王燦紅，霍小位，何曉山，劉冬羽，李立勇，曹 麗,*

（1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193；2.云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院，云南 昆明 650500）

羧甲基茯苓多糖對(duì)腸癌小鼠生命延長(zhǎng)及對(duì)環(huán)磷酰胺的減毒作用

王燦紅1,2，霍小位1，何曉山2，劉冬羽1，李立勇1，曹 麗1,*

（1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193；2.云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院，云南 昆明 650500）

目的：研究羧甲基茯苓多糖（carboxymethyl pachymaran，CMP）對(duì)結(jié)腸癌（CT26）小鼠的生命延長(zhǎng)及對(duì)環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）的減毒作用。方法：建立小鼠CT26皮下移植瘤模型，減毒增效實(shí)驗(yàn)分為：模型組、CTX組、CMP+CTX組；延長(zhǎng)生命實(shí)驗(yàn)分為：模型組、CMP低、中、高劑量組。檢測(cè)外周血白細(xì)胞（white blood cell，WBC）數(shù)、骨髓有核細(xì)胞（bone marrow nucleated cell，BMNC）數(shù)、腫瘤抑制率、臟器指數(shù)以及腫瘤組織中信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白-α（signal regulatory protein-α，SIRP-α）和巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物（F4/80）的表達(dá)，統(tǒng)計(jì)生命延長(zhǎng)率和中位生存期。結(jié)果：CMP抑制CTX化療所致的脾臟和胸腺指數(shù)的降低及WBC和BMNC數(shù)量的減少，拮抗肝臟指數(shù)升高，降低SIRP-α和F4/80的表達(dá)，并延長(zhǎng)小鼠帶瘤生存時(shí)間。結(jié)論：CMP明顯減輕CTX的毒副作用，且具有調(diào)節(jié)腫瘤免疫相關(guān)蛋白表達(dá)和延長(zhǎng)CT26小鼠帶瘤生存時(shí)間的作用。

羧甲基茯苓多糖；結(jié)腸癌；免疫調(diào)節(jié)；環(huán)磷酰胺；減毒作用；生命延長(zhǎng)

植物多糖為一類天然生物大分子，其來(lái)源豐富、成本低廉、無(wú)毒且藥理作用廣泛，如杏鮑菇多糖、靈芝多糖、茯苓多糖、香菇多糖等，它們?cè)诳鼓[瘤、抗病毒、抗炎、抗氧化等方面均取得了良好療效[1-5]，其中抗腫瘤和增強(qiáng)免疫作用是其研究的熱點(diǎn)，尤其與化療藥物合用的減毒增效作用受到廣泛的關(guān)注[6-8]。

茯苓為多孔菌科真菌（Poria cocos (Schw.) Wolf）的干燥菌核，根據(jù)記載茯苓具有利水滲濕、健脾和胃、寧心安神之功效，為一種藥食兩用的傳統(tǒng)中藥材[9]。茯苓多糖是茯苓的主要成分，其含量占茯苓質(zhì)量的80%以上[10]。未經(jīng)修飾的茯苓多糖幾乎無(wú)抗腫瘤活性，經(jīng)過(guò)結(jié)構(gòu)修飾后的茯苓多糖抗腫瘤及免疫增強(qiáng)作用均明顯提高[11]。天然茯苓多糖先經(jīng)氫氧化鈉堿化、氯乙酸醚化，再加堿二次醚化，最后乙醇沉淀合成羧甲基茯苓多糖（carboxymethyl pachymaran，CMP）。經(jīng)過(guò)羧甲基化修飾后的茯苓多糖黏度降低、取代度增加、水溶性升高、抗腫瘤及免疫活性也隨之增強(qiáng)[12]。

環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）為臨床常用的廣譜抗腫瘤藥物，但其選擇性差，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，對(duì)生長(zhǎng)旺盛的正常組織也產(chǎn)生嚴(yán)重毒副作用，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能低下，影響患者生活質(zhì)量[13]。目前，CMP已經(jīng)被用于臨床癌癥的輔助治療，能起到提高機(jī)體免疫功能、輔助抗腫瘤等作用，但其如何發(fā)揮對(duì)化療藥物的減毒增效作用值得深入探討。因此，本研究通過(guò)建立小鼠CT26皮下移植瘤模型，研究CMP對(duì)CTX的減毒增效作用及對(duì)皮下移植荷瘤小鼠帶瘤生存時(shí)間的影響，以期為CMP抗腫瘤作用的深入研究及臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與瘤株

