， ， ， ， ，2， (.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院， 貴州 貴陽(yáng) 550002； 2.貴州省苗醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 貴陽(yáng) 550002)

·資源與利用·

苗藥紅禾麻種質(zhì)資源藥材中多糖含量與環(huán)境因子的相關(guān)性分析

鄒淑涵1，楊勇1，溫迪1，陳胤睿1，徐文芬1，2，魏升華1
(1.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院， 貴州 貴陽(yáng) 550002； 2.貴州省苗醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 貴陽(yáng) 550002)

采集不同產(chǎn)地苗藥紅禾麻種質(zhì)資源藥材，采用苯酚-硫酸比色法，建立其多糖的含量測(cè)定方法，測(cè)定分析不同紅禾麻種質(zhì)資源藥材中多糖含量差異，并與環(huán)境因子進(jìn)行相關(guān)性分析，考察環(huán)境因子對(duì)紅禾麻藥材品質(zhì)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：不同紅禾麻種質(zhì)資源藥材多糖含量為0.42%～10.21%。經(jīng)相關(guān)性分析，紅禾麻多糖含量與環(huán)境因子具有一定的相關(guān)性，土壤中銨態(tài)氮N、土壤水分含量、年均溫度和年均日照時(shí)數(shù)的增加，有效鉀K含量、年均降水量和7月溫度降低可促進(jìn)紅禾麻多糖成分的積累，而土壤速效P和土壤pH值影響較小。研究結(jié)果為該藥材的優(yōu)良種質(zhì)資源篩選及GAP規(guī)范化種植提供前期研究基礎(chǔ)，同時(shí)也為苗藥紅禾麻藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

紅禾麻種質(zhì)資源； 藥材； 苯酚-硫酸法； 多糖含量； 環(huán)境因子； 相關(guān)性

紅禾麻系蕁麻科艾麻屬植物珠芽艾麻(Laporteabulbifera(Siebold & Zuccarini)Weddell.)的新鮮或干燥全草，又名紅合麻。為貴州重要的苗族藥物，收載于《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版，苗藥名為：Uabdetdend 蛙斗等，性味辛、溫，有小毒，歸肝、脾、胃經(jīng)，具有祛風(fēng)除濕，活血化瘀之功效，用于治療風(fēng)濕麻木，跌撲損傷，骨折等疾病[1-3]。

該藥材為貴州同濟(jì)堂有限公司民族藥“潤(rùn)燥止癢膠囊”的主要原料藥材，民間藥用較多，野生資源逐年銳減，且藥材質(zhì)量良莠不齊，已不能滿足生產(chǎn)需要，選擇優(yōu)良紅禾麻種質(zhì)資源進(jìn)行野生馴化研究及規(guī)范化種植研究十分必要。通過(guò)文獻(xiàn)查閱分析，目前對(duì)紅禾麻的現(xiàn)代研究報(bào)道較少，化學(xué)成分主要有黃酮類和香豆素類化合物，其總香豆素是紅禾麻鎮(zhèn)痛抗炎和免疫抑制的作用物質(zhì)[4-8]。課題組在采集種質(zhì)資源過(guò)程中發(fā)現(xiàn)其地下部分含有較多的黏液質(zhì)，并經(jīng)α-萘酚成分檢識(shí)顯示含有多糖類成分。由于2003年版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》收載紅禾麻藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，僅有性狀鑒別項(xiàng)，無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)評(píng)價(jià)藥材品質(zhì)，本研究采用水提醇沉法優(yōu)化紅禾麻多糖提取工藝，建立硫酸-苯酚比色法測(cè)定其含量[9-10]，并對(duì)不同紅禾麻種質(zhì)資源藥材中多糖含量與其相對(duì)應(yīng)的土壤條件、產(chǎn)地氣候等環(huán)境因子進(jìn)行相關(guān)性分析[11-13]，探討紅禾麻多糖成分積累的主要相關(guān)影響因素，為紅禾麻藥材的優(yōu)良種源篩選、GAP規(guī)范化種植以及紅禾麻藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升提供前期研究基礎(chǔ)，以促進(jìn)紅禾麻資源的合理利用和相關(guān)產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 試藥與供試樣品

