賀奮義，陳 昌，高生智，劉全元，張福亨，馬胡賽，劉志軍，史萬貴，潘永紅，劉 旭，詹 芳

（1．甘肅省動物疫病預防控制中心，蘭州730046；2．甘肅省甘南州瑪曲縣動物疫病預防控制中心，瑪曲747300；3．甘肅省甘南州碌曲縣動物疫病預防控制中心，碌曲747200；4．甘肅省慶陽市環(huán)縣動物疫病預防控制中心，環(huán)縣745700）

羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗（EG95）在甘肅地區(qū)的免疫試驗

賀奮義1，陳 昌1，高生智1，劉全元1，張福亨2，馬胡賽3，劉志軍4，史萬貴1，潘永紅1，劉 旭1，詹 芳1

（1．甘肅省動物疫病預防控制中心，蘭州730046；2．甘肅省甘南州瑪曲縣動物疫病預防控制中心，瑪曲747300；3．甘肅省甘南州碌曲縣動物疫病預防控制中心，碌曲747200；4．甘肅省慶陽市環(huán)縣動物疫病預防控制中心，環(huán)縣745700）

甘肅省是全國包蟲病疫區(qū)省份之一，多年來人間、畜間包蟲病流行嚴重。為了驗證羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗在甘肅地區(qū)使用的安全性和免疫效果，2015年用羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗，在甘肅省甘南州的瑪曲縣、碌曲縣和慶陽市的環(huán)縣3個點進行了免疫試驗，同時采取首免前、二免前及免后90 d的羊血分離血清，采用羊棘球蚴Eg95包被的ELISA抗體檢測試劑盒進行檢測。結果表明：試驗組首免前羊棘球蚴抗體陽性率0.99%～11.63%；二免前陽性率73.13%～85.57%；首免后90 d陽性率81.54%～98.44%。對照組首免前羊棘球蚴抗體陽性率為0；二免前陽性率0～5.71%；首免后90 d陽性率11.11%～20.00%。羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗反應在羊只品種上有差異：山羊上有反應，而藏綿羊上無反應。

棘球蚴（包蟲）病；基因疫苗；免疫試驗；疫苗反應

棘球蚴病（echinoeoccosis）又稱包蟲?。╤ydatidosis），是由帶科（Taeniidae）棘球屬（Echinococcus）的棘球絳蟲（Echinococcus granulosus）的中絳期幼蟲寄生于動物和人的肝、肺及其他器官內所引起的一種人獸共患病，農業(yè)部將其列為二類動物疫病。甘肅省是全國包蟲病疫區(qū)省份之一，多年來人間、畜間包蟲病流行嚴重。為了驗證羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗在甘肅地區(qū)使用的安全性和免疫效果，筆者等以包蟲病多發(fā)地區(qū)、養(yǎng)羊大縣、牧區(qū)和農區(qū)相結合的選點原則，選擇甘肅省甘南州瑪曲縣、碌曲縣和慶陽市環(huán)縣3個點進行免疫試驗，現(xiàn)將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 動物及分組

1.1.1 綿羊 選擇甘南州瑪曲縣、碌曲縣的2～4月齡藏羊羔羊，首次免疫日期定為2015年6月13日，飼養(yǎng)方式為自然放牧。

1.1.2 山羊 選擇慶陽市環(huán)縣的2～4月齡絨山羊羔羊，首次免疫日期定為2015年7月28日，飼養(yǎng)方式為舍飼圈養(yǎng)。

1.1.3 分組 在瑪曲縣進行了試驗組（100只）與對照組（40只）的設立，碌曲縣進行了試驗組（43只）與對照組（10只）的設立，環(huán)具進行了試驗組（70只）與對照組（10只）的設立。

1.2 疫苗

為重慶澳龍生物制品有限公司生產的羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗，生產批號：20140910；生產日期：20140908；50頭份/瓶，有效期12個月。

1.3 免疫程序與免疫方法

首免后1個月進行二免（即間隔4周進行二免）。按瓶簽注明頭份，每頭份疫苗兌1 mL滅菌生理鹽水的比例進行稀釋，每只羔羊頸部皮下注射1 mL，稀釋后疫苗限3 h內用完。

1.4 免疫效果評價

1.4.1 安全性評價 現(xiàn)場觀察免疫動物10 min，確定有無疫苗反應。

1.4.2 免疫抗體監(jiān)測

1.4.2.1 分離血清 羊在一免前、二免前、首免后90 d分別采血3次，分離血清，冷藏運輸1～2d，冷凍保存7～90d。

1.4.2.2 抗體檢測 用重慶澳龍生物制品有限公司生產的羊棘球蚴（包蟲）病ELISA抗體檢測試劑盒進行檢測；樣品OD450nm≤0.3±0.05，判為陰性；樣品OD450nm＞0.3± 0.05，但≤0.6±0.05，判為弱陽性；樣品OD450nm＞0.6± 0.05，判為陽性。