健康SPF級(jí)，雄性BALB/c小鼠，52 只，體質(zhì)量16～18 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)SCXK(京)2012-0001。按嚙齒類動(dòng)物飼養(yǎng)方法和條件，飼養(yǎng)于SPF級(jí)動(dòng)物房。小鼠保持在12 h明/暗周期，控制相對(duì)濕度50%～70%、溫度20～24 ℃，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，食物和水可自行使用。

CT26結(jié)腸癌瘤株由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所藥理毒理中心常規(guī)傳代保存。

1.2 材料與試劑

CMP 湖南補(bǔ)天藥業(yè)股份有限公司。

注射用CTX 江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司；山羊抗鼠抗體信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白-α（signal regulatory protein-α，SIRP-α）、巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物F4/80 美國(guó)Santa Cruz公司；山羊抗鼠二抗 北京康為世紀(jì)生物技術(shù)有限公司；冰醋酸、甲醛及其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 儀器與設(shè)備

BCN-1360生物潔凈工作臺(tái) 北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；5410二氧化碳培養(yǎng)箱 美國(guó)Napco公司；MQX 200酶標(biāo)儀 美國(guó)Bio-Tek公司；CKX 41熒光倒置顯微鏡 日本Olympus公司；Labofuge 400R離心機(jī) 德國(guó)Heraeus公司；TT快速細(xì)胞分析儀 德國(guó)Casy Innovatis公司。

1.4 方法

1.4.1 小鼠CT26皮下移植瘤模型的建立、分組及給藥[14]

CT26移植瘤模型制備：將凍存的CT26瘤株復(fù)蘇，用無(wú)菌生理鹽水洗3 次計(jì)數(shù)并調(diào)整濃度為9.0×107個(gè)/mL，小鼠腹腔注射0.1 mL/只，連續(xù)傳2 代。無(wú)菌條件下剝離對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的CT26瘤塊，無(wú)菌勻漿器研磨，200目篩網(wǎng)過(guò)篩，細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)≥95%。無(wú)菌生理鹽水調(diào)整細(xì)胞濃度為6.0×107個(gè)/mL，于小鼠右側(cè)腋窩皮下接種，0.1 mL/只，制備CT26皮下移植瘤小鼠模型。

CT26腫瘤模型小鼠分組、給藥：接種24 h后，其中24 只CT26小鼠，隨機(jī)分為模型組、CTX組和CMP+CTX組，每組8 只。模型組小鼠腹腔注射生理鹽水；CTX組腹腔注射CTX 20 mg/（kg·2 d）（以小鼠體質(zhì)量計(jì)，腹腔注射體積0.1 mL/10 g，灌胃體積0.2 mL/10 g，下同）；CMP+CTX組，灌胃給予CMP 200 mg/（kg·d），腹腔注射CTX 20 mg/（kg·2 d），以上各組均連續(xù)給藥14 d；用于CMP對(duì)CTX減毒增效實(shí)驗(yàn)。

另外28 只CT26小鼠，又隨機(jī)分為模型組、CMP低劑量組、CMP中劑量組、CMP高劑量組，每組7 只。模型組灌胃給予蒸餾水；CMP低、中、高劑量組，分別灌胃給藥50、100、200 mg/（kg·d），以上各組均連續(xù)給藥21 d；用于觀察CMP對(duì)CT26腫瘤小鼠的生命延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)。

1.4.2 CMP對(duì)CTX減毒增效實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)

1.4.2.1 CT26模型小鼠體質(zhì)量、腫瘤抑瘤率及臟器指數(shù)的測(cè)定

末次給藥后，稱體質(zhì)量，摘眼球取血并頸椎脫臼處死小鼠，剝離皮下瘤塊、胸腺、脾臟、肝臟、腎臟，用電子天平精密稱質(zhì)量，分別按式（1）和（2）計(jì)算抑瘤率和臟器指數(shù)。