D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品(購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110833-201205，供含量測(cè)定用)；石油醚(30～60 ℃)、苯酚、濃硫酸、無(wú)水乙醇等均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水。所有實(shí)驗(yàn)藥材樣品均由筆者親自到各分布地點(diǎn)采集，并經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院孫慶文教授準(zhǔn)確鑒定，為蕁麻科艾麻屬植物珠芽艾麻(L.bulbifera(Sieb.et Zucc.)Wedd.)的地下部分，憑證標(biāo)本存放于貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院生藥實(shí)驗(yàn)室。并以深度20 cm、對(duì)角線布點(diǎn)采集相應(yīng)土壤，除去石塊、殘根葉等雜質(zhì)，采取四分法處理得到具有代表性的土壤樣品1 kg。藥材置于40 ℃鼓風(fēng)干燥，粉碎過(guò)三號(hào)篩，置干燥器中備測(cè)。土壤樣品自然風(fēng)干，粉碎過(guò)二號(hào)篩，置干燥器中。

1.1.2 儀 器

UV 1800紫外-可見分光光度儀(日本島津公司)；AG 135電子分析天平(瑞士Mettler-Toledo公司)；etrex venture手持GPS基準(zhǔn)定位儀(中國(guó)臺(tái)灣)；HH-S 2 型數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州普天儀器制造有限公司金壇市晶玻實(shí)驗(yàn)儀器廠)；80-2離心沉淀器(上海手術(shù)器械廠)；202-1 A型電熱恒溫干燥箱(天津市泰斯特儀器有限公司；TPY-6型土壤養(yǎng)分速測(cè)儀(浙江特普儀器有限公司)等。

1.2 方 法

1.2.1 紅禾麻藥材中多糖的含量測(cè)定

1) 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇：分別取葡萄糖對(duì)照品溶液和供試品溶液各1 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下依法顯色，以相應(yīng)試劑為空白，于450～550 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，兩者均在489 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇489 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2) 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品15.90 mg，置于100 mL的容量瓶中，加水溶解并制成濃度為0.159 0 mg/mL的葡萄糖對(duì)照品溶液，備用。

3) 供試品溶液的制備：取樣品粉末1.0 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加入石油醚(30～60 ℃)50 mL，于80 ℃水浴加熱回流0.5 h，趁熱過(guò)濾，將殘?jiān)蜑V紙加入80%乙醇溶液50 mL，置80 ℃水浴回流提取1 h，過(guò)濾。再次將殘?jiān)盀V紙置燒瓶中，加水100 mL，于沸水浴回流提取2次，每次1 h，趁熱過(guò)濾，殘?jiān)盁坑脽崴礈?次，每次10 mL，合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取該濾液10 mL置于量筒中，加無(wú)水乙醇至濃度達(dá)到80%以上，搖勻，冷藏沉淀24 h，將沉淀經(jīng)過(guò)離心，加水溶解轉(zhuǎn)移定容至25 mL量瓶中，即得。

4) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密吸取上述對(duì)照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 mL，分別置于10 mL的容量瓶中，各加水至2.0 mL，加入5%苯酚溶液各1.0 mL，搖勻，在冰水浴中緩緩加入濃硫酸5.0 mL，搖勻，然后置沸水浴中反應(yīng)15 min，取出后立即置于冰水浴中冷卻2 min，加水定容至10 mL，搖勻，置冰水浴中冷卻1 min。以相應(yīng)試劑為空白，于489 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度值。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。

5) 精密度試驗(yàn)：精密吸取上述葡萄糖對(duì)照品溶液0.6 mL，照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法測(cè)定吸光度值，連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算吸光度值的RSD值。

6) 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一樣品粉末(HZST-12)6份，每份1.0 g，精密稱定，分別按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液1 mL，照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法測(cè)定其吸光度值，計(jì)算樣品中多糖含量的RSD值。

