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(1.成都中醫(yī)藥大學 中藥材標準化教育部重點實驗室， 中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用國家重點實驗室， 四川 成都 611137； 2.四川智佳成生物科技有限公司， 成都 611731)

·種子檢驗·

益母草種子適宜采收期的初步研究

王盼1，曾俊1，陶玲1，冷珊珊1，俸世洪2，李敏1

(1.成都中醫(yī)藥大學 中藥材標準化教育部重點實驗室， 中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用國家重點實驗室， 四川 成都 611137； 2.四川智佳成生物科技有限公司， 成都 611731)

目的：制定益母草種子質(zhì)量的分級標準，確定益母草種子的適宜采收時間。方法：先分別測定34份不同產(chǎn)地的益母草種子的千粒重、水分、凈度、發(fā)芽率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數(shù)和出苗率，并采用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進行K聚類分析，制定益母草種子的質(zhì)量分級標準；并對9份不同采收時間的益母草種子的上述指標進行測定，利用制定的分級標準進行評價，確定益母草種子最適宜采收時間。結(jié)果：將益母草種子分為4個等級。其中一級種子發(fā)芽率不低于87%，發(fā)芽勢不低于83%，發(fā)芽指數(shù)不低于24.89，千粒重不低于1.035 5 g，凈度不低于95.4%，含水量不超過8.21%；二級種子發(fā)芽率不低于77%，發(fā)芽勢不低于56%，發(fā)芽指數(shù)不低于20.48，千粒重不低于0.878 3 g，凈度不低于94.0%，含水量不超過8.24%。9份不同采收時期的益母草種子中，CS-3為一級種子，CS-6、CS-7為二級種子，CS-1、CS-5、CS-8為三級種子，CS-2、CS-4、CS-9為四級種子，因此確定了益母草種子的最適宜采收時間為8月上旬。結(jié)論：制定了益母草種子質(zhì)量分級標準，為益母草種子的質(zhì)量控制提供了參考，并采用此分級標準確定了益母草種子最適宜的采收時間，為益母草種子的適時采收提供了依據(jù)。

益母草； 種子； 分級標準； 采收時間

益母草為唇形科植物益母草(LeonurusjaponicusHoutt.)新鮮或者干燥的地上部分[1]，其干燥成熟果實作藥材茺蔚子用。益母草具有活血調(diào)經(jīng)、利尿消腫、清熱解毒之功效，在婦科疾病中應用廣泛。最早于《神農(nóng)本草經(jīng)》中載[2]：益母草味辛、苦，微寒，歸心、肝、膀胱經(jīng)，用于瘀熱阻滯所致的月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)行不暢，痛經(jīng)，閉經(jīng)，適于產(chǎn)后瘀阻腹痛，惡露不盡及跌打損傷，瘀血作痛，小便不利，水腫等。

益母草分布廣泛、資源豐富，古本草亦記載其“生海濱池澤，處處有之”。益母草是輪傘花序腋生，其種子成熟的順序為由下至上、由內(nèi)至外，故其種子質(zhì)量和成熟度不盡相同。益母草一般用種子直接播種繁殖，種子質(zhì)量直接影響種子在田間的出苗率，故種子質(zhì)量對益母草的栽培起著至關重要的作用。但到目前為止，包括益母草種子在內(nèi)的大部分的中藥材種子還沒有與之相對應的種子檢驗標準，另外也未見對益母草種子適宜采收時間進行研究的相關報道[3-6]。目前關于藥材種子質(zhì)量分級的研究主要是把凈度、千粒重、發(fā)芽率、水分等作為指標然后采用統(tǒng)計學的方法進行分析進而制定標準[7-9]。

本研究對不同產(chǎn)地益母草種子的水分、千粒重、凈度、發(fā)芽率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數(shù)、出苗率等指標進行測定，根據(jù)K中心聚類分析的原理，確定益母草種子質(zhì)量的分級標準，然后利用制定的分級標準對不同采收時間的益母草種子質(zhì)量進行評價，確定益母草種子的最適宜采收時間。以期為益母草栽培過程中的規(guī)范收種和用種提供依據(jù)，為益母草的高產(chǎn)和良種繁育工作奠定基礎。

