郭 丹，楊秋鳳，張曉鷹，張 輝，李豐田，馮 媛

（1.遼寧省畜牧科學(xué)研究院，遼陽(yáng) 111000；2.遼寧省重大動(dòng)物疫病應(yīng)急中心，沈陽(yáng) 110161；3.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)，遼寧 沈陽(yáng) 110161）

繁殖與生理

胚胎移植絨山羊生殖內(nèi)分泌調(diào)控規(guī)律研究

郭 丹1，楊秋鳳1，張曉鷹1，張 輝2，李豐田1，馮 媛3

（1.遼寧省畜牧科學(xué)研究院，遼陽(yáng) 111000；2.遼寧省重大動(dòng)物疫病應(yīng)急中心，沈陽(yáng) 110161；3.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)，遼寧 沈陽(yáng) 110161）

以30只母羊?yàn)樵囼?yàn)樣本，研究在胚胎移植過(guò)程中，經(jīng)過(guò)同期發(fā)情處理和超排處理的供、受體母羊的生殖內(nèi)分泌調(diào)控規(guī)律。用放射免疫法測(cè)定血清中促卵泡素（FSH）、促黃體素（LH）、孕酮（P4）、雌二醇（E2）和促乳素（PRL）5種激素的動(dòng)態(tài)變化，同時(shí)測(cè)定血清中生化指標(biāo)和介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α（TGF-α）、胰島素樣生長(zhǎng)因子-I（IIGF-II）等4種細(xì)胞因子水平的變化規(guī)律。結(jié)果表明：供體羊接受處理后，IL-1β、FSH、E2、P4水平均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），在胚胎移植時(shí)供體羊的LH、IL-6水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。并進(jìn)一步探討了細(xì)胞因子與激素水平表達(dá)的相關(guān)性，為預(yù)測(cè)超排效果定性地提供了有價(jià)值的信息，并對(duì)胚胎移植生產(chǎn)具有一定的指導(dǎo)意義。

胚胎移植；絨山羊；生殖內(nèi)分泌

遼寧絨山羊是世界上最優(yōu)秀的絨山羊品種，具有產(chǎn)絨量高，絨纖維長(zhǎng)，細(xì)度良好，體形壯大，適應(yīng)性強(qiáng)，遺傳性能穩(wěn)定、改良低產(chǎn)山羊效果顯著等特點(diǎn)，其產(chǎn)絨量居全國(guó)之首，被譽(yù)為“中華國(guó)寶”，是我國(guó)農(nóng)業(yè)領(lǐng)域擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的特殊品種資源。主要分布在蓋州及其相鄰的岫巖、遼陽(yáng)、本溪、鳳城、寬甸、莊河、瓦房店等地區(qū)。遼寧絨山羊種用價(jià)值極高，改良低產(chǎn)羊效果顯著，被稱(chēng)為“中國(guó)絨山羊之父”。

隨著遼寧省“封山禁牧”政策的實(shí)施和舍飼高效養(yǎng)殖技術(shù)的研究與推廣，遼寧絨山羊產(chǎn)業(yè)的發(fā)展模式逐漸向集約化和規(guī)模化方向發(fā)展，遼寧省政府已經(jīng)在遼東9市縣建成了絨山羊養(yǎng)殖基地，旨在將遼寧省打造成為全國(guó)絨山羊供種基地，絨山羊胚胎移植的產(chǎn)業(yè)化也被提到日程上來(lái)。本研究建立在規(guī)模化絨山羊胚胎移植生產(chǎn)的基礎(chǔ)上，研究絨山羊同期發(fā)情和超排過(guò)程及胚胎移植時(shí)，母羊的主要激素、細(xì)胞因子和生化物質(zhì)的變化規(guī)律。一方面為羊妊娠生理學(xué)、妊娠病理學(xué)研究及闡明細(xì)胞因子對(duì)哺乳動(dòng)物胚胎發(fā)育免疫調(diào)控作用機(jī)理提供理論基礎(chǔ)；另一方面，為進(jìn)一步進(jìn)行絨山羊體外胚胎生產(chǎn)、胚胎移植產(chǎn)業(yè)化及相關(guān)科學(xué)研究提供重要理論依據(jù)，在生產(chǎn)實(shí)踐中具有指導(dǎo)意義。

