莊光 陳祥珍

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小鵝瘟病毒抗原免疫雞對(duì)蛋黃抗體產(chǎn)生規(guī)律的實(shí)踐

莊光1陳祥珍2

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小鵝瘟疫是一種發(fā)生在3周齡以內(nèi)雛鵝身上的亞急性或急性的敗血傳染性疾病，這種病毒具有傳染速度快、致死亡率高、發(fā)病率高的特征。基于此，通過(guò)向產(chǎn)蛋雞注射不同劑量的小鵝瘟病毒抗原的試驗(yàn)，來(lái)尋找抗體產(chǎn)生的規(guī)律，創(chuàng)造一種高質(zhì)量、高效率的抗體方法，降低養(yǎng)鵝的風(fēng)險(xiǎn)。

小鵝瘟病毒；免疫；抗體

小鵝瘟病毒是一種發(fā)生在雛鵝身上的急性或亞急性敗血傳染病，這種病毒主要產(chǎn)生于3周左右的雛鵝身上，具有高死亡率、高傳播率、高發(fā)病率的特征［1］。該文闡述的試驗(yàn)是對(duì)蛋雞注射不同劑型的小鵝瘟病毒免疫抗原，從蛋黃中檢測(cè)抗體產(chǎn)生的規(guī)律，為研究小鵝瘟病蛋黃抗體提供資料。

1 蛋黃抗體的簡(jiǎn)介

蛋黃抗體是指蛋黃中存在的抗體，也稱蛋黃免疫球蛋白。科學(xué)家在鳥(niǎo)類(lèi)的血液循環(huán)中發(fā)現(xiàn)了3種免疫球蛋白。母雞在細(xì)胞分裂產(chǎn)蛋的過(guò)程中，會(huì)將其免疫球蛋白轉(zhuǎn)移至雞蛋；母雞血漿中的IgA與IgM，會(huì)在輸卵管中與其他的蛋白質(zhì)結(jié)合而構(gòu)成雞蛋蛋白部分。比較特別的是，在成熟期中，血清IgG會(huì)經(jīng)蛋黃薄膜轉(zhuǎn)移到蛋黃中，蛋黃的IgG與哺乳類(lèi)的IgG在分子量、等電點(diǎn)、細(xì)胞膜上Fc受質(zhì)的鍵結(jié)構(gòu)上存在著相異點(diǎn)而被特定稱為IgY。雞卵黃免疫球蛋白G抗體是一種7S免疫球蛋白，與哺乳動(dòng)物IgG略有不同。該蛋白質(zhì)分子量約為180 KDA，含2個(gè)亞單位，即67-70KDA的重鏈和22-30KDA的輕鏈，存在于免疫后母雞的卵黃中。

2 材料和試劑

水劑抗原體，滅活的小鵝瘟病毒絨尿液與生理鹽水按照1∶1的比例稀釋。油劑抗原體，滅活的小鵝瘟病毒絨尿液與礦物油按照1∶1的比例混合在一起。標(biāo)準(zhǔn)劑量的小鵝溫瓊擴(kuò)診斷抗原體。挑選健康的可以產(chǎn)蛋的雞35只。

瓊擴(kuò)平板：將1.0 g的優(yōu)質(zhì)瓊脂粉添加到含8%氯化鈉的溶液中，將混合液進(jìn)行加熱待完全溶化后再加入濃度約為0.01%的硫柳貢防腐，澆制凝膠板，冷卻后放置在溫度約為4℃的空間內(nèi)保存。

表1 第一次免疫后蛋黃中的抗體水平

表2 第二次免疫后蛋黃中的抗體水平

3 試驗(yàn)方法

3.1 免疫的方式方法

將35只雞分在7個(gè)雞籠中，每籠5只雞，給挑選出的35只健康雞注射抗原體，用肌肉注射的方式給每只雞注射水劑抗原體1 mL。每天都要注射，從第6天開(kāi)始，每隔3、5 d就取雞蛋進(jìn)行測(cè)驗(yàn)，當(dāng)雞的免疫力降到log2時(shí)開(kāi)始注射二次疫苗。在進(jìn)行第2次疫苗接種時(shí)，將7籠進(jìn)行分類(lèi)注射，前3籠的雞只給注射1 mL的水劑抗原體，后4籠的雞只注射1 mL的油劑抗原體。