1 實驗材料與儀器

1.1 實驗樣品

收集了來自四川、東北、湖北等地(34份)和不同采收時間(9份)共計43份益母草種子作為實驗材料(詳見表1和表2)，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學李敏教授鑒定為唇形科植物益母草LeonurusjaponicusHoutt.的干燥種子，所有樣品在成都中醫(yī)藥大學種質(zhì)資源庫中低溫保存。

表1 不同產(chǎn)地益母草種子樣品信息

編號收集地點來源種或栽培類型YMC?1湖北宜昌產(chǎn)地YMC?2河南伏牛山產(chǎn)地YMC?3湖南廉橋市場YMC?4河北安國市場YMC?5甘肅定西市場YMC?6四川瀘州產(chǎn)地YMC?7江西樟樹市場YMC?8江蘇鎮(zhèn)江市場YMC?9河北安國市場YMC?10甘肅靜寧產(chǎn)地YMC?11遼寧丹東產(chǎn)地YMC?12四川西昌產(chǎn)地YMC?13貴州貴陽產(chǎn)地YMC?14河南鄭州產(chǎn)地YMC?15東北1號產(chǎn)地YMC?16東北2號產(chǎn)地YMC?17東北3號產(chǎn)地YMC?18東北4號產(chǎn)地YMC?19山東1號產(chǎn)地YMC?20陜西咸陽產(chǎn)地YMC?21安徽1號市場YMC?22湖北宜昌產(chǎn)地YMC?23河南伏牛山產(chǎn)地YMC?24湖南廉橋產(chǎn)地YMC?25河北安國產(chǎn)地YMC?26甘肅定西市場YMC?27四川瀘州市場YMC?28江西樟樹產(chǎn)地YMC?29江蘇鎮(zhèn)江產(chǎn)地YMC?30河北安國市場YMC?31甘肅靜寧產(chǎn)地YMC?32山東淄博產(chǎn)地YMC?33山西呂梁產(chǎn)地YMC?34湖南漣源產(chǎn)地

表2 不同采收時間益母草種子樣品信息

種子編號種子采收時間種子產(chǎn)地CS?12015/07/29四川省涼山州冕寧縣CS?22015/07/31四川省涼山州冕寧縣CS?32015/08/02四川省涼山州冕寧縣CS?42015/08/04四川省涼山州冕寧縣CS?52015/08/06四川省涼山州冕寧縣CS?62015/08/08四川省涼山州冕寧縣CS?72015/08/10四川省涼山州冕寧縣CS?82015/08/12四川省涼山州冕寧縣CS?92015/08/14四川省涼山州冕寧縣

1.2 實驗儀器

SQP電子分析天平(德國賽多利斯科學儀器北京儀器公司)；SPX-250 B微機生化培養(yǎng)箱(上海悅豐儀器儀表有限公司)；恒溫鼓風干燥箱(上海瑯玕實驗設備有限公司)；KQ-500 DE臺式數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 實驗方法

對不同產(chǎn)地的34份和不同采收時間的9份共計43份益母草種子樣品的凈度、千粒重、水分、發(fā)芽率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數(shù)和出苗率等7項指標進行測定。

2.1.1 凈度測定

采用“徒手減半法”抽取實驗樣品，稱取種子2.0 g，每份樣品重復2次。將種子鋪在白紙板上，運用合適的方法分離種子和雜質(zhì)，并計算凈種子的含量，計算平均值，即為種子的凈度值。

2.1.2 千粒重測定

隨機選取凈度分析后的益母草種子各2份，測定千粒種子重量，計算平均值，即為益母草種子的千粒重。

2.1.3 水分測定

采用高溫烘干法對益母草種子含水量進行測定。稱取益母草種子2.0 g于已恒重的稱量瓶中，樣品重量記為W0，樣品與稱量瓶總重量記為W1；將其置于溫度為(105±2)℃的恒溫烘箱中，烘5 h；取出，于干燥器中冷卻30 min，稱量并記錄數(shù)據(jù)；再將其放入恒溫烘箱(105±2)℃中烘1 h，后于干燥器中冷卻30 min，稱重；至連續(xù)2次稱量重量差異不超過5 mg為止，最后次稱量的數(shù)據(jù)記W2。按公式：含水量(%)=(W1-W2)/W0×100%，計算樣品含水量。