1.4.2.2 CT26模型小鼠外周血白細(xì)胞（white blood cell，WBC）數(shù)的測(cè)定

末次給藥1 h后，剪小鼠尾尖，取血10 μL，加入190 μL 3%的稀醋酸，稀釋20 倍，輕彈EP管使紅細(xì)胞充分裂解，采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法在顯微鏡下計(jì)數(shù)。

1.4.2.3 CT26模型小鼠骨髓有核細(xì)胞的測(cè)定

脫臼處死動(dòng)物，剝離右側(cè)股骨，用1 mL注射器吸取0.5 mL Hank’s液通過(guò)針頭反復(fù)沖洗骨髓，用3%稀醋酸稀釋10 倍后，于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)骨髓有核細(xì)胞數(shù)。

1.4.2.4 免疫組化法檢測(cè)CT26模型小鼠腫瘤組織中SIRP-α和F4/80表達(dá)

剝離腫瘤組織稱質(zhì)量后，剪取部分組織置于10%的甲醛溶液中固定，將固定好的組織進(jìn)行流水沖洗、梯度酒精脫水，然后浸蠟、包埋，切取6 μm薄片，烤干、脫蠟、蘇木素-伊紅（hematoxylin eosin，HE）染色，封閉一抗、二抗，中性樹(shù)脂封片。免疫組化鏡檢觀察，腫瘤組織中SIRP-α和F4/80的表達(dá)情況，然后，對(duì)于蛋白陽(yáng)性表達(dá)部分用Image Pro-Plus 6.0軟件進(jìn)行量化分析，用平均積分光密度（integral optical density，IOD）值反應(yīng)表達(dá)狀況。

1.4.3 CMP對(duì)CT26皮下移植瘤小鼠生命延長(zhǎng)情況的影響

連續(xù)給藥21 d期間，觀察動(dòng)物狀態(tài)、死亡時(shí)間，并記錄，按照公式（3）～（5）分別計(jì)算CMP對(duì)CT26結(jié)腸癌小鼠的生命延長(zhǎng)率、中位生存期（median survival time，MST）及相對(duì)生存時(shí)間（T/C）。

式中：t1為給藥組平均存活時(shí)間/d；t2為對(duì)照組平均存活時(shí)間/d。

式中：t為中間生存時(shí)間/d；n1為中間生存時(shí)間死亡的小鼠只數(shù)；n2為每組小鼠數(shù)的中間數(shù)。

式中：TMST為治療組中位生存期/d；CMST為對(duì)照組中位生存期/d。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)處理軟件SPSS 17.0，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性分析，Sig.值大于0.05，具有正態(tài)性的進(jìn)行單因素方差分析、t檢驗(yàn)，比較組間差異性，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)的χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 CMP對(duì)CT26結(jié)腸癌小鼠臟器指數(shù)的影響

表1 CMP對(duì)CT26結(jié)腸癌小鼠臟器指數(shù)的影響（，n=8）Table 1 Effect of CMP on visceral organ indexes of CT26-bearing mice (n= 8)

表1 CMP對(duì)CT26結(jié)腸癌小鼠臟器指數(shù)的影響（，n=8）Table 1 Effect of CMP on visceral organ indexes of CT26-bearing mice (n= 8)

注：*. 與模型組相比差異顯著（P＜0.05）；#. 與CTX組相比差異顯著（P＜0.05）；##. 與CTX組相比差異極顯著（P＜0.01）。

脾臟指數(shù)/（mg/g）組別劑量/（mg/kg）胸腺指數(shù)/（mg/g）肝臟指數(shù)/（mg/g）腎臟指數(shù)/（mg/g）模型組8.94±2.260.90±0.1143.56±4.2315.38±1.67 CTX組20 3.98±0.46*0.69±0.05*50.33±2.07*16.49±1.55 CMP+CTX組200+205.66±1.33*#0.96±0.10##45.90±3.90#16.87±1.40