3.2 抗體的檢測(cè)方式

在免疫前后要檢測(cè)蛋黃中的抗小鵝瘟病毒瓊擴(kuò)抗體，將每組產(chǎn)出的雞蛋具體細(xì)化分組，在每只雞蛋中取相同等量的蛋黃，按照1∶1的比例將蛋黃混合在一起并稀釋，等到離心棄脂肪后取出蛋液留作檢測(cè)。再將瓊擴(kuò)抗體凝膠板按照中央1孔，外圍6孔的方式進(jìn)行打孔，孔徑要控制在3 mm左右，間距約為4 mm，加入的樣本量為25 μL，并將樣本做陰陽(yáng)性的血清對(duì)照。加入樣本后放置在恒溫為37℃的濕度空間內(nèi)進(jìn)行雞蛋孵卵24 h，再在室內(nèi)放置24～48 h。根據(jù)初步的觀察現(xiàn)象可以判斷出的結(jié)果為：蛋黃抗體的效價(jià)就是在標(biāo)準(zhǔn)抗原體形成的白色沉淀線的最大抗體稀釋倍數(shù)值。

4 試驗(yàn)過(guò)程與結(jié)果

4.1 試驗(yàn)過(guò)程

取出小鵝瘟病毒水劑抗原體，給35只普通雞翅下肌肉注射陰性的1 mL小鵝瘟病毒抗原瓊擴(kuò)抗體，據(jù)觀察發(fā)現(xiàn)35只雞并未出現(xiàn)應(yīng)激的現(xiàn)象，雞群仍在正常的生活、產(chǎn)蛋。注射后按時(shí)收集雞蛋并對(duì)蛋黃進(jìn)行檢測(cè)，推斷抗小鵝瘟病毒的蛋黃抗體水平。

第27天檢測(cè)發(fā)現(xiàn)雞蛋中蛋黃抗小鵝瘟病毒體的抗體滴已經(jīng)下降到了log2，則需要給雞群進(jìn)行分組注射，第2次注射要按照分組的形式注射不同的抗原體，前3組注射水劑抗原體，后4組注射油劑抗原體。將收集到的雞蛋進(jìn)行分組并按照1∶1的比例稀釋，等到蛋黃離心棄脂肪后取出蛋液進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)的結(jié)果具體如表1和表2所示。

4.2 試驗(yàn)結(jié)果

①水劑抗原體在第1次使用后，在第6天達(dá)到了有效的治療效果，其當(dāng)時(shí)的小鵝瘟病毒抗體效價(jià)約為2.8log2，平均抗體水平為5.7log2。

②第1次使用的水劑型抗原體對(duì)小鵝瘟病毒的抵抗時(shí)間為20 d左右，20 d后蛋黃的抗體水平在逐漸下降，已不能抵抗小鵝瘟病毒。等到27 d后就檢測(cè)不到蛋黃中的抗體水平。

③第2次免疫的劑型分為水劑和油劑，水劑型抗原體在再次免疫后，蛋黃的抗體水平有所上升，然后不再變化。油劑型抗原體注射后，蛋黃的抗原體水平上升的比較快且可以持續(xù)很久。

5 結(jié)語(yǔ)

本次試驗(yàn)采用水劑型和油劑型2種抗原體，在第1次注射后雞群可以在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生蛋黃抗原體，當(dāng)抗體水平下降到一定值的時(shí)候用油劑型與水劑型開(kāi)始第2次注射，第2次注射后就產(chǎn)生了區(qū)別，油劑型抗原體對(duì)蛋黃抗體的產(chǎn)生效果較好。

［1］蘭信海，馮永勝，衣服德，等.雞抗小鵝瘟精致高免蛋黃抗體的研制［J］.山東畜牧獸醫(yī)，2011（4）：15-16.

S858.33

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