2.1.4 發(fā)芽指標測定

取2張濾紙鋪于干凈的培養(yǎng)皿底部，用蒸餾水浸濕，隨機選取50粒溫水浸泡過夜的益母草種子均勻擺放于濕潤的濾紙上，每份樣品重復2次，然后將培養(yǎng)皿放入恒溫培養(yǎng)箱(25 ℃)中進行培養(yǎng)，從置床開始每隔1 d記錄種子的發(fā)芽情況，根據(jù)以下計算公式計算種子發(fā)芽各項指標。

發(fā)芽率(%)=發(fā)芽種子數(shù)/供試種子總數(shù)×100%；

發(fā)芽勢(%)=5 d內(nèi)發(fā)芽種子數(shù)/供試種子總數(shù)×100%；

發(fā)芽指數(shù)=∑Gt/Dt(其中：Gt為日發(fā)芽數(shù)，Dt為發(fā)芽天數(shù)) 。

2.1.5 出苗率測定

將適宜比例的營養(yǎng)物質(zhì)與已準備好的土壤混合均勻，放入花盆中將表面耙平。每份樣品隨機選取20粒種子，重復2次，點播于土壤表面，用細水噴灑土表層，使種子和土壤接觸。每天噴灑細水，保持土壤濕潤，待不再有幼苗長出時，記錄種子出苗數(shù)，按公式：出苗率(%)=出苗數(shù)/總種子數(shù)×100%，計算出苗率。

2.1.6 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 19.0軟件，對實驗測定結(jié)果進行K聚類分析，確定益母草種子質(zhì)量分級標準，并根據(jù)制定的益母草種子質(zhì)量分級標準來確定益母草種子的適宜采收時間。

2.2 實驗結(jié)果

2.2.1 凈度、千粒重、水分、發(fā)芽指標及出苗率的測定

由表3可看出，不同產(chǎn)地益母草種子的凈度范圍為63.2%～97.9%，平均為80.55%。以廣東東莞產(chǎn)益母草種子凈度最低，為63.2%，貴陽的益母草種子凈度最高，為97.9%。

不同產(chǎn)地益母草種子的千粒重范圍為0.577 5～1.641 0 g，平均1.109 3 g。以河南產(chǎn)益母草種子千粒重最低，為0.577 5 g，陜西咸陽產(chǎn)益母草種子千粒重最高，為1.641 0 g。其中千粒重在1.0 g以上的僅占17.6%。

益母草種子的含水量范圍在6.66%～9.58%，平均為8.12%。以湖南邵陽的種子含水量最低，為6.66%，貴陽的益母草種子含水量最高，為9.58%。

34份益母草種子的發(fā)芽率范圍為0%～93%，平均為46.5%；發(fā)芽勢0%～90%，平均值為45%；發(fā)芽指數(shù)0～26.87，平均值為13.44；廣東東莞和廣西貴港的益母草種子完全未發(fā)芽，而河北安國產(chǎn)的益母草種子發(fā)芽率最高，為93%。其中，發(fā)芽率大于60%的種子有20份，發(fā)芽率大于80%的有8份，有11份益母草種子發(fā)芽率低于50%。

不同產(chǎn)地益母草種子的出苗率范圍為0～87.5%，平均為43.75%。其中河南安國的益母草種子均未出苗，四川西昌產(chǎn)益母草種子出苗率最高，為87.5%。出苗率大于60%的有11份，有15份益母草種子的出苗率低于40%。