1 材料

1.1 動(dòng)物

本試驗(yàn)的試驗(yàn)羊均由遼寧省遼寧絨山羊原種場(chǎng)有限公司提供，選擇體質(zhì)健壯、無(wú)疾病、發(fā)情狀態(tài)一致，且有過(guò)分娩記錄的母羊共30只，分為3組。

處理組：胚胎移植供體母羊10只，經(jīng)過(guò)同期發(fā)情處理和超數(shù)排卵處理；

對(duì)照組：正常繁殖母羊10只，發(fā)情一致，未經(jīng)過(guò)藥物處理；

受體組：胚胎移植受體母羊10只，經(jīng)同期發(fā)情處理。

1.2 主要試劑

1.2.1 測(cè)試試劑 膽固醇、蛋白質(zhì)、葡萄糖、鈣和鉀5種試劑盒和促卵泡素（FSH）、促黃體素（LH）、孕酮（P4）、雌二醇（E2）、促乳素（PRL）5種放射免疫測(cè)定試劑盒均購(gòu)于天津協(xié)和醫(yī)藥科技有限公司；白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α（TGF-α）、胰島素樣生長(zhǎng)因子-II（IGF-II）放射免疫測(cè)定試劑盒均購(gòu)于中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院科技開(kāi)發(fā)中心放免研究所；表皮生長(zhǎng)因子（EGF）放射免疫測(cè)定試劑盒購(gòu)于北京原子能研究所。

1.2.2 超數(shù)排卵藥物 促卵泡素FSH（100 IU/支，寧波第二激素廠產(chǎn)）、促卵泡素FSH（400 mg/瓶，加拿大產(chǎn)）、孕馬血清促性腺激素PMSG（1 000 IU/支，寧波市三生藥業(yè)有限公司產(chǎn)）、促黃體素LH（40 mg/瓶，加拿大產(chǎn)）。

2 方法

2.1 同期發(fā)情、超數(shù)排卵方案

供體母羊放栓（新西蘭CIDR）15 d后，開(kāi)始激素超排，采取后腿內(nèi)側(cè)肌肉注射，分8針注射，前7針為加拿大FSH（40 mg），每針間隔12 h。第8針為國(guó)產(chǎn)的PMSG（300 IU），各超排藥物需統(tǒng)一用稀釋液溶解后，用移液器按計(jì)量分裝到EPPENDOF管內(nèi)，冷凍保存，避免藥物因反復(fù)凍融而導(dǎo)致藥物成分的變化。

2.2 血樣的采集和處理

處理組和對(duì)照組均在供體母羊埋栓之日起，每5天從頸靜脈采血10 mL，連續(xù)采血5次?，F(xiàn)場(chǎng)離心后，分離血清，分裝在1.5 mL離心管中，于-20℃條件下保存。用以測(cè)定胚胎移植受體羊妊娠期FSH、LH、PRL、P4、E2五種激素，IL-1、IL-6、EGF、IGF-II、TGF-α五種細(xì)胞因子在血漿中的含量及其變化規(guī)律，以及血清膽固醇、蛋白質(zhì)、葡萄糖、鈣和鉀含量。

2.3 生化物質(zhì)的測(cè)定方法

樣本中的葡萄糖經(jīng)葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和過(guò)氧化氫，后者在過(guò)氧化物酶的作用下，將還原性的4-氨基安替雙林與酚偶聯(lián)合成可被分光光度計(jì)測(cè)定的醌類(lèi)化合物。樣本中游離膽固醇，經(jīng)過(guò)系列反應(yīng)產(chǎn)生醌亞胺，可用分光光度法在500 nm處設(shè)定其吸光度（A）值，然后推算出膽固醇的含量。

血清中鈣離子在堿性溶液中與甲基百里香酚藍(lán)（MTB）結(jié)合，生成藍(lán)色絡(luò)合物，通過(guò)比色與同樣處理的鈣標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較而得出最后結(jié)果。

血清蛋白質(zhì)的測(cè)定方法用雙縮脲法。

血清中鉀的測(cè)定原理：在堿性介質(zhì)中，經(jīng)蛋白沉淀劑處理后的血清樣本中的鉀離子與NA-TPB反應(yīng)產(chǎn)生混濁并有穩(wěn)定懸浮液，混濁度與樣本中鉀離子濃度成正比。

