溫柔，席建元*，謝汶芳，李小鵬，祁林，陳偶英

（1.湖南省瀏陽市人民醫(yī)院，湖南瀏陽410300；2.湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，湖南長沙410007；3.湖南中醫(yī)藥大學，湖南長沙410128）

銀屑平丸對尋常型銀屑病患者皮損中STAT3和P-STAT3表達的影響

溫柔1，席建元2*，謝汶芳2，李小鵬2，祁林2，陳偶英3

（1.湖南省瀏陽市人民醫(yī)院，湖南瀏陽410300；2.湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，湖南長沙410007；3.湖南中醫(yī)藥大學，湖南長沙410128）

目的通過觀察銀屑平丸對尋常型銀屑病患者皮損中STAT3（信號轉導與轉錄活化因子3）和P-STAT3（磷酸化信號轉導與轉錄活化因子3）表達的影響，探討銀屑病的發(fā)病機制及銀屑平丸治療尋常型銀屑病的作用靶點。方法21例尋常型銀屑病患者予口服銀屑平丸治療，療程8周。用免疫組化法檢測其治療前后皮損STAT3、P-STAT3的表達，并與20例整形切除術后的正常皮膚相比較。結果銀屑平丸治療組治療前皮損STAT3、P-STAT3的平均灰度值與正常組相比，其表達明顯升高（P＜0.01）；治療后皮損STAT3、P-STAT3的平均灰度值較治療前表達明顯下降（P＜0.05）。治療組治療前后STAT3、P-STAT3的表達呈正相關（P＜0.05）。結論在尋常型銀屑病中存在STAT3、P-STAT3的高表達，證實尋常型銀屑病的發(fā)生、發(fā)展與兩者相關。銀屑平丸通過降低皮損中STAT3、P-STAT3的表達水平，調(diào)節(jié)銀屑病中角質形成細胞的增殖和細胞凋亡，改善銀屑病對機體的損傷。

尋常型銀屑??；銀屑平丸；STAT3；P-STAT3；生地黃；丹皮；白花蛇舌草

銀屑病是一種以紅斑和鱗屑為主要臨床表現(xiàn)的慢性皮膚病，國內(nèi)外學者對其病因、病機進行了大量研究，STAT3（信號轉導與轉錄活化因子3）、PSTAT3（磷酸化信號轉導與轉錄活化因子3）具有調(diào)節(jié)細胞增殖、分化、凋亡等生物學活性，本研究通過免疫組化檢測尋常型銀屑病患者皮損中STAT3、PSTAT3的表達，以探討銀屑病的發(fā)病機制和銀屑平丸治療尋常型銀屑病的作用靶點。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2014年1月至2014年8月在湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院皮膚科門診收集的尋常型銀屑病患者21例為治療組，整形美容科皮膚正常者20例為正常組。治療組男性11例，女性10例，年齡19～60歲，平均（37.38±14.17）歲，病程6～18個月；正常組男性10例，女性10例，年齡20～59歲，平均（36.81± 13.02）歲。兩組年齡、性別差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 病例選擇

1.2.1 西醫(yī)診斷標準參照《中國臨床皮膚病學》[1]中尋常型銀屑病進行期診斷標準：（1）皮損以紅色大小不一的斑丘疹、斑片為主，上覆蓋銀白色鱗屑，刮除后可見發(fā)亮的半透明薄膜，剝?nèi)ケ∧こ霈F(xiàn)多個篩狀出血點。（2）不斷出現(xiàn)新發(fā)皮疹，色鮮紅，鱗屑增多，自覺不同程度的瘙癢，可見“同形反應”。

1.2.2 中醫(yī)診斷標準參照《中藥新藥臨床研究指導原則》[2]診斷：皮損以紅色丘疹、斑片為主，表面覆蓋大量鱗屑，瘙癢程度不一，篩狀出血點明顯，可伴有心煩口渴，小便色黃，舌質紅，苔薄黃或黃，脈滑數(shù)等。

1.2.3 納入標準（1）符合中西醫(yī)診斷標準；（2）患者年齡在18～60歲；（3）在3個月內(nèi)未服用糖皮質激素、免疫抑制劑及其他系統(tǒng)治療銀屑病的藥物，同時1個月內(nèi)未予銀屑病外用藥物及儀器治療；（4）不伴有其他類型皮膚病及腫瘤或系統(tǒng)性內(nèi)臟疾??；（5）自愿參加，簽署知情同意書。

1.2.4 排除標準（1）對研究的中藥制劑成分或皮膚活檢時麻醉藥物過敏；（2）病情不斷加重或合并發(fā)展到膿皰型、紅皮病型、關節(jié)型的患者，以及需要使用全身性系統(tǒng)藥物治療的患者；（3）妊娠或哺乳期婦女。