2.2.2 益母草種子質(zhì)量分級標準的確定

通過SPSS 19.0軟件，對實驗測定結(jié)果進行K聚類分析，將益母草種子質(zhì)量分為4個等級，具體結(jié)果如表4。其中，一級種子發(fā)芽率不低于87%，發(fā)芽勢不低于83%，發(fā)芽指數(shù)不低于24.89，千粒重不低于1.035 5 g，凈度不低于95.4%，含水量不超過8.21%；二級種子發(fā)芽率不低于77%，發(fā)芽勢不低于56%，發(fā)芽指數(shù)不低于20.48，千粒重不低于0.878 3 g，凈度不低于94.0%，含水量不超過8.24%；三級種子發(fā)芽率不低于53%，發(fā)芽勢不低于39%，發(fā)芽指數(shù)不低于14.17，千粒重不低于0.860 4 g，凈度不低于90.3%，含水量不超過8.25%；四級種子發(fā)芽率不低于22%，發(fā)芽勢不低于10%，發(fā)芽指數(shù)不低于4.99，千粒重不低于0.758 1 g，凈度不低于88.2%，含水量不超過8.67%。除去完全未發(fā)芽的2份種子外，其余的32份種子中Ⅰ級5個，Ⅱ級有13個，Ⅲ級有9個，Ⅳ級有5個。

表3 不同產(chǎn)地益母草種子樣品測定數(shù)據(jù)表

種子編號凈度(%)千粒重(g)水分(%)發(fā)芽率(%)發(fā)芽勢(%)發(fā)芽指數(shù)出苗率(%)YMC?191．900．87888．44918727．220．00YMC?294．700．65387．82584115．6360．00YMC?370．801．59329．53471910．607．50YMC?493．200．72528．58834119．0845．00YMC?594．800．95078．30776821．3837．50YMC?696．400．67978．27765720．3567．50YMC?790．500．67977．43545317．4055．00YMC?896．200．82037．47867825．8867．50YMC?995．900．79508．87939026．870．00YMC?1092．700．87847．89534515．7850．00YMC?1188．000．91998．35463110．9615．00YMC?1297．900．78708．38704416．1887．50YMC?1394．701．07217．83786222．3070．00YMC?1486．100．57758．0332248．8612．50YMC?1595．200．65098．76746118．1455．00YMC?1692．900．82817．95624516．3862．50YMC?1792．500．86098．09794416．8365．00YMC?1885．400．77218．84766119．8962．50YMC?1995．200．95998．98837822．2757．50YMC?2073．701．64108．74604515．9622．50YMC?2192．601．02868．39905623．7950．00YMC?2297．900．94749．58838122．2350．00YMC?2395．600．68858．31473611．3050．00YMC?2495．900．97239．08824719．3965．00YMC?2592．100．90667．82676523．2970．00YMC?2696．600．92806．66676825．3332．50YMC?2794．400．82717．76942．0420．00YMC?2893．000．64469．2413104．0522．50YMC?2994．900．85058．07795120．0377．50YMC?3063．200．77868．080007．55YMC?3194．200．93807．730007．50YMC?3283．501．00388．083277．7437．50YMC?3394．701．44738．27483613．5237．50YMC?3494．700．73777．922374．2535．00

表4 益母草種子質(zhì)量分級標準

級別發(fā)芽率(%)發(fā)芽勢(%)發(fā)芽指數(shù)千粒重(g)凈度(%)含水量(%)Ⅰ級≥87≥83≥24．89≥1．0355≥95．4≤8．21Ⅱ級≥77≥56≥20．48≥0．8783≥94．0≤8．24Ⅲ級≥53≥39≥14．17≥0．8604≥90．3≤8．25Ⅳ級≥22≥10≥4．99≥0．7581≥88．2≤8．67

2.2.3 益母草種子適宜采收時間的確定

對不同采收時間的9份益母草種子樣品的測定結(jié)果如表5。由表可知，其發(fā)芽率在40%～87%，平均為63.5%；發(fā)芽勢41%～87%，平均為64.0%；發(fā)芽指數(shù)20.80～48.88，平均為34.84；千粒重0.795 6～0.885 1 g，平均是0.840 35 g；凈度96.07%～99.25%，平均是97.66%；含水量在4.89%～5.99%，平均是5.44%；出苗率在30.0%～85.0%，平均是57.5%。參考表4中制定的益母草種子質(zhì)量分級標準和9份益母草種子的采收時間，發(fā)現(xiàn)7月下旬1個有3級和1個4級益母草種子；8月上旬有1個一級種子，2個二級種子，其它為3、4級種子；8月中旬情況與7月下旬一致。由此可見8月上旬的益母草種子1、2級種子最多，因此初步確定益母草種子的最適宜采收時間為8月上旬。