以上5種物質(zhì)測(cè)定的操作程序按試劑盒說(shuō)明并加以修改進(jìn)行測(cè)定。

2.4 激素含量的測(cè)定方法

血清促卵泡素試劑盒的測(cè)定靈敏度為0.6 mIU/mL，最佳曲線方程為4P.LOGISTIC，擬合度為0.999 8；黃體促生成素試劑盒的測(cè)定靈敏度為0.4 mIU/mL，最佳曲線方程為Y=F（LN（X）∧3），擬合度為0.999 8；血清雌二醇放免試劑盒的測(cè)定靈敏度為1.4 pg/mL，最佳曲線方程為Y=F（LN（X）∧3），擬合度為0.999 88；血清孕酮放免試劑盒的測(cè)定靈敏度為0.5 mIU/mL，最佳曲線方程為4P.LOGISTIC，擬合度為0.999 7；血清促乳素放免試劑盒的測(cè)定靈敏度為1.0 ng/mL，最佳曲線方程為Y=F（LN（X）∧3），擬合度為0.999 88。

2.5 血清細(xì)胞因子的測(cè)定方法

2.5.1 白細(xì)胞介素1β測(cè)定 白細(xì)胞介素1β測(cè)定試劑盒的測(cè)定范圍為0.1～24.3 ng/mL；靈敏度小于0.08 ng/mL。試驗(yàn)采用平衡法，標(biāo)準(zhǔn)品在使用前溶解和配制。最佳曲線方程為Y=F（LN（X）∧3），擬合度為0.999 88。

2.5.2 白細(xì)胞介素-6的測(cè)定 白細(xì)胞介素-6放免試劑盒的測(cè)定范圍為50～4 000 pg/mL，靈敏度小于50 pg/mL。最佳曲線方程為Y=F（LN（X）∧3），擬合度為0.999 9，采用平衡法。

2.5.3 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α的測(cè)定 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α的測(cè)定試劑盒的測(cè)定范圍為3.3～270 pg/mL，靈敏度小于5 pg/mL。最佳曲線方程為Y=F（LN（X）∧3），擬合度為0.999 99，試驗(yàn)采用平衡法，加樣程序如下：

向每管加入分離劑500 μL，充分混勻后放室溫15～20 min，4℃條件下離心3 500 r/min 20 min。棄去上清，在自動(dòng)γ計(jì)數(shù)儀上測(cè)定放免性，依據(jù)放免儀上的程序，讀出有關(guān)指標(biāo)及樣品濃度。

2.5.4 胰島素樣生長(zhǎng)因子II的測(cè)定 胰島素樣生長(zhǎng)因子II的測(cè)定試劑盒的測(cè)定范圍為0.1～8.1 pg/mL，靈敏度小于0.1 pg/mL。最佳曲線方程為Y=F（LN（X）∧3），擬合度為0.999 85，試驗(yàn)采用平衡法。

2.5.5 表皮生長(zhǎng)因子的測(cè)定 表皮生長(zhǎng)因子放免試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)性放免分析法，125I-EGF和待測(cè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的EGF與有限量的EGF抗體競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，加入分離劑，使復(fù)合物部分與游離抗原部分分離，棄去上清液，測(cè)沉的放射性計(jì)數(shù)，放射性強(qiáng)度與抗原濃度成正比。最佳曲線方程為L(zhǎng)OGIT（Y）=A+B×（LN（X）∧3），擬合度為0.999 48。

3 結(jié)果與分析

3.1 超排供體生化物質(zhì)含量的變化

如表1所示：處理后的第1次采樣，供體血清中總膽固醇含量試驗(yàn)組（90.73 mg/dL±6.89 mg/dL）顯著高于對(duì)照組（70.91 mg/dL±2.74 mg/dL）（P＜0.05）；血清葡萄糖水平在處理期間變化情況基本一致，第4次采樣，供體血清中葡萄糖水平試驗(yàn)組（52.39 mmol/L±5.74 mmol/L）顯著高于對(duì)照組（42.94 mmol/L±3.66 mmol/L）（P＜0.05）；血清蛋白質(zhì)水平在各試驗(yàn)組之間變化情況基本一致，在采卵時(shí)試驗(yàn)組（109.50 mg/mL±29.39 mg/mL）顯著高于對(duì)照組（94.48 mg/mL±2.44 mg/mL）（P＜0.05）。同期發(fā)期和超排處理期間，各試驗(yàn)組血清中鈣含量基本處于穩(wěn)定狀態(tài)，并且變化趨勢(shì)也沒(méi)有明顯的差異。血清鉀在各試驗(yàn)組間變化明顯不同，對(duì)照組血清鉀在處理期間基本處于恒定狀態(tài)，而處理組血清鉀含量的最高值和最低值則分別出現(xiàn)在第2次采樣和第1次采樣。