由表1可知，與模型組相比，CTX導(dǎo)致CT26荷瘤小鼠的臟器指數(shù)發(fā)生明顯改變，脾臟和胸腺指數(shù)分別下降了55.48%（P＜0.05）和23.33%（P＜0.05），肝臟指數(shù)明顯升高了13.45% （P＜0.05）；而相比CTX組，CMP與CTX合用后，可部分恢復(fù)CTX改變的臟器指數(shù)，其中脾臟和胸腺指數(shù)分別升高42.21%（P＜0.05）和39.13%（P＜0.01），肝臟指數(shù)則顯著降低了8.80%（P＜0.05）。另外，CTX對(duì)CT26模型小鼠的腎臟指數(shù)有一定程度的提高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，給予CMP對(duì)腎臟指數(shù)也無(wú)明顯影響。

2.2 CMP對(duì)CTX抗腫瘤作用的影響

表2 CMP對(duì)CTX抗腫瘤作用的影響（，n=8）Table 2 Influence of CMP on the antitumor effect of CTX in CT26-bearing mice (n= 8)

表2 CMP對(duì)CTX抗腫瘤作用的影響（，n=8）Table 2 Influence of CMP on the antitumor effect of CTX in CT26-bearing mice (n= 8)

注：**. 與模型組相比差異極顯著（P＜0.01）。

組別劑量/（mg/kg）瘤質(zhì)量/g抑瘤率/%模型組1.90±0.15 CTX組20 1.25±0.12**34.34 CMP+CTX組200+201.17±0.1338.12

由表2可知，與模型組相比，CTX和CMP+CTX組瘤質(zhì)量均明顯減輕（P＜0.01）。但與CTX組相比，給予CMP后瘤質(zhì)量無(wú)明顯減輕；表明CMP無(wú)明顯增強(qiáng)CTX抗CT26的作用。

2.3 CMP對(duì)CT26結(jié)腸癌小鼠WBC數(shù)和骨髓有核細(xì)胞（bone marrow nucleated cell，BMNC）數(shù)的影響

表3 CMP對(duì)CT26結(jié)腸癌小鼠WBC和BMNC數(shù)的影響（x±s，n=8）Table 3 Effect of CMP on?peripheral?white blood cells and?bone marrow nucleated cells of CT26 mice (x± s, n= 8)

由表3可知，與模型組相比，CTX顯著降低CT26模型小鼠WBC和BMNC水平，分別降低了57.98%（P＜0.01）和74.38%（P＜0.01）。而相比CTX組，給予CMP后WBC和BMNC水平分別升高26.74%（P＜0.05）和141.94%（P＜0.05）。

2.4 CMP對(duì)CT26結(jié)腸癌小鼠腫瘤組織中SIRP-α和F4/80表達(dá)的影響

SIRP-α和F4/80參與腫瘤的免疫逃逸、侵襲和轉(zhuǎn)移等，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。免疫組織化學(xué)結(jié)果見(jiàn)圖1、2。SIRP-α和F4/80的陽(yáng)性表達(dá)見(jiàn)圖中被染成棕褐色的細(xì)胞。與模型組相比，CTX和CMP+CTX組SIRP-α和F4/80的表達(dá)均明顯減少（P＜0.001），并且CMP+CTX組中SIRP-α和F4/80的表達(dá)量明顯少于CTX組（P＜0.05或P＜0.01）。

圖1 CMP對(duì)腫瘤組織中SIRP-α表達(dá)的影響（×40）Fig. 1 Effect of CMP on the expression of SIRP-α in tumor tissues of CT26-bearing mice (× 40)

圖2 CMP對(duì)腫瘤組織中F4/80表達(dá)的影響（×40）Fig. 2 Effect of CMP on the expression of F4/80 in tumor tissue of CT26-bearing mice (× 40)

2.5 CMP給藥對(duì)CT26結(jié)腸癌小鼠生命延長(zhǎng)的影響

表4 CMP對(duì)CT26結(jié)腸癌小鼠生存時(shí)間的影響（n=7）Table 4 Effect of CMP on the life cycle of CT26 mice (n= 7)