1.3 治療方法

治療組：口服銀屑平丸（湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院制劑室提供，藥物組成：生地黃、丹皮、丹參、紫草、半枝蓮、大青葉、白花蛇舌草、女貞子、旱蓮草、麥冬、白鮮皮、山藥、甘草等），15 g/次，3次/d。療程為8周。治療期間不使用相關外用藥物，囑患者在服藥期間盡量保持清淡飲食、勿食辛辣，禁魚腥發(fā)物，有充足的休息時間，保持情緒穩(wěn)定，預防感冒，忌水溫過高刺激皮膚等。

1.4 STAT3、P-STAT3表達檢測

1.4.1 標本采集治療組治療前后取軀干四肢部皮損約1.2 cm×0.6 cm大小，正常組取軀干、四肢部疤痕植皮修復術后多余正常皮膚，標本均保存在10%中性甲醛溶液中，將所有標本收集完整后做石蠟包埋、病理切片，常規(guī)HE染色。

1.4.2 檢測方法兩組標本通過免疫組化法檢測STAT3、P-STAT3的表達。具體操作參照PV-9 000免疫組化法，實驗用試劑盒：STAT3、P-STAT3兔多克隆抗體（由北京中杉金橋公司提供），通用型二步法檢測試劑盒（由北京中杉金橋公司提供）。STAT3陽性染色主要位于細胞核及胞漿，呈褐色或棕黃色顆粒，P-STAT3陽性定位于細胞核，呈棕黃色或褐色顆粒，標本免疫反應的量化評估采用灰度分析法。通過CMIASWIN醫(yī)學彩色圖像分析系統(tǒng)，每張切片在400倍光鏡下隨機選取5個視野，計算測試區(qū)域的平均灰度值，作為標本的陽性系數(shù)，灰度級別為0-255，平均灰度值越小表示免疫組化目標因子表達水平越高。

1.5 統(tǒng)計學分析

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析。計量資料用“±s”表示，符合正態(tài)分布和方差齊性采用t檢驗。雙變量相關分析：符合正態(tài)性采用直線相關分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組皮膚組織STAT3、P-STAT3的表達光鏡圖

STAT3陽性定位于銀屑病皮損表皮全層或中下層的角質形成細胞胞核及胞漿中，正常對照組中僅少量基底層細胞呈陽性表達；P-STAT3陽性定位于銀屑病皮損表皮的基底層、棘層、顆粒層的細胞核中，正常對照組中幾乎陰性表達。見圖1。

2.2 兩組STAT3、P-STAT3表達比較

治療組治療前皮損STAT3、P-STAT3平均灰度值與正常組比較，差異均有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；治療后與正常組比較，差異亦有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；治療組治療后皮損STAT3、P-STAT3的平均灰度值與治療前比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。提示銀屑病患者皮損中STAT3、P-STAT3的表達水平較正常皮膚有異常增高，銀屑平丸可下調(diào)患者皮損STAT3、P-STAT3的表達。見表1。

圖1 兩組皮膚組織STAT3、P-STAT3的表達光鏡圖（HE染色，×400）

表1 兩組STAT3、P-STAT3的平均灰度值比較（±s）

表1 兩組STAT3、P-STAT3的平均灰度值比較（±s）

注：與正常組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與治療前比較#P＜0.05。

組別例數(shù)STAT3P-STAT3治療組治療前治療后正常組21 21 20 100.43±6.79** 190.06±12.54*#207.88±8.05 107.73±10.24** 193.34±12.28*#201.30±13.37

2.3 治療前后皮損STAT3、P-STAT3表達的相關性

治療前后皮損STAT3與P-STAT3的平均灰度值均呈正相關（r分別為0.834、0.689，P＜0.05）。

3 討論

銀屑病是一種常見的慢性、復發(fā)性炎癥性皮膚病，其病理生理的一個重要特點是表皮基層角質形成細胞（KC）增殖加速，絲狀分裂周期縮短。STAT3是信號轉導和轉錄活化因子家族成員之一，具有多種重要的生物學活性，與炎癥反應、細胞轉化、增殖、細胞凋亡、血管生成、腫瘤轉移等有關。許多學者研究發(fā)現(xiàn)銀屑病患者皮損中可檢測到激活的STAT3，參與細胞的增殖、凋亡等；P-STAT3是STAT3的活化形式，活化的STAT3進入細胞核內(nèi)與特定的靶基因DNA應答元件結合，調(diào)節(jié)基因轉錄，誘導Bcl-2、survivin、Bcl-xl、Mcl-1等抗凋亡基因和c-Myc、cyclin D1及VEGF等調(diào)控細胞周期基因的表達[3]。已有研究表明[4-5]，銀屑病角質形成細胞（KC）的異常增生與STAT3的活化有關，Blumberg等[6]研究發(fā)現(xiàn)在銀屑病患者皮膚中存在STAT3信號途徑的過度表達，并且在IL-10相關細胞因子IL-20作用下被激活，活化的STAT3蛋白可能通過促進細胞增殖，抑制細胞凋亡參與銀屑病角質形成細胞的異常增生，從而促進了銀屑病的發(fā)病。