7) 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一樣品粉末(HZST-12)1份，1.0 g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，精密吸取1.0 mL供試品溶液，照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的方法，自“加水至2.0 mL”起，分別于0，5，10，15，20，25 min依法測(cè)定其吸光度值，計(jì)算多糖含量的RSD值。

8) 加樣回收率試驗(yàn)：取已知含量的同一樣品粉末(HZST-12)6份，每份0.5 g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法提取、醇沉，將得到的沉淀加水溶解轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加入葡萄糖對(duì)照品適量，加水定容至刻度，搖勻。精密吸取1.0 mL供試品溶液，照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法測(cè)定其吸光度值，計(jì)算其平均回收率和RSD值。

9) 樣品測(cè)定：分別取不同紅禾麻種質(zhì)資源藥材樣品粉末，按供試品溶液的制備方法分別制備供試品溶液，精密吸取1 mL，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制項(xiàng)下的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法測(cè)定其吸光度值，代入上述回歸方程，計(jì)算以葡萄糖計(jì)多糖的含量(同時(shí)照《中國(guó)藥典》2015年版四部0832水分測(cè)定法(第二法)測(cè)定藥材水分含量[14])。

1.2.2 主要?dú)夂蛞蜃拥拇_定

在采集紅禾麻不同種質(zhì)資源藥材時(shí)，采用手持GPS基準(zhǔn)定位儀，測(cè)定紅禾麻不同種質(zhì)資源產(chǎn)地的海拔、經(jīng)度及緯度，并通過(guò)當(dāng)?shù)貧庀蟛块T查詢氣象資料，獲取如年平均溫度、7月平均溫度、年均降水量、年均日照時(shí)數(shù)以及無(wú)霜期等數(shù)據(jù)。

1.2.3 紅禾麻藥材產(chǎn)地土壤養(yǎng)分的含量測(cè)定

1) 土壤中銨態(tài)氮、速效磷、有效鉀及pH值的測(cè)定：將不同紅禾麻種質(zhì)資源產(chǎn)地土壤樣品，采用TPY-6型土壤養(yǎng)分速測(cè)儀并按照其測(cè)定方法，測(cè)定其銨態(tài)氮、速效磷、有效鉀的含量及pH值。

2) 土壤水分的測(cè)定：按照2015年版四部0832水分測(cè)定法(第二法)，測(cè)定土壤水分含量。

1.2.4 紅禾麻多糖含量與土壤因子、氣候因子的相關(guān)性分析

應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件，根據(jù)紅禾麻不同種質(zhì)資源藥材多糖含量及相應(yīng)產(chǎn)地的土壤因子，進(jìn)行線性回歸，得到多糖含量及各因子相關(guān)系數(shù)；對(duì)紅禾麻多糖含量和主要地理氣候因子(海拔、經(jīng)度、緯度、年平均溫度、7月平均溫度、年均降水量、年均日照時(shí)數(shù)以及無(wú)霜期)進(jìn)行多元回歸，得到多糖含量及各因子相關(guān)系數(shù)。

表2 不同產(chǎn)地紅禾麻種質(zhì)資源藥材中多糖含量測(cè)定結(jié)果及對(duì)應(yīng)產(chǎn)地氣候因子數(shù)據(jù)結(jié)果(n=3)

