趙松峰 張亞玲 張 曉 師秀琴 張 祥 張曉堅(jiān) 程亮星

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部 鄭州 450052 2)《腫瘤基礎(chǔ)與臨床》編輯部 鄭州 450052

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原花青素對(duì)D-半乳糖致衰老大鼠小腦的保護(hù)作用

趙松峰1)張亞玲2)張 曉1)師秀琴1)張 祥1)張曉堅(jiān)1)程亮星2)

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部 鄭州 450052 2)《腫瘤基礎(chǔ)與臨床》編輯部 鄭州 450052

目的 探討原花青素(PC)對(duì)D-半乳糖致衰老大鼠小腦的保護(hù)作用。方法 取健康6月齡雄性Wistar大鼠50只，隨機(jī)均分為陰性對(duì)照組、衰老模型組、維生素E(VE)組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組等5組，每組10只，分別給予相應(yīng)處理后，測(cè)定各組大鼠小腦組織中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)水平。結(jié)果 VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組SOD、GSH-Px水平較衰老模型組升高，而NO、NOS、MDA水平較衰老模型組降低(均P<0.001)；PC 160 mg/kg組與VE組的NO、NOS、SOD、MDA和GSH-Px水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)；PC 80 mg/kg組SOD、GSH-Px水平低于VE組、PC 160 mg/kg組，而NO、NOS、MDA水平高于VE組、PC 160 mg/kg組(均P<0.001)。結(jié)論 PC對(duì)D-半乳糖致衰老大鼠小腦組織具有一定的保護(hù)作用。

原花青素；衰老大鼠；小腦；一氧化氮；一氧化氮合酶；超氧化物歧化酶；丙二醛；谷胱甘肽過(guò)氧化物酶

原花青素(proanthocyanidins，PC)主要提取自葡萄皮和葡萄籽，具有明顯的抗氧化、增強(qiáng)心腦血管活性、改善學(xué)習(xí)記憶機(jī)能、抗炎及抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)等作用[1-3]，但關(guān)于PC對(duì)衰老大鼠小腦的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)測(cè)定D-半乳糖至衰老大鼠小腦組織中一氧化氮(nitric oxide，NO)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathion peroxidase，GSH-Px)水平，觀(guān)察原花青素對(duì)衰老大鼠小腦的影響?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 健康6月齡雄性Wistar大鼠50只，體質(zhì)量325～363 g，購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，采用數(shù)字表法隨機(jī)均分為5組：陰性對(duì)照組、衰老模型組、VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組各10只。

1．2 主要藥品、試劑及儀器 PC(安陽(yáng)晶森天然產(chǎn)物有限公司，批號(hào)：15064102)；維生素E(vitamin E，VE)注射劑(上海通用藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：150235)；NO、NOS、SOD、MDA、GSH-Px及考馬斯亮蘭測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)分別為：20150822、20151001、20150823、20150829、20150826、20150923)；722型分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠(chǎng))。

1．3 給藥方法 陰性對(duì)照組：皮下注射3.0 mL/kg的0.85% NaCl溶液；衰老模型組：皮下注射15% D-半乳糖1.5 mL/kg和0.85% NaCl溶液1.5 mL/kg；VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組：皮下注射15% D-半乳糖1.5 mL/kg和相應(yīng)濃度的藥物1.5 mL/kg。1次/d，連用12周。

1．4 標(biāo)本采集及指標(biāo)測(cè)定 標(biāo)本采集：各組大鼠于末次給藥1 h后，用1%戊巴比妥鈉(0.4 mL/kg)腹腔注射麻醉，快速常規(guī)取出小腦，4 ℃ 0.85% NaCl溶液沖洗，濾紙吸干，置于-80 ℃冰箱內(nèi)保存。指標(biāo)測(cè)定：取適量小腦組織，稱(chēng)質(zhì)量，制勻漿，4 ℃、3 500 r/min離心10 min，取上清液，按試劑盒說(shuō)明測(cè)定NO、NOS、SOD、MDA和GSH-Px水平。測(cè)定總蛋白量采用考馬斯亮蘭法。

2 結(jié)果

2．1 大鼠小腦組織中NO、NOS水平比較 衰老模型組較陰性對(duì)照組大鼠小腦組織中NO、NOS水平升高(均P<0.001)；VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組NO、NOS水平較衰老模型組降低(均P<0.001)；PC 160 mg/kg組與VE組的NO、NOS水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)；PC 80 mg/kg組NO、NOS水平高于VE組、PC 160 mg/kg組(均P<0.001)。見(jiàn)表1。