表1 超排供體羊幾種生化物質(zhì)測(cè)定結(jié)果

3.2 超排供體激素水平的變化分析

由表2可知，遼寧絨山羊同期發(fā)情和超排期間，在處理前（即第1次采樣），對(duì)照組FSH水平（0.35 mIU/mL± 0.12 mIU/mL）顯著低于處理組（0.76mIU/mL±0.49mIU/mL）（P＜0.05）。試驗(yàn)組FSH于發(fā)情時(shí)（即第4次采樣）達(dá)最高值，為0.98 mIU/mL±0.47 mIU/mL，顯著高于對(duì)照組峰值（P＜0.05）。

促黃體素在處理組和對(duì)照組中，第3次采樣以前，變化趨勢(shì)基本一致。于第4次采樣時(shí)，對(duì)照組顯著升高（P＜0.05），移植時(shí)又顯著下降到0.47 mIU/mL± 0.03 mIU/mL，與處理組差異顯著（P＜0.05）。

經(jīng)同期發(fā)情處理后，血清雌二醇的水平在處理組中由處理前的2.77 pg/mL±1.51 pg/mL升至4.69 pg/mL± 2.16 pg/mL。但經(jīng)促超排后，處理組下降，穩(wěn)至發(fā)情配種期，超排時(shí)又升至最高4.93 pg/mL±1.91 pg/mL。對(duì)照組血清雌二醇水平在發(fā)情周期基本穩(wěn)定。

同期發(fā)期用孕酮處理后，第2次采樣時(shí)，血清孕酮水平顯著升高，處理組由處理前的 9.73 ng/mL± 2.53 ng/mL升高至第2次采樣時(shí)的17.48 ng/mL±3.75 ng/mL。處理組于第3次采樣時(shí)達(dá)峰值23.04ng/mL±12.70ng/mL，第 4次采樣時(shí)，孕酮水平下降，且顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；對(duì)照組的血清孕酮水平基本處于穩(wěn)定狀態(tài)。

血清促乳素水平在絨山羊同期發(fā)情和超排期間的變化趨勢(shì)：在發(fā)情日，對(duì)照組顯著高于超排組（P＜0.05）。在移植時(shí)又低于超排組（P＜0.05）。

表2 超排供體羊幾種激素水平測(cè)定結(jié)果

3.3 超排供體細(xì)胞因子水平的變化分析

由表3可知，遼寧絨山羊同期發(fā)情和超排處理時(shí)，處理組的血清IL-1β水平一直處于恒定狀態(tài)；IL-6經(jīng)同期發(fā)情和超排處理后，對(duì)照組與超排組的變化趨勢(shì)高度一致；TGF-a在處理組基本處于恒定水平，對(duì)照組于處理后血清TGF-a下降；IGF-II在超排組的水平高于對(duì)照組，并于發(fā)情日達(dá)最高0.098 ng/mL±0.041 ng/mL，但與對(duì)照組的0.089 ng/mL±0.003 ng/mL差異不顯著（P＞0.05）；EGF超排組于發(fā)情日處于較低水平，為0.70 μg/L±0.22 μg/L，對(duì)照組達(dá)高峰，且與試驗(yàn)組差異顯著（P＜0.05）。移植時(shí)，各組間差異不顯著（P＞0.05）。

表3 超排供體羊細(xì)胞因子水平測(cè)定結(jié)果

3.4 胚胎移植時(shí)供、受體羊激素水平的比較分析

由表4可知，經(jīng)同期發(fā)情處理的供、受體羊在胚胎移植時(shí)，血清中的FSH水平接近，差異均不顯著（P＞0.05）；LH水平在對(duì)照組較低，且與供體羊差異顯著（P＜0.05）；雌二醇對(duì)照組最高，且與供、受體羊差異顯著（P＜0.05）；供體羊孕酮水平極顯著高于受體羊和對(duì)照組（P＜0.01）。