藥材編號(hào) 產(chǎn) 地采集時(shí)間(年/月/日)多糖平均含量(%)海拔(m)緯度(N)經(jīng)度(E)年均氣溫(℃)年均日照時(shí)數(shù)(h)年均降水量(mm)7月均溫(℃)無(wú)霜期(d)SCDW?01貴州水城縣大灣鎮(zhèn)2013/05/304．532320．3026．847148104．63674710．01555．61223．619．8216HZLB?02貴州赫章縣羅布石林2013/05/316．472546．2026．822172104．73033413．41445．8854．122．0245HZLB?03貴州赫章縣羅布石林2013/05/317．582555．9026．821349104．73073913．41445．8854．122．0245HZLB?04貴州赫章縣羅布石林2013/05/3110．212572．9026．823542104．73154413．41445．8854．122．0245HZLB?05貴州赫章縣羅布石林2013/05/315．982580．1926．824566104．73338313．41445．8854．122．0245HZLB?06貴州赫章縣羅布石林2013/05/313．712614．9026．824807104．73338513．41445．8854．122．0245HZLB?07貴州赫章縣羅布石林2013/05/314．472615．5026．824901104．73348913．41445．8854．122．0245HZLB?08貴州赫章縣羅布石林2013/05/313．222550．2026．821506104．72961113．41445．8854．122．0245HZJC?09貴州赫章縣韭菜坪2013/05/314．662588．6026．836065104．70117113．41445．8854．122．0245HZJC?10貴州赫章縣韭菜坪2013/05/318．882517．3026．859965104．69702213．41445．8854．122．0245HZJC?11貴州赫章縣韭菜坪2013/05/318．832516．6026．859864104．69696113．41445．8854．122．0245HZST?12貴州赫章縣水塘鄉(xiāng)2013/06/017．222095．6027．074325104．61554713．41445．8854．122．0245WNYC?13貴州威寧縣鹽倉(cāng)鎮(zhèn)2013/06/017．392444．2026．948907104．41746111．21812．0950．917．0210WNYC?14貴州威寧縣鹽倉(cāng)鎮(zhèn)2013/06/019．172363．8026．944105104．40785211．21812．0950．917．0210WNYC?15貴州威寧縣鹽倉(cāng)鎮(zhèn)2013/06/015．432388．4026．943713104．40826911．21812．0950．917．0210WNYC?16貴州威寧縣鹽倉(cāng)鎮(zhèn)2013/06/017．202380．6026．944047104．40854811．21812．0950．917．0210WNET?17貴州威寧縣二塘鎮(zhèn)2013/06/025．092474．4026．706144104．62867111．21812．0950．917．0210GYST?18貴州貴陽(yáng)市水田鎮(zhèn)2013/06/111．681346．0026．443172106．45541315．31354．01129．524．0270GYLL19紅莖貴州修文六屯引種2013/07/135．211113．0026．305529107．01521715．31354．01129．524．0270GYLL19綠莖貴州修文六屯引種2013/07/136．411113．0026．305529107．01521715．31354．01129．524．0270WNHS?20貴州威寧縣黑石頭鎮(zhèn)2013/08/013．651811．8026．763236104．13686611．21812．0950．917．0210FJS?21貴州梵凈山零步2013/08/197．021700．2027．896292108．72228816．01300．01240．027．5295FJS?22貴州梵凈山蘑菇石2013/08/201．732285．3027．912732108．69336416．01300．01240．027．5295FJS?23貴州梵凈山拜佛臺(tái)2013/08/206．432260．8027．912387108．69312316．01300．01240．027．5295FJS?24貴州梵凈山拜佛臺(tái)2013/08/202．482283．5027．914692108．09216216．01300．01240．027．5295FJS?25貴州梵凈山拜佛臺(tái)2013/08/209．072289．3027．915434108．69219416．01300．01240．027．5295FJS?26貴州梵凈山新金頂2013/08/202．212243．1027．910249108．69216216．01300．01240．027．5295FJS?27貴州梵凈山回香坪2013/08/207．521791．1027．901592108．70390516．01300．01240．027．5295STWL?28貴州松桃縣烏羅鎮(zhèn)2013/08/228．84819．8027．970945108．77603616．51228．01378．327．3293STWL?29貴州松桃縣烏羅鎮(zhèn)2013/08/224．19816．227．971136108．77826616．51228．01378．327．3293TJHY?30貴州臺(tái)江縣金紅陽(yáng)2013/10/027．3790826．593469108．31247816．51239．31133．025．4286TJHY?31貴州臺(tái)江縣金紅陽(yáng)2013/10/026．6794826．584389108．32086516．51239．31133．025．4286TJHY?32貴州臺(tái)江縣金紅陽(yáng)2013/10/026．35114926．577945108．33096916．51239．31133．025．4286TZXC?33貴州臺(tái)江縣展新村2013/10/0310．061650．426．576807108．34546116．51239．31133．025．4286JHBD?34貴州劍河縣白道村2013/10/0410．08639．926．38881108．41459516．71186．01220．026．4300KYZJ?35貴州開陽(yáng)縣紫江地縫2013/11/175．071015．826．916523107．03361712．81084．71258．522．3277KYZJ?36貴州開陽(yáng)縣紫江地縫2013/11/178．671024．426．923006107．03874312．81084．71258．522．3277GYST?37貴州貴陽(yáng)水田上水村2014/08/246．751320．526．752162106．82741312．81084．71258．522．3277XWTJ?39貴州雷山縣雷公山2014/06/270．631258．326．931812106．59055812．61324．91235．222．5270XWLT?40貴州修文縣六屯2014/06/270．421245．5026．971421106．84315412．61324．91235．222．5270DYDP?41貴州都勻斗篷山2014/07/231．601945．226．053214107．69624116．11158．01431．124．8300JLCB?42吉林撫松縣松江河2014/09/074．042350．442．194452127．4844824．02352．5800．023．9140YNKN?43云南省昆明市富民縣老青山2014/10/239．67251525．15315102．260715．82287．0846．519．7245