圖3 CMP對(duì)CT26結(jié)腸癌小鼠生存曲線的影響（n=7）Fig. 3 Survival curve of CT26-bearing mice subjected to CMP treatment (n = 7)

由表4和圖3可知，與模型組相比，CMP低、中、高劑量組均延長(zhǎng)結(jié)腸癌小鼠的生存期，其生命延長(zhǎng)率分別為3.69%、16.8%和24.59%；中位生存期分別為35.00、36.00 d和48.75 d，明顯高于模型組的29.75 d。相對(duì)生存時(shí)間 （T/C）用來(lái)表示實(shí)驗(yàn)治療的效果，T/C＞120%認(rèn)為藥物有效，結(jié)果顯示CMP中和CMP高劑量組T/C值均＞120%，表明即使單用CMP對(duì)延長(zhǎng)CT26腸癌小鼠的生存期就有較顯著效果。

3 討 論

本研究結(jié)果顯示，CT26荷瘤小鼠給予CTX（20 mg/kg），引起臟器指數(shù)異常、WBC和BMNC水平下降等非特異性免疫功能低下，與文獻(xiàn)[15-16]報(bào)道一致。而CMP則明顯拮抗CTX引起的免疫及造血功能異常，顯示其對(duì)CTX有較好的減毒作用。

但在協(xié)同CTX對(duì)腸癌CT26的抑瘤作用上CMP增效作用不明顯。本課題組前期在體外應(yīng)用小鼠S180肉瘤、人白血病K562、人宮頸癌HeLa和人胃癌AGS等細(xì)胞觀察到CMP均未顯示體外抗癌活性。同時(shí)考察CMP體內(nèi)對(duì)S180、小鼠Lewis肺癌等腫瘤的抑制作用，最高抑瘤率僅為30%，表明其體內(nèi)抑瘤活性也不顯著（本實(shí)驗(yàn)未顯示結(jié)果）。這與文獻(xiàn)報(bào)道的CMP體內(nèi)對(duì)小鼠S180肉瘤抑制率達(dá)35.27%[17]相似。因此，認(rèn)為CMP在腫瘤治療中主要起到減低化療藥物毒性、改善腫瘤微環(huán)境及增強(qiáng)免疫功能等。

信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白SIRP-α和表皮生長(zhǎng)因子跨膜家族糖蛋白F4/80，均是腫瘤微環(huán)境中巨噬細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、單核細(xì)胞等的表面標(biāo)志物，主要參與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、免疫逃逸及炎癥等過(guò)程，在腫瘤組織中高度表達(dá)，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和炎癥發(fā)生[18-21]。本研究顯示，與模型組相比，CTX和CMP+CTX組SIRP-α和F4/80的表達(dá)均明顯減少，且CMP+CTX組中SIRP-α和F4/80的表達(dá)明顯少于單用CTX組，提示CMP可能具有增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬作用、改善腫瘤的炎性微環(huán)境，阻礙腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。

研究報(bào)道，CMP（300 mg/kg）使白血病p388小鼠生命延長(zhǎng)35.88%，與化療藥物CTX合用后生存期延長(zhǎng)到70.05%[22]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示，單用CMP能明顯延長(zhǎng)CT26小鼠帶瘤生存周期，生命延長(zhǎng)率最高可達(dá)24.59%，且有量效關(guān)系，提示CMP單用能明顯改善腸癌荷瘤小鼠的生存質(zhì)量，延長(zhǎng)帶瘤生存周期，而與化療藥物合用可能有更好的生命延長(zhǎng)效果，這值得進(jìn)一步探討。

綜上所述，CMP在小鼠腸癌化療輔助用藥中可減輕化療藥物毒副作用，調(diào)節(jié)免疫功能，改善腫瘤微環(huán)境、提高生活質(zhì)量及延長(zhǎng)帶瘤生存時(shí)間。但其聯(lián)合化療藥物是否延長(zhǎng)生命周期，其減毒、調(diào)節(jié)腸癌免疫炎癥微環(huán)境的具體分子機(jī)制還有待進(jìn)一步探究。

[1] 劉海英, 范劉士博. 杏鮑菇多糖對(duì)S180荷瘤小鼠的保護(hù)作用[J]. 食品科學(xué), 2015, 36(3): 198-201. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201503038.