2．2 大鼠小腦組織中SOD、MDA和GSH-Px水平比較 衰老模型組大鼠小腦組織中SOD、GSH-Px水平較陰性對(duì)照組降低，而MDA水平較陰性對(duì)照組升高(均P<0.001)；VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組SOD、GSH-Px水平較衰老模型組升高，而MDA水平較衰老模型組降低(均P<0.001)；PC 160 mg/kg組與VE組的SOD、MDA和GSH-Px水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)；PC 80 mg/kg組SOD、GSH-Px水平低于VE組、PC 160 mg/kg組，而MDA水平高于VE組、PC 160 mg/kg組(均P<0.001)。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠小腦組織中NO、NOS、SOD、MDA和GSH-Px比較

注：與陰性對(duì)照組比較，1)P<0.001；與衰老模型組比較，2)P<0.001；與VE組比較，3)P<0.001；與PC 160 mg/kg組比較，4)P<0.001

3 討論

衰老機(jī)制復(fù)雜，目前研究較為深入的包括自由基學(xué)說(shuō)、凋亡學(xué)說(shuō)、免疫學(xué)說(shuō)等[4-5]。D-半乳糖致衰老因其造模成功率高、安全性高及造模時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用，本實(shí)驗(yàn)也驗(yàn)證了這一結(jié)果。

NO是最早被發(fā)現(xiàn)的氣體性信息分子，具有生理和病理雙重作用，少量的NO能夠發(fā)揮神經(jīng)遞質(zhì)和信息分子的作用，對(duì)體內(nèi)正常細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用，參與機(jī)體的生物學(xué)信號(hào)傳導(dǎo)和功能調(diào)節(jié)，如學(xué)習(xí)、血管調(diào)節(jié)等；而當(dāng)機(jī)體內(nèi)積聚大量的NO時(shí)則會(huì)發(fā)揮強(qiáng)氧化劑作用，產(chǎn)生細(xì)胞毒性，導(dǎo)致機(jī)體的自由基增加和脂質(zhì)過(guò)氧化，在衰老、缺血再灌注損傷等病理過(guò)程中起一定作用[6]。NO參與了衰老過(guò)程中多種機(jī)能改變，特別是神經(jīng)系統(tǒng)功能的退化[7]。NOS是NO合成的關(guān)建酶，機(jī)體內(nèi)的NOS主要分為誘導(dǎo)型NOS(iNOS)和結(jié)構(gòu)型NOS(cNOS)，iNOS是較活躍的一類(lèi)，其過(guò)度激活可導(dǎo)致NO水平的升高，從而導(dǎo)致衰老的發(fā)生，通過(guò)測(cè)定總NOS水平可間接反映iNOS水平[8]。SOD和GSH-Px是機(jī)體重要的清除自由基的酶，正常情況下能夠清除體內(nèi)多余的自由基，防止機(jī)體自由基的堆積和脂質(zhì)過(guò)氧化的發(fā)生，使自由基的產(chǎn)生和機(jī)體對(duì)自由基的清除保持一種動(dòng)態(tài)的平衡，從而保證正常生命活動(dòng)的順利進(jìn)行，而隨著衰老的進(jìn)展，機(jī)體內(nèi)的SOD和GSH-Px水平降低，造成了機(jī)體自由基的過(guò)剩，進(jìn)而導(dǎo)致自由基的堆積以及由此而引起的脂質(zhì)過(guò)氧化、細(xì)胞損傷等，兩者水平的高低可以間接反映機(jī)體的抗氧化能力[9]。MDA是機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，可以間接反映機(jī)體氧化程度和衰老程度[10]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示VE組、PC 160 mg/kg組和80 mg/kg組SOD、GSH-Px水平較衰老模型組升高，而NO、NOS、MDA水平較衰老模型組降低，說(shuō)明PC可能通過(guò)這些因子發(fā)揮抗衰老作用；PC 160 mg/kg組與VE組的NO、NOS、SOD、MDA和GSH-Px水平相近，說(shuō)明一定量的PC能夠達(dá)到VE一樣的抗衰老作用；PC 80 mg/kg組SOD、GSH-Px水平低于VE組、PC 160 mg/kg組，而NO、NOS、MDA水平高于VE組、PC 160 mg/kg組，提示PC的作用可能具有一定的劑量依賴(lài)性，隨著藥物量的增加，其作用可能越強(qiáng)。

綜上所述，PC能夠增強(qiáng)抗氧化酶SOD、GSH-Px水平，減少M(fèi)DA生成，從而通過(guò)抗氧化而發(fā)揮一定的抗衰老作用；同時(shí)PC還能夠降低機(jī)體NOS水平，從而減少NO水平，進(jìn)而起到抗衰老的作用，且作用具有劑量依賴(lài)性。

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(收稿2015-12-18)

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