2 結果

2.1 疫苗安全性

藏綿羊基本無疫苗反應，山羊發(fā)現(xiàn)有疫苗反應，具體表現(xiàn)為全群精神萎靡，飲食欲廢絕，步態(tài)僵硬或不同程度的跛行，大多羊免疫部位無異常，有少量免疫羊注射部位輕微腫脹，有反應羊只約50%，部分羊尾巴下垂。檢測8只羊體溫，分別在39.5～41.8℃之間。認為是疫苗注射引起的應激反應，故及時采取了以下補救措施：全群羊飲水中添加黃芪多糖、維生素C，自由飲用；跛行羊肌內注射安痛定；重癥羊肌內注射地塞米松2 mL，靜脈注射10%萄葡糖250～500 mL；加強消毒和飼養(yǎng)管理，跟蹤觀察。采取補救措施后3～5 d，反應羊只逐漸好轉。

2.2 免疫效果檢測

試驗組：一免前陽性率為4.67%，二免前為80.00%，免后90 d為89.00%。甘南州瑪曲縣首免前、二免前、首免后90 d羊棘球蚴抗體ELISA檢測陽性率分別為0.99%、85.57%、87.65%；甘南州碌曲縣首免前、二免前、首免后90 d羊棘球蚴抗體ELISA檢測陽性率分別為11.63%、73.13%、81.54%；慶陽市環(huán)縣首免前、二免前、首免后90 d羊棘球蚴抗體ELISA檢測陽性率分別為5.71%、78.69%、98.44%。

對照組：一免前陽性率為0，二免前為3.70%，免后90 d為17.31%。甘南州瑪曲縣一免前、二免前、首免后90 d羊棘球蚴抗體ELISA檢測陽性率分別為0、5.71%、20.00%。甘南州碌曲縣一免前、二免前、首免后90 d羊棘球蟲幼抗體ELISA檢測陽性率分別為0、0、12.50%。慶陽市環(huán)縣一免前、二免前、首免后90 d羊棘球蟲幼抗體ELISA檢測陽性率分別為0、0、11.11%。見表1～4。

表1 免疫效果檢測

表2 甘南州瑪曲縣免疫效果檢測

表3 甘南州碌曲縣免疫效果檢測

表4 慶陽市環(huán)縣免疫效果檢測

3 討論與分析

（1）試驗組二免后血清中羊棘球蚴抗體陽轉率可達81.54%～98.44%，且3個試驗點羊棘球蚴抗體陽轉率均可達到80%以上；而對照組抗體陽性率最高為20.00%。這與他人的試驗結果基本一致。如張壯志等［1］以綿羊包蟲病基因工程疫苗（His-EG95）對新生新疆細毛羊、山羊和巴音布魯克羊進行兩次免疫，結果顯示二免后人工感染保護率均達到82.2%以上，最高保護率為89%。據(jù)朱興全［2］等報道，宿主免疫后攻擊原頭蚴時，抗體滴度越高，攻擊感染后包囊越少，表明抗體滴度與免疫保護之間存在明顯正相關關系。

（2）本試驗結果表明，試驗組與對照組之間血清中羊棘球蚴抗體陽轉率在相同時間內差異顯著。隨著時間的推移，對照組血清中羊棘球蚴抗體陽轉率呈現(xiàn)增高趨勢，即由一免前0.00%提高到90 d時的20.00%。不同品種羊只的疫苗免疫反應有差異，山羊有免疫反應，而藏綿羊則無反應。

（3）試驗對照組綿羊包蟲病感染17.31%，比詹芳等［3］調查的甘肅省部分地區(qū)綿羊包蟲自然感染率9.68%要高近一倍，分析可能原因是選點所造成的。

［1］ 張壯志，石保新，張文寶.綿羊包蟲病基因工程疫苗（Eg95）免疫試驗［J］.中國人畜共患病學報，2008，24（3）：252-256.

［2］ 朱興全，竇蘭清，史曉紅，等.細粒棘球絳蟲排泄分泌抗原研究——六鉤蚴排泄分泌抗原的免疫原性［J］.中國獸醫(yī)科技，1991，21（9）：6-9.

［3］ 詹芳，史萬貴，劉全元，等.甘肅省部分地區(qū)家畜包蟲病感染情況調查［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2015，34（6）：73-74.

10.3969/j.issn.2095-3887.2016.02.013

S852.7

A

2095-3887（2016）02-0048-03

2015-12-11

甘肅省科技重大專項（1203NKDA017）；甘肅省農業(yè)科技創(chuàng)新項目（GNCX-2013-43）

賀奮義，男，研究員，大學本科，碩士生導師。

高生智，男，高級獸醫(yī)師，主要從事寄生蟲防控工作。