表5 不同采收時間益母草種子樣品測定數(shù)據(jù)

發(fā)芽率(%)發(fā)芽勢(%)發(fā)芽指數(shù)千粒重(g)凈度(%)含水量(%)出苗率(%)CS?1645632．810．816796．325．5252．50CS?2484121．760．802097．984．8940．00CS?3878748．880．795699．255．1630．00CS?4404120．800．841397．935．2255．00CS?5565430．880．801999．105．4427．50CS?6797741．960．805797．455．3385．00CS?7838246．560．872197．995．2845．00CS?8545226．680．811096．075．9945．00CS?9525329．810．885198．6755．4162．50

3 結(jié)論與討論

由實驗結(jié)果可知，不同產(chǎn)地益母草種子的凈度、千粒重、水分、發(fā)芽率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數(shù)和出苗率均存在明顯差異。其中陜西咸陽所產(chǎn)種子的千粒重最大，達到1.601 0 g，湖北宜昌和河北安國等地的益母草種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數(shù)都相對較高，最高可達到93%，其出苗率和千粒重也相應較高，而江西樟樹和湖南廉橋等地的種子含水量高，但是他們的發(fā)芽率等指標較低。在分級各項指標中，發(fā)芽率和出苗率可以很直觀的反映種子的田間的后期生長情況。千粒重作為種子飽滿程度和種子成熟度的指標，可間接影響種子的發(fā)芽率，因此作為益母草種子質(zhì)量分級的次要參考指標。而種子凈度和水分含量屬于后期可變因素，往往可以通過后期加工等手段來提高質(zhì)量。所以以發(fā)芽指標和出苗率為主指標，千粒重為次級指標，凈度、含水量為輔助指標來判斷種子質(zhì)量較為合理，以此分得的等級能夠較真實的反應益母草種子的內(nèi)在品質(zhì)。本研究采用的K聚類分析方法算法簡單、快速、運算量小且能有效的處理龐大的數(shù)據(jù)樣本，所以用于制定益母草種子質(zhì)量的分級標準是可行的。

通過對不同采收時間的益母草種子樣品各項指標的測定，結(jié)合制定的益母草種子質(zhì)量分級標準和采收時間，發(fā)現(xiàn)7月下旬1個有3級和1個4級益母草種子；8月上旬有1個一級種子，2個二級種子，其它為3、4級種子；8月中旬的情況和7月下旬一樣。8月上旬的益母草種子1級和2級種子最多，因此初步確定了益母草種子的最適宜采收時間為8月上旬。但在對益母草種子分級過程中發(fā)現(xiàn)，有2份種子完全未發(fā)芽，導致此現(xiàn)象的原因可能是從市場收集的種子樣品為存放時間過長的陳種子、已發(fā)生霉變或混有其它種子。通過制定益母草種子質(zhì)量分級標準進而確定種子適宜采收時間，以此來規(guī)范益母草栽培過程中的收種，加強益母草種子質(zhì)量的控制和規(guī)范管理，為益母草的高產(chǎn)和良種繁育工作奠定基礎，進一步為保證益母草藥材質(zhì)量穩(wěn)定可控提供參考依據(jù)。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2015年版一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:209.

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(本欄目責任編輯：申 曉)

Research of Motherwort Seeds Suitable for Harvest Time

WANGPan1,ZENGJun1,TAOLing1,LENGShanshan1,FENGShihong2,LIMin1

2016-07-05

2015年度中醫(yī)藥行業(yè)科研專項——益母草優(yōu)良品種選育方法及種植質(zhì)量控制技術研究(編號：201507002)。

王 盼(1992—)，男，甘肅人；碩士研究生，研究方向：中藥品種、質(zhì)量及資源研究；E-mail:850627834@qq.com。

李 敏(1962—)，教授，博士生導師，研究方向：中藥品種、質(zhì)量及資源研究；E-mail:028limin@163.com。

10.16590/j.cnki.1001-4705.2016.12.115

S 567

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1001-4705(2016)12-0115-04