪用或混用外，如何減弱交互抗藥性，如何恢復(fù)病菌的敏感性等也是未來(lái)研究的重要課題。

3.4 草莓灰霉病菌對(duì)4種殺菌劑的多重抗藥性

關(guān)于草莓灰霉病菌對(duì)腐霉利、多菌靈、乙霉威、異菌脲、嘧霉胺等藥劑存在單抗的研究較多[6-9]，對(duì)腐霉利和多菌靈、異菌脲和多菌靈、乙霉威和多菌靈等藥劑存在雙抗的報(bào)道也有不少[22,27-28]，但是草莓灰霉病菌對(duì)多種藥劑的多抗性研究的報(bào)道還較少。本研究結(jié)果表明，草莓灰霉病菌對(duì)多菌靈、腐霉利、異菌脲、嘧霉胺都產(chǎn)生抗藥性的菌株為151株，占所測(cè)菌株的33.26%，三重抗性菌株211株，占所測(cè)菌株的46.48%，雙抗菌株71株，占所測(cè)菌株的15.63%，單抗菌株21株，占所測(cè)菌株的4.63%。潘以樓等[16]研究了江蘇地區(qū)草莓灰霉病菌對(duì)5種殺菌劑的抗藥性，發(fā)現(xiàn)該地區(qū)存在對(duì)多菌靈、腐霉利、異菌脲和嘧霉胺同時(shí)具有抗性的菌株，但所占比例較低，而對(duì)5種藥劑中3種或2種同時(shí)具有抗性的菌株所占比例較大，單抗菌株所占的比例相對(duì)較少。江蘇和湖南同在長(zhǎng)江流域，在草莓開花結(jié)果期，低溫高濕病害發(fā)生相對(duì)較重，而莓農(nóng)急于控制病害，會(huì)頻繁施藥進(jìn)行防治，由于使用的殺菌劑類型較多，致使菌株產(chǎn)生多重抗藥性。

我國(guó)有關(guān)草莓灰霉病菌多抗性的研究還不系統(tǒng)，雖然已進(jìn)行了一些相關(guān)研究，但還存在不少問(wèn)題，如：缺少單抗或多抗的檢測(cè)技術(shù)規(guī)范；一些地區(qū)，如新疆、青海、西藏、云南等是否存在抗藥性菌株尚缺乏權(quán)威性報(bào)道，有待今后進(jìn)一步調(diào)查研究。

3.5 草莓灰霉病菌新殺菌劑的篩選

近年來(lái)，不少地區(qū)報(bào)道采用常規(guī)藥劑防治草莓灰霉病的效果不理想或者無(wú)效。草莓灰霉病菌產(chǎn)生抗藥性是導(dǎo)致防效下降的主要原因之一。河南地區(qū)灰霉病菌已對(duì)多菌靈、腐霉利、乙霉威產(chǎn)生了三重抗性[14]。江蘇地區(qū)草莓灰霉病菌對(duì)腐霉利、多菌靈、乙霉威、異菌脲、嘧霉胺5種常用藥劑產(chǎn)生了多重抗性[16]。為及時(shí)解決這一問(wèn)題，不少研究機(jī)構(gòu)開始著手研制新的藥劑，如：氟啶胺、咯菌腈、啶酰菌胺、嘧菌環(huán)胺、丙烷脒，以及一些微生物次生代謝產(chǎn)物(包括抗菌蛋白、抗菌肽、抗生素、生物堿等)和植物源代謝產(chǎn)物(包括植物精油等)等[29-34]。然而這些新藥劑在應(yīng)用時(shí)仍有一些問(wèn)題值得探討：①新藥劑和老藥劑之間是否存在交互抗性或負(fù)交互抗性；②病菌本身的抗性頻率及其突變體的適合度；③病菌對(duì)新藥劑的敏感性。在生產(chǎn)上，應(yīng)堅(jiān)持將作用機(jī)理不同的藥劑輪用或交替使用，以提高對(duì)草莓灰霉病的防治效果。

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(責(zé)任編輯：楊明麗)

Detection of the resistance ofBotrytiscinereaon strawberry in Hunan Province to four fungicides

Zhang Ya1,2, Wang Chong4, Liu Shuangqing1, Liao Xiaolan1,2,3, Ma Wenyue1

(1. College of Plant Protection, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China; 2. Hunan Provincial Key Laboratory for Biology and Control of Plant Diseases and Insect Pests, Changsha 410128, China; 3. Hunan Biological Pesticides and Pesticide Preparation Processing Engineering Technology Research Center, Changsha 410128, China; 4. Science College of Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China)

To investigate the resistance ofBotrytiscinereato carbendazim, procymidone, iprodione and pyrimethanil, 454 strains ofB.cinereawere collected from the diseased strawberry fruits or leaves in different regions of Hunan Province in 2013-2015 and resistance to the four fungicides were detected by minimal inhibitory concentration (MIC) method. The results showed that the resistance frequency of carbendazim, procymidone iprodione and pyrimethanil was 55.73%,77.31%, 3.52% and 77.31%, respectively. The susceptibility types were CbzRPcmRIpdRPmtR, CbzSPcmRIpdRPmtR, CbzRPcmRIpdSPmtR, CbzSPcmRIpdSPmtS, CbzRPcmSIpdSPmtR, CbzSPcmRIpdSPmtR, accounting for 33.26%, 5.07%, 41.41%, 4.63%, 3.96% and 11.67%, respectively. There was no type to be found that showed susceptible to all four fungicides. The results suggest thatB.cinereaon strawberry plants in Hunan has produced resistance to carbendazim, procymidone and pyrimethanil,but susceptible to iprodione. Therefore, it is urgent to apply new fungicide or alternate fungicide with different mechanism to controlB.cinerea.

strawberry;Botrytiscinerea; fungicide; resistance

2015-09-09

2015-11-05

公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201303025)

S 436.68

A

10.3969/j.issn.0529-1542.2016.05.032

* 通信作者 E-mail:lxllxl423@163.com