銀屑平丸是本院長期治療銀屑病的經(jīng)驗用方，以清熱解毒為主，兼以涼血養(yǎng)陰、活血化瘀。在前期的動物實驗研究中，銀屑平丸的作用機制可能與抗炎、改善微循環(huán)、調(diào)節(jié)免疫等機制相關[7]。本研究從細胞增殖、凋亡范疇進一步探討銀屑平丸的作用機制，結果顯示，在尋常型銀屑病中STAT3、P-STAT3的表達異常增高，銀屑平丸干預后，STAT3、PSTAT3的表達均有所下降，治療前后皮損中STAT3與P-STAT3的表達呈正相關，提示銀屑平丸可能通過降低皮損中STAT3、P-STAT3的表達水平參與尋常型銀屑病的治療過程。

臨床上應用中藥治療銀屑病具有獨特優(yōu)勢，探討中藥治療尋常型銀屑病及其可能的作用機制研究顯得尤為重要。隨著研究的深入，不斷探索銀屑平丸治療尋常型銀屑病的治療靶點，將為患者提供一種安全可靠、療效確切、經(jīng)濟便利的內(nèi)服藥物。

[1]趙辨.中國臨床皮膚病學[M].第4版.南京：江蘇科學技術出版社，2009：1 166.

[2]鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導原則[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2002：299-302.

[3]Niu G，Wright KL，Huang M，et al.Constitutive STAT3 activity upregulates VEGF expression and tumor angiogenesis[J].Oncogene，2002，21：2000-2008.

[4]Sano Chan KS，Di Giovanni J.Impact of STAT3 activation upon skinbiology：adichotomyofitsrolebetweenhomeostasis and diseases[J].J Dermatol Sci，2008，50（1）：1-14.

[5]Wolk K，Haugen HS，Xu W，et al.IL-22 and IL-20 are key mediarorsof the Epidermal alterations in psoriasis while IL-17 and IFN-gamma are not[J].J Mol Med，2009，87（5）：523-536.

[6]Blumberg H，Conklin D，Xu WF，et al.Interleukin 20：discovery receptor identification，and role in epidermal function[J].Cell，2001，104（1）：9-19.

[7]席建元，陶璇，李小鵬，等.銀屑平丸治療尋常型銀屑病的療效及對血清IL-8的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學學報，2012，32（1）：51-53.

（本文編輯馬薇）

Effects of Yinxieping Pills on STAT3 and P-STAT3 Expression in Patients with Psoriasis Vulgaris Lesions

WEN Rou1,XI Jianyuan2*,XIE Wenfang2,LI Xiaopeng2,QI Lin2,CHEN Ouying3
(1.Liuyang People's Hospital,Liuyang,Hunan 410300,China；2.The First Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China)

Objective To investigate the psoriasis pathogenesis and action target in the treatment of vulgaris psoriasis by observing Yinxieping pills on the expression of STAT3 and P-STAT3 in patients with psoriasis vulgaris lesions.Methods 21 patients with psoriasis vulgaris were given Yinxieping pills for oral administration，the course for 8 weeks.The expression of STAT3 and P-STAT3 before and after treatment were detected by immunohistochemical method，which was also comapared with the normal skin of 20 cases with plastic surgery and resection.Results Compared with normal group，the expression of STAT3 and P-STAT3 in patients with psoriasis vulgaris was significantly higher than that in normal group（P＜0.001），and the expression of STAT3 and P-STAT3 after treatment was significantly decreased（P＜0.05）.The expression of P-STAT3 and STAT3 was positively correlated（P＜0.05）.Conclusion The abnormal expression of P-STAT3 and STAT3 in psoriasis vulgaris is higher，which is related to the occurrence and development of psoriasis vulgaris.Yinxieping pills can improve psoriasis on the body damage by reducing the expression of STAT3 and P-STAT3 in the lesions and regulating keratinocytes in psoriasis formation of cell proliferation and apoptosis.

psoriasis vulgaris；Yinxieping pills；STAT3；P-STAT3；fresh rehmannia；cortex moutan；oldenlandia

R275.1；R758.63

B

doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2016.03.019

2015-09-25

湖南省科技廳科研項目（2013FJ6077）。

溫柔，女，碩士，醫(yī)師，研究方向：皮膚性病學。

*席建元，男，主任醫(yī)師，碩士研究生導師，E-mail：xijianyuan2010@126.com。