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果顯示：標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制，計(jì)算得回歸方程和相關(guān)系數(shù)為：A=0.032 C+0.017，r=0.999 6(n=7)，表明葡萄糖濃度在3.180～22.26μg/mL范圍內(nèi)與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。精密度，計(jì)算吸光度值的RSD為0.28%，表明儀器的精密度良好。重復(fù)性，計(jì)算多糖含量的RSD為2.0%，表明本法測(cè)定的重復(fù)性良好。穩(wěn)定性，計(jì)算多糖含量的RSD為2.6%，表明供試品溶液顯色在25 min內(nèi)基本穩(wěn)定。加樣回收率，計(jì)算紅禾麻多糖的平均回收率為104.19%，RSD為0.58%，表明該方法測(cè)定的準(zhǔn)確度較高。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

稱樣量(g)20mL供試液中多糖的含量(mg)對(duì)照品加入量(mg)檢出量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)0．50002．892．886．01104．190．50002．892．885．99103．840．49992．892．886．03104．58104．190．580．49992．892．885．95103．200．50002．892．886．03104．460．50002．892．886．05104．89

表3 土壤因子的含量測(cè)定結(jié)果

土壤樣品編號(hào)銨態(tài)氮N(mg/kg)速效磷P(mg/kg)有效鉀K(mg/kg)pH值水分(%)土壤樣品編號(hào)銨態(tài)氮N(mg/kg)速效磷P(mg/kg)有效鉀K(mg/kg)pH值水分(%)t?SCDW?01土壤13．630．0256．55．969．54t?FJS?22土壤22．032．5349．57．375．31t?HZLB?02土壤35．345．0228．05．939．22t?FJS?23土壤87．052．5207．06．599．02t?HZLB?03土壤26．610．099．56．4710．84t?FJS?24土壤26．045．0207．06．965．10t?HZLB?04土壤30．570．0110．06．809．61t?FJS?25土壤15．025．099．56．243．73t?HZLB?05土壤33．615．0264．06．018．14t?FJS?26土壤11．032．5178．07．663．85t?HZLB?06土壤32．520．0550．06．0115．99t?FJS?27土壤40．0127．5578．06．538．43t?HZLB?07土壤87．070．0284．07．1610．30t?STWL?28土壤107．030．3128．04．555．37t?HZLB?08土壤27．595．0400．07．398．06t?STWL?29土壤28．050．0128．06．703．12t?HZJC?09土壤46．050．0512．56．4311．82t?TJHY?30土壤59．96．0358．05．074．29t?HZJC?10土壤151．060．0495．06．5513．92t?TJHY?31土壤75．38．4699．55．097．01t?HZJC?11土壤61．060．0825．06．7111．48t?TJHY?32土壤26．05．0449．55．863．57t?HZST?12土壤57．030．0111．55．9115．77t?TZXC?33土壤28．65．1533．05．784．42t?WNYC?13土壤34．020．0562．55．968．28t?JHBD?34土壤31．35．2458．05．815．09t?WNYC?14土壤18．0100．078．06．997．40t?KYZJ?35土壤23．316．6849．57．877．08t?WNYC?15土壤63．085．0221．06．8911．28t?KYZJ?36土壤21．317．4174．57．894．30t?WNYC?16土壤54．0150．0224．57．3714．44t?GYST?37土壤22．418．9133．07．808．18t?WNET?17土壤18．0120．0281．57．637．30t?XWTJ?39土壤20．85．4663．05．937．24t?GYST?18土壤9．555．074．55．962．22t?XWLT?40土壤32．55．43150．05．623．86t?GYLL?19(紅莖)土壤9．030．042．06．223．16t?DYDP?41土壤20．87．0299．06．552．76t?GYLL?19(綠莖)土壤9．030．042．06．223．16t?JLCB?42土壤46．38．11966．06．0611．12t?WNHS?20土壤22．035．096．07．066．12t?YNKN?43土壤15．16．71100．08．5810．75t?FJS?21土壤51．032．5485．07．5510．22