表4 移植時(shí)供、受體羊激素水平的比較

3.5 移植時(shí)供、受體羊細(xì)胞因子水平比較分析

由表5可知，胚胎移植時(shí)，IL-1β在供、受體羊間差異不顯著（P＞0.05），但均顯著高于對(duì)照受體羊（P＜0.05）。供體羊的IL-6水平又顯著高于受體羊和對(duì)照受體羊（P＜0.05）。供、受體羊和對(duì)照受體羊的TGF-α水平差異均不顯著（P＞0.05）。IGF-II在移植受體羊中最高，與對(duì)照受體羊和供體羊均差異顯著（P＜0.05）。EGF在各組間差異均不顯著（P＞0.05）。

表5 移植時(shí)供、受體羊細(xì)胞因子水平的比較

4 討論

4.1 超排供體絨山羊生化物質(zhì)含量的變化

Patil等［1］研究報(bào)道，超排供體羊血液中生化物質(zhì)水平可反映當(dāng)時(shí)機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)，另外同期發(fā)情所使用的藥物與動(dòng)物體蛋白質(zhì)代謝和類(lèi)固醇生成有關(guān)。本研究中供體羊經(jīng)過(guò)同期發(fā)情處理和超排處理，從總體看，對(duì)血清中幾種生化物質(zhì)變化的影響不大。但這種不明顯的變化可能是由于采樣時(shí)間間隔長(zhǎng)的原因。在用FSH超排期間（第4次和第5次采血），處理組的血清蛋白質(zhì)水平高于對(duì)照組。血清鈣水平基本不受外源激素的影響。而血清鉀水平在對(duì)照組中的變化不明顯，但在處理組發(fā)情后有一定差異，這也說(shuō)明與卵巢所處狀態(tài)和排卵反應(yīng)有關(guān)，其機(jī)理尚待深入研究。

4.2 超排供體激素水平的變化

由于促超排卵可引起多個(gè)卵泡發(fā)育和多個(gè)黃體形成，使機(jī)體內(nèi)分泌水平發(fā)生明顯的變化。FSH和LH是卵巢卵泡發(fā)育和分化的外源調(diào)控因子，它們各自受體在卵泡上表達(dá)的數(shù)量和活性以及卵泡內(nèi)激素和蛋白因子的合成水平不僅制約著FSH和LH的作用效果，而且反饋性地調(diào)節(jié)著FSH和LH的分泌水平。有研究表明，產(chǎn)羔性能高的山羊品種較之產(chǎn)羔性能低的品種含有較高濃度的FSH［2］。本研究超排處理后，F(xiàn)SH的血清水平升高，于發(fā)情時(shí)達(dá)高峰；較低濃度的FSH出現(xiàn)在對(duì)照組。

當(dāng)LH水平低時(shí)，有62.5%的母羊于24h內(nèi)發(fā)情［3］，說(shuō)明LH水平的高低與發(fā)情同期化程度有關(guān)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，處理組于取卵日達(dá)峰值，為 1.45 mIU/mL（P＜0.05），可能對(duì)超排效果影響不大。此結(jié)果與徐向明等［4］在山羊上的研究結(jié)果相一致。

Gran等［5］研究指出，超排發(fā)情牛血清雌二醇水平明顯高于非處理牛。本研究在絨山羊上的試驗(yàn)結(jié)果為處理組血清雌二醇水平高于對(duì)照組，支持上述觀點(diǎn)。

佐藤繁等［6］在牛上研究表明，從輸精日至輸精后7 d，再到20～22d時(shí)，妊娠牛的孕酮水平依次增加。黃群山等［7］在非超排西農(nóng)薩能奶山羊妊娠期外周血漿孕酮、17β-雌二醇和皮質(zhì)醇的變化上研究表明，外周血漿孕酮水平在配種日最低，為0.5 ng/mL。本試驗(yàn)中配種日最低值為8.96 ng/mL，配種后5 d為15.86 ng/mL，水平較高，可能是由于超排時(shí)用孕酮進(jìn)行同期發(fā)情的緣故。

研究表明，PRL在妊娠過(guò)程中發(fā)揮重要作用。資料中在超排過(guò)程中對(duì)PRL的分泌情況的研究報(bào)道不多。本試驗(yàn)各組PRL的變化趨勢(shì)基本一致，可能超排因素不直接影響PRL的分泌。