[2] 陳繼巖. 羧甲基茯苓多糖抗乙型肝炎病毒的體內(nèi)與體外研究[J]. 中國(guó)生化藥物雜志, 2015, 35(2): 66-70.

[3] 喬進(jìn), 竇志華, 施忠, 等. 靈芝多糖聯(lián)合二甲雙胍對(duì)2型糖尿病模型大鼠氧化應(yīng)激的影響[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2015, 34(6): 718-721.

DOI:10.3870/yydb.2015.06.004.

[4] 曹露. 魷魚墨多糖對(duì)環(huán)磷酰胺所致小鼠腸道黏膜上皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究[D]. 青島: 中國(guó)海洋大學(xué), 2013: 25-41. DOI:10.7666/ d.D327982.

[5] 岳磊, 汲晨鋒. 香菇多糖免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤活性研究進(jìn)展[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥, 2015, 11(18): 23-26. DOI:10.11954/ytctyy. 201518012.

[6] QIANG Y, SHAO P N, WANG J Q, et al. Chemoprotective effects of Ganoderma atrum polysaccharide in cyclophosphamide induced mice[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2014, 64: 395-401. DOI:10.1016/j.ijbiomac.2013.12.029.

[7] ZHAO T, MAO G H, ZHANG M, et al. Enhanced antitumor and reduced toxicity effect of Schisanreae polysaccharide in 5-Fu treated Heps-bearing mice[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2014, 63: 114-118. DOI:10.1016/ j.ijbiomac.2013.10.037.

[8] WEI X J, HUA T J, CHEN J R, et al. Inhibitory effect of carboxymethyl pachymaran on cyclophosphamide-induced oxidative stress in mice[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2011, 49(4): 801-805. DOI:10.1016/j.ijbiomac.2011.07.017.

[9] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典一部[M]. 北京: 北京化學(xué)工業(yè)出版社, 2005: 166.

[10] HAMURO J J, MAEDA Y Y, ARAI Y, et al. The significance of the higher structure of the polysaccharides lentinan and pachymaran with regard to their antitumor activity[J]. Chemico-Biological Interactions, 1971, 3(1): 69-71. DOI:10.1016/0009-2797(71)90026-3.

[11] MIZUNO T, YEOHLUI P, KINOSHITA T, et al. Anti-tumor activity and chemical modification of polysaccharides from niohshimeiji mushroom, Tricholoma giganteum[J]. Bioscience Biotechnology Biochemistry, 1996, 60(1): 30-33. DOI:10.1271/bbb.60.30.

[12] 石清東, 蔣先明. 二次堿化法制備羧甲基茯苓多糖[J]. 天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā), 1996(2): 78-81.

[13] 張?jiān)撇? 環(huán)磷酰胺對(duì)免疫系統(tǒng)的影響[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2013, 41(30): 12040-12042. DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.30.095.

[14] 魏偉, 吳希美, 李元建. 藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué) [M]. 4版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2010: 1581-1583.

[15] 姚佳, 彭梅, 肖雄, 等. 仙茅多糖對(duì)氟尿嘧啶增效減毒作用[J]. 天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā), 2014, 26: 834-837; 867. DOI:10.16333/j.1001-6880.2014.06.006.

[16] TABATA R, TABATA C. Distinct effect of cyclophosphamide and cyclosporine on pure red cell aplasia associated with T-cell large granular lymphocyte leukemia[J]. International Immunopharmacology, 2014, 23(2): 391-394. DOI:10.1016/j.intimp.2014.10.013.

[17] 吳皓, 林洪生, 裴迎霞, 等. 人參皂甙Rg3對(duì)荷瘤及環(huán)磷酰胺化療小鼠黏膜免疫力影響[J]. 中國(guó)腫瘤, 2005, 15(6): 369-371.

[18] BARCLAR A N. Signal regulatory protein alpha (SIRPα)/CD47 interaction and function[J]. Current Opinion in Immunology, 2009, 21: 47-52. DOI:10.1016/j.coi.2009.01.008.