2.2藥材中多糖含量測(cè)定結(jié)果及對(duì)應(yīng)產(chǎn)地氣候因子測(cè)定和查詢結(jié)果

不同產(chǎn)地紅禾麻種質(zhì)資源藥材中多糖含量在0.42%～10.21%，含量差異較大。該方法簡(jiǎn)便可行、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為紅禾麻藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。結(jié)果見表2和圖1。

2.3 土壤中銨態(tài)氮、速效磷、有效鉀、pH值和水分的測(cè)定以及氣候因子結(jié)果

紅禾麻種質(zhì)資源不同產(chǎn)地土壤樣品中銨態(tài)氮、速效磷、有效鉀及水分的含量，土壤pH值測(cè)定結(jié)果見表3。

2.4 紅禾麻多糖含量與土壤因子、氣候因子的相關(guān)性分析結(jié)果

分析結(jié)果表明：紅禾麻藥材多糖含量與其對(duì)應(yīng)的土壤銨態(tài)氮N和水分含量呈正相關(guān)，與有效鉀K含量呈負(fù)相關(guān)(0.1<|r|<0.3)；與土壤速效磷P含量和pH值的相關(guān)系數(shù)非常小(0<|r|<0.09)，相關(guān)系數(shù)絕對(duì)值大小依次為：|r|銨態(tài)氮N>|r|有效鉀K>|r|水分>|r|速效磷P>|r|pH值。說(shuō)明適當(dāng)提高土壤中銨態(tài)氮N和土壤水分的含量可以促進(jìn)紅禾麻多糖成分的積累，適量降低土壤中有效鉀K的含量也可以促進(jìn)紅禾麻多糖成分的積累，而土壤速效磷和土壤pH值影響較小。紅禾麻藥材多糖含量與其對(duì)應(yīng)的年均氣溫呈正相關(guān)，與年均降水量、經(jīng)度、緯度、呈負(fù)相關(guān)(0.1<|r|<0.3)；與7月均溫、年均日照時(shí)數(shù)、無(wú)霜期、海拔高度的相關(guān)系數(shù)很低(0<|r|<0.09)，相關(guān)系數(shù)絕對(duì)值大小為|r|年平均降水量>|r|經(jīng)度>|r|緯度=|r|平均氣溫>|r|7月溫度>|r|年均日照時(shí)數(shù)>|r|無(wú)霜期>|r|海拔。說(shuō)明年均溫度和年均日照時(shí)數(shù)的增加可促進(jìn)紅禾麻不同種質(zhì)資源藥材中多糖成分的積累，而年均降雨量和7月溫度的降低及適合的經(jīng)緯度也可以促進(jìn)紅禾麻多糖成分的積累。結(jié)果見表4和表5。