4.3 超排供體細(xì)胞因子水平的變化

魏志新等［8］在人上研究表明，促超排藥物作用后，血清中EGF、TGF-α水平明顯升高，提示促性腺激素可能存在刺激EGFS的分泌作用，但機(jī)理未知。本試驗(yàn)研究結(jié)果支持此觀點(diǎn)。

Machelon等［9］和Ghersevich等［10］在人上研究表明，未受激素刺激時(shí)，人排卵后黃體期血漿中IL-1β活性明顯增強(qiáng)，提示血清IL-1β的活性與孕酮密切相關(guān)；低水平的孕酮可促進(jìn)IL-1β的基因表達(dá)，高濃度時(shí)則抑制其表達(dá)，但孕酮的濃度界限并不十分清楚。Kol等［11］對(duì)模擬動(dòng)情周期未成熟大鼠卵巢組織進(jìn)行原位雜交分析，顯示IL-1β表達(dá)在排卵前逐漸增多，排卵時(shí)達(dá)高峰，較對(duì)照組高3倍。Karagouni等［12］認(rèn)為，控制超排卵周期IL-1β的分泌受卵泡刺激素/黃體生成素（FSH/LH）或HCG注射的影響，但必須考慮促性腺激素的直接作用及卵巢類(lèi)固醇激素的調(diào)節(jié)作用。王瑋等［13］在人上研究發(fā)現(xiàn)，卵泡液中IL-1β水平與取卵日外周血及卵泡液中的E2水平均呈正相關(guān)。表明IL-1β的分泌受E2的影響，且IL-1β對(duì)卵母細(xì)胞的成熟有調(diào)節(jié)作用；同時(shí)還進(jìn)一步證明，卵泡液中的IL-1β濃度與取卵數(shù)目、成熟細(xì)胞的數(shù)目均呈正相關(guān)。本研究結(jié)果表明，由于處理組用了孕酮栓，導(dǎo)致處理組的IL-1β水平一直高于對(duì)照組，與上述結(jié)論基本一致。

陳丹青等［14］在人上研究表明，促排卵過(guò)程中TGF-α水平顯著升高（P＜0.05），說(shuō)明促性腺激素有刺激TGF-α分泌的作用，并發(fā)現(xiàn)高反應(yīng)類(lèi)型血清的TGF-α水平高于低反應(yīng)類(lèi)型，這與本研究在絨山羊上經(jīng)過(guò)超排處理組的TGF-α水平高于對(duì)照組的研究結(jié)果基本一致。

胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGFS）是一類(lèi)與胰島素呈現(xiàn)高度同源性的肽類(lèi)物質(zhì)。Wilmut等［15］在豬的輸卵管液中發(fā)現(xiàn)有大量的IGF-I和IGF-II，發(fā)情時(shí)的濃度顯著高于非發(fā)情時(shí)，而外周血中的濃度水平卻相當(dāng)恒定，不隨生殖狀態(tài)的變化而變化。另外研究指出，從后情期至發(fā)情期，高產(chǎn)仔數(shù)組的IGF-II水平高于低產(chǎn)仔數(shù)組，表明排卵數(shù)高，IGF-II水平高。本試驗(yàn)中處理組的IGF-II水平要高于對(duì)照組，與上述報(bào)道的結(jié)果相一致。表明絨山羊經(jīng)過(guò)超排，發(fā)情時(shí)血清IGF-II的水平可能與超排效果的好壞有關(guān)系。

4.4 移植時(shí)供、受體羊激素水平的比較

從內(nèi)分泌學(xué)的角度看，供體、受體母羊雖然在發(fā)情時(shí)間上達(dá)到了同期化，但內(nèi)分泌及生理狀況并未真正同期，因?yàn)楣w母羊經(jīng)超數(shù)排卵處理后，血液中激素水平較高，而自然發(fā)情的受體母羊激素水平相對(duì)較低，這種供體內(nèi)分泌的差別必定會(huì)影響到其生理狀況的平衡。但在大規(guī)模的絨山羊胚胎移植生產(chǎn)中，經(jīng)過(guò)同期發(fā)情處理的受體羊，在移植時(shí)，是否與相應(yīng)的供體羊的激素處于相同的水平，也是研究影響移植胚胎進(jìn)一步發(fā)育因素的重要內(nèi)容之一。經(jīng)試驗(yàn)測(cè)定，移植時(shí)，供、受體羊的FSH、LH、E2、PRL基本處于相同的水平，但孕酮含量差異較大，這種差異是否影響移植胚胎的進(jìn)一步發(fā)育，尚需深入研究。早期流產(chǎn)受體羊血清孕酮、雌二醇水平高于妊娠產(chǎn)羔受體（P＞0.05），與Shiv等［16］在牛上的研究結(jié)果一致。