[19] RAYMOND M, RUBIO M, FORTIN G, et al. Selective control of SIRP-α-positive airway dendritic cell trafficking through CD47 is critical for the development of TH2-mediated allergic inflammation[J]. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2009, 124(6): 1333-1342. DOI:10.1016/j.jaci.2009.07.021.

[20] VANDENBERG T K, KRAAL G. A function for the macrophage F4/80 molecule in tolerance induction[J]. TRENDS in Immunology, 2005, 26(10): 506-509. DOI:10.1016/j.it.2005.07.008.

[21] HOU T Z, BYSTORM J, SHERLOCK J P, et al. A distinct subset of podoplanin (gp38) expressing F4/80+ macrophages mediate phagocytosis and are induced following zymosan peritonitis[J]. FEBS Letters, 2010, 584: 3955-3961. DOI:10.1016/j.febslet.2010.07.053.

[22] 楊勇, 楊宏新, 閆曉紅. 羧甲基茯苓多糖抗小鼠白血病凋亡藥理學(xué)研究[J]. 腫瘤研究與臨床, 2005, 17(2): 83-85. DOI:10.3760/cma. j.issn.1006-9801.2005.02.004.

Effect of Carboxymethyl Pachymaran on Life Extension and Attenuation of Cyclophosphamide-Induced Toxicity in CT26 Tumor-Bearing Mice

WANG Canhong1,2, HUO Xiaowei1, HE Xiaoshan2, LIU Dongyu1, LI Liyong1, CAO Li1,*
(1. Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100193, China; 2. Department of Traditional Chinese Medicine, Yunnan University of Traditional Chinese Medicine, Kunming 650500, China)

Objective: To investigate the effect of carboxymethyl pachymaran (CMP) on life extension of colon tumor 26 (CT26)-bearing mice and mitigating the side effects caused by chemotherapy with cyclophosphamide (CTX). Methods: CT26 tumor-bearing mouse models were established by subcutaneous transplantation into mice, and they were randomly divided into model, CTX and CTX + CMP groups for toxicity test. The model, and low-, medium- and high-dose CMP, groups were used for life extension test. Peripheral white blood cells (WBC), bone marrow nucleated cells (BMNC), percentage tumor inhibition, and visceral organ indexes were tested by biochemical assays. The expression of signal regulating protein alpha (SIRP-α) and macrophage surface marker (F4/80) in tumor tissues were detected through immunohistochemistry. Meanwhile, life extension rate and median survival period were observed. Results: CMP could increase the lower spleen index and thymus index, and the decreased levels of WBC and BMNC induced by CTX, antagonize the increase in liver index, and reduce the expression of SIRP-α and F4/80 in tumor tissues. In addition, CMP also could extend the survival time of CT26 tumor-bearing mice. Conclusion: CMP can obviously reduce the side effects of CTX, regulate the expression of tumor immune-related proteins, and prolong the survival time of CT26 tumor -bearing mice.

carboxymethyl pachymaran (CMP); colon cancer; immune regulation; cyclophosphamide (CTX); reducing toxicity; life extending

10.7506/spkx1002-6630-201621039

R285.5

A

1002-6630（2016）21-0229-05

王燦紅, 霍小位, 何曉山, 等. 羧甲基茯苓多糖對(duì)腸癌小鼠生命延長(zhǎng)及對(duì)環(huán)磷酰胺的減毒作用[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(21): 229-233. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201621039. http://www.spkx.net.cn

WANG Canhong, HUO Xiaowei, HE Xiaoshan, et al. Effect of carboxymethyl pachymaran on life extension and attenuation of cyclophosphamide-induced toxicity in CT26 tumor-bearing mice[J]. Food Science, 2016, 37(21): 229-233. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201621039. http://www.spkx.net.cn

2015-12-22

國(guó)家科技部“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（2012ZX09501001-004；2012ZX09301-002-001-026）

王燦紅（1986—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幩幚砼c應(yīng)用。E-mail：xinzhuangjianpo@163.com

*通信作者：曹麗（1966—），女，研究員，博士，研究方向?yàn)樘烊凰幬锟鼓[瘤藥理學(xué)。E-mail：lcao@implad.ac.cn