表4 紅禾麻種質(zhì)資源藥材中多糖含量與各土壤因子相關(guān)系數(shù)結(jié)果

多糖含量銨態(tài)氮N速效磷P有效鉀KpH值銨態(tài)氮N0．281速效磷P0．0750．160有效鉀K-0．2480．053-0．261pH值-0．032-0．2690．334-0．121水分0．2280．4500．3070．0540．146

圖1 不同產(chǎn)地紅禾麻種質(zhì)資源藥材中多糖含量柱形圖

表5 紅禾麻種質(zhì)資源藥材中多糖含量與各地理氣候因子相關(guān)系數(shù)結(jié)果

多糖含量海拔緯度經(jīng)度年均氣溫年均日照時(shí)數(shù)年均降水量7月均溫海拔0．003緯度-0．1370．109經(jīng)度-0．143-0．2240．904年均氣溫0．137-0．397-0．568-0．246年均日照時(shí)數(shù)0．0670．5450．4150．105-0．657年均降水量-0．219-0．681-0．1280．2100．507-0．6477月均溫-0．068-0．4130．1580．4700．671-0．6220．609無(wú)霜期-0．014-0．541-0．440-0．0750．908-0．8470．7370．784

3 討 論

3.1由于紅禾麻地下部分藥材呈棕褐色或灰棕色，提取的供試品溶液多為棕紅色，會(huì)干擾顯色測(cè)定多糖含量。所以，如何排除紅禾麻藥材自身顏色的干擾保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，是供試品溶液提取條件的關(guān)鍵所在，本文在參考文獻(xiàn)基礎(chǔ)上，在采用水提取多糖之前，首先采用石油醚(30～60 ℃)于80 ℃水浴加熱回流0.5 h脫脂，溶液顏色干擾明顯減少，然后再用80%乙醇回流1 h，既能起到除去單糖的作用，同時(shí)又有進(jìn)一步減少溶液顏色干擾的作用。同時(shí)還考慮到紅禾麻水提溶液中尚可能存在雜質(zhì)對(duì)顯色有影響，對(duì)比了不同水提液取樣量及不同醇沉?xí)r間，對(duì)紅禾麻多糖沉淀純度和方法回收率的影響，優(yōu)化醇沉除雜條件。通過(guò)以上對(duì)紅禾麻多糖含量測(cè)定的提取條件、顯色條件等因素的考察，建立了紅禾麻藥材中多糖的含量測(cè)定方法。該方法簡(jiǎn)便可行、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(2003年版)收載的紅禾麻藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升奠定一定的理論基礎(chǔ)。

3.2本實(shí)驗(yàn)中相關(guān)性分析結(jié)果顯示，不同紅禾麻種質(zhì)資源藥材產(chǎn)地的降雨量對(duì)紅禾麻多糖的積累有較大影響，其次是經(jīng)度、緯度和平均氣溫，影響紅禾麻多糖含量的土壤因子主要是土壤銨態(tài)氮N，其次為土壤有效鉀K和土壤水分，建議在對(duì)紅禾麻藥材開展人工種植研究時(shí)，應(yīng)適當(dāng)多施氮肥，減少鉀肥的使用，同時(shí)應(yīng)保證水分的充足。

3.3本實(shí)驗(yàn)測(cè)定分析的42個(gè)紅禾麻種質(zhì)資源中，以其地下部分藥材中多糖的含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，初步篩選出貴州赫章羅布石林、韭菜坪、水塘鄉(xiāng)的4號(hào)、10號(hào)、11號(hào)種源，貴州威寧縣鹽倉(cāng)鎮(zhèn)、梵凈山、臺(tái)江、松桃、劍河以及云南富民的14號(hào)、25號(hào)、28號(hào)、33號(hào)、34號(hào)、43號(hào)種源的藥材品質(zhì)較好，研究結(jié)果為紅禾麻藥材的優(yōu)良種質(zhì)資源篩選及GAP規(guī)范化種植提供一定的前期實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)。

[1]國(guó)家中醫(yī)藥管理局.《中華本草》編委會(huì).中華本草(苗藥卷)[M].貴陽(yáng):貴州科技出版社,2005:283-284.