4.5 移植時(shí)供、受體羊細(xì)胞因子水平比較

本試驗(yàn)結(jié)果表明，在胚胎移植時(shí)，供、受體羊的TGF-α和EGF水平差異不顯著（P＞0.05）。對(duì)照組羊的IL-1β水平低于供、受體組羊，供、受體羊組間差異不顯著（P＞0.05）。供體羊的IL-6顯著高于受體羊和對(duì)照組（P＜0.05）。IGF-II在移植受體組最高，但與供體組和對(duì)照組間差異均不顯著（P＞0.05）。Peclaris等［17］的研究表明，用莫能菌素和孕酮處理綿羊，能提高血液中IGF水平，促使排卵卵泡發(fā)育成功能黃體，從而改善綿羊的繁殖能力。此結(jié)論和觀點(diǎn)解釋了本試驗(yàn)中供體羊孕酮水平和IL-6均處于較高水平的結(jié)果。由于胚胎自身有適應(yīng)環(huán)境變化的能力，移植時(shí)，供、受體之間的部分血清激素如孕酮水平及細(xì)胞因子如IL-6、IGF-II即使處于不同的水平，可能不會(huì)影響胚胎的進(jìn)一步生長(zhǎng)發(fā)育，但胚胎移植時(shí)供、受體間的這些差異值得深入研究。

5 小結(jié)

相關(guān)激素在超排絨山羊血液中的動(dòng)態(tài)變化得到進(jìn)一步研究，為預(yù)測(cè)超排效果定性地提供了有價(jià)值的信息，并對(duì)胚胎移植生產(chǎn)具有一定的指導(dǎo)意義。但由于激素的釋放受中樞神經(jīng)系統(tǒng)控制，短時(shí)間的變化較大，尤其是LH的脈沖式分泌。該試驗(yàn)采樣的間隔時(shí)間較長(zhǎng)，其峰值或其平均值難以確定，因而不能說(shuō)明其與P4、雌激素之間的變化關(guān)系，同時(shí)由于生產(chǎn)需要而不能進(jìn)行頻密采樣，其動(dòng)態(tài)變化與超排效果關(guān)系尚需深入研究。

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Study on the Regulation of Reproductive Endocrine of Embryo Transfer Cashmere Goats

GuoDan，YangQiufeng，ZhangXiaoying，et al
（Animal HusbandryInstitute ofLiaoningProvince，Liaoyang111000，China）

In this study，thirty does were selected as the test sample to study the regulation of reproductive endocrine of donor and recipient does.These does received estrus synchronization and super ovulation.Radioimmunoassay was used to determine five kinds of serum hormones，including follicle stimulating hormone（FSH），luteinizing hormone（LH），progesterone（P4），estradiol（E2）and prolactin prime（PRL）.Simultaneously the serum biochemical indexes and four dielectric cell factors. including dielectric element-1 beta（IL-1）and interleukin 6（IL-6），transforming growth factor alpha（tgf-a）and insulin like growth factor II（IGF-II）were determined.The results showed that the levels of P4，F(xiàn)SH，E2and IL-1 in the donors were significantly higher than those in the control group（P＜0.05），the levels of LH and IL-6 in the donors were significantly higher than those in the control group（P＜0.05）.The relationship between cytokine and hormone expression level were explored for predicting the superovulation effect qualitatively and these could provide valuable information and have certain guiding significance to the production of embryo transplantation.

embryotransfer；cashmere goat；reproductive endocrine

S827.3

A

2095-3887（2016）02-0020-06

10.3969/j.issn.2095-3887.2016.02.006

2016-02-26

遼寧省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2014020179）

郭丹（1981-），女，高級(jí)畜牧師，碩士。研究方向：絨山羊育種。