[2]貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[S].貴陽(yáng):貴州科技出版社,2003:187.

[3]羅迎春,孫慶文.貴州民族常用天然藥物(第2卷)[M].貴陽(yáng):貴州科技出版社,2013:231-232.

[4]朱珠,馬琳,朱海燕,等.民族藥珠芽艾麻化學(xué)成分研究[J].中藥材,2011,34(2):223-225.

[5]Wen-Rui Hou,Zhi-Qiang Su,Hui-Fang Pi,et al.Immunosuppressive constituents from Urtica dentata Hand[J].Journal of Asian Natural Products Research,2010,12(8):707-713.

[6]Min Chenl Yang,Sang Zin Choi,Sung Ok Lee,et al.Flavonoid Constituents and Their Antioxidant Activity of Laportea bulbifera Weddell[J].Kor.J.Pharmacogn,2003,34(1):18-24.

[7]向明,陶恩,儲(chǔ)潼,等.紅活麻有效部位干預(yù)Ⅱ型膠原所致關(guān)節(jié)炎的作用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2006,26(10):1 201-1 205.

[8]蘇志強(qiáng),趙增宇,謝勝男,等.紅禾麻提取物鎮(zhèn)痛抗炎和免疫抑制活性研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào),2009,25(4):559-560.

[9]針?gòu)?高建平,曹玲亞.潞黨參多糖含量測(cè)定[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2014,32(3):498-500.

[10]張璐,翁立冬,劉莉,等.苯酚-硫酸法測(cè)定烏梅多糖的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(6):107-109.

[11]王光志,馬云桐,萬(wàn)德光.環(huán)境因子與遠(yuǎn)志藥材質(zhì)量相關(guān)性分析[J].中國(guó)藥房,2009,20(27):2 147-2 149.

[12]謝彩香,索風(fēng)梅,賈光林,等.人參皂苷與生態(tài)因子的相關(guān)性[J].生態(tài)學(xué)報(bào),2011,31(24):7 551-7 563.

[13]曹海祿,曹國(guó)番,魏建和,等.遺傳和環(huán)境因子對(duì)藥用植物品質(zhì)的影響[J].中草藥,2007,38(5):785-788.

[14]國(guó)家藥典委員會(huì).《中國(guó)藥典》第四部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:37-40,103-105.

Correlation Analysis on Polysaccharide Content of Medicinal Material of Miao National HerbsLaporteabulbiferaGermplasm with Environmental Factors

ZOUShuhan1，YANGYong1，WENDi1，CHENYingrui1，XUWenfen1，2，WEIShenghua1

2016-03-30

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(批準(zhǔn)號(hào):81260687)；貴州省省長(zhǎng)基金項(xiàng)目 (編號(hào)：黔省專合字[2011]61號(hào))；國(guó)家工程技術(shù)研究中心組建項(xiàng)目(編號(hào)：2014 FU 125 Q 09)；貴州省中藥現(xiàn)代化項(xiàng)目(編號(hào)：黔科合中藥[2011] 5033號(hào))；貴州省教育廳125重大科技專項(xiàng)(編號(hào)：黔教合重大專項(xiàng)[2012]010號(hào))；貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院2014年研究生及大學(xué)生創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：ZYYCX 14022和貴中醫(yī)大創(chuàng)合字[2014]33號(hào))。

鄒淑涵(1991—),女，研究生,研究方向：中藥、民族藥質(zhì)量控制與新藥開發(fā)；E-mail:346141313@qq.com。

徐文芬(1964—),女，教授,主要從事中藥資源及質(zhì)量控制研究；E-mail:wenfenxu@126.com。

10.16590/j.cnki.1001-4705.2016.08.060

S 567.23+9

A

1001-4705(2016)08-0060-06