成永明 崔小敏 雷 琨 石會(huì)麗 王文驪 劉軍鋒

陜西省渭南市食品藥品檢驗(yàn)所(渭南 714000)

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·方藥縱橫·

正交試驗(yàn)法優(yōu)選清肺健中顆粒的提取工藝

成永明 崔小敏△雷 琨△石會(huì)麗△王文驪▲劉軍鋒△

陜西省渭南市食品藥品檢驗(yàn)所(渭南 714000)

目的：優(yōu)選清肺健中顆粒的水提取工藝。方法：通過(guò)正交試驗(yàn)考察加水量、提取時(shí)間和提取次數(shù)對(duì)清肺健中顆粒提取工藝的影響。以黃芩苷含量和干膏率考察指標(biāo)，綜合評(píng)分法優(yōu)選最佳工藝條件，采用HPLC測(cè)定黃芩苷的含量，流動(dòng)相甲醇-0.4%磷酸水溶液(47∶53)，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。結(jié)果：最佳提取工藝為加8倍量水，煎煮3次，每次1.5h。結(jié)論：優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定、簡(jiǎn)便可行，可用于清肺健中顆粒的提取生產(chǎn)。

概述清肺健中顆粒是由黃芩、太子參、桔梗、陳皮等10余味藥材組成的復(fù)方制劑，具有宣肺平喘、清肺化痰、理中健脾的功效，臨床用于慢性阻塞性肺病、支氣管擴(kuò)張、支氣管哮喘、肺纖維化合并感染及肺癌等見(jiàn)上述癥狀者。方中黃芩為君藥，具有清熱燥濕，瀉火解毒的功效，用于治療肺熱咳嗽、胃腸濕熱等癥[1]。黃芩苷是黃芩的主要藥效成分，含量高達(dá)黃芩藥材的9%以上，具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗過(guò)敏等多種藥理作用[2]。本文采用正交試驗(yàn)法[3-4]，以黃芩苷含量和干膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用綜合評(píng)分法[5-7]來(lái)優(yōu)選影響水煎提取工藝的最佳因素指標(biāo)，以保證臨床用藥的有效性。

1 儀器與試藥 高效液相色譜儀(島津LC-2010A型)，紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器(UV-VIS)，化學(xué)工作站(LC-Solution)，昆山市超聲儀器有限公司的超聲波清洗機(jī)(KQ-100型)、北京賽多利斯天平有限公司的電子分析天平(BT25S,d=0.01mg；BS210Sd=0.1mg)。乙腈為色譜純?cè)噭?，水為重蒸水，其它試劑均為分析純。試?yàn)用藥材購(gòu)自于西安盛興中藥飲片有限責(zé)任公司(符合 《中國(guó)藥典》2015版)。黃芩苷購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所(供含量測(cè)定用，批號(hào)：110715-201318，純度93.30%)，使用前置干燥器中干燥至恒重。

2 方法與結(jié)果 2.1以預(yù)試驗(yàn)為基礎(chǔ)，進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，考察因素為加水量、提取次數(shù)、提取時(shí)間，因素水平見(jiàn)表1。

2.2 干浸膏得率的測(cè)定方法 每個(gè)試驗(yàn)號(hào)的樣品溶液，精密量取100ml，于已干燥至恒重的150ml蒸發(fā)皿中，蒸干，105℃干燥3h，置干燥器中冷卻至室溫，迅速稱(chēng)重，計(jì)算干浸膏得率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 試驗(yàn)因素水平表

2.3 測(cè)定黃芩苷含量 2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；色譜柱：Akasil-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；以甲醇-0.4%磷酸溶液(47∶53)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；柱溫為30℃流速為每分鐘1.0ml。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。

2.3.2 制備對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品11.96mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶液稀釋制成含黃芩苷0.5579mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液5ml，置于50ml量瓶中，用甲醇稀釋制成含黃芩苷 0.0558mg/ml的對(duì)照品溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備：對(duì)各正交樣品濾液精密量取1ml，于10ml量瓶中，用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取其續(xù)濾液為供試品。

2.3.4 陰性對(duì)照溶液的制備：按擬定制劑工藝，制得黃芩陰性對(duì)照樣品，按照“2.3.3”項(xiàng)制備法制得陰性對(duì)照溶液。

2.3.5 測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3.6 方法學(xué)考察：分別精密吸取濃度為0.0558mg/ml黃芩苷對(duì)照品溶液2μl、4μl、8μl、12μl、16μl、20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣對(duì)照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得方程Y=3414580×-37645，r=0.9999。線性范圍0.1116～1.1160μg。精密度試驗(yàn)以黃芩苷峰面積值計(jì)算的RSD為 0.23%，表明儀器精密度良好；穩(wěn)定性試驗(yàn) 以0～12h內(nèi)黃芩苷峰面積值計(jì)算的RSD為0.87%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定性較好；重復(fù)性試驗(yàn)測(cè)得黃芩苷含量的RSD為 0.62%，表明本方法重復(fù)性較好；加樣回收率平均值為 100.61%，RSD為0.98%，回收率良好。

圖1 對(duì)照品溶液(A)、供試品溶液(B)與陰性對(duì)照溶液(C)高效液相色譜圖(1黃芩苷)

2.4 提取工藝優(yōu)選 選黃芩苷含量及干膏率的綜合評(píng)分為指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)分別為50%，50%。綜合評(píng)分=黃芩苷含量/黃芩苷含量最大值×50%+干膏率/干膏率最大值×50%，對(duì)水提條件進(jìn)行優(yōu)選。試驗(yàn)安排及結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。固本清顆粒金水提取工藝過(guò)程中，不同的工藝參數(shù)會(huì)影響提取效果。以綜合評(píng)分考察指標(biāo)，A2>A3>A1，B3>B2>B1，C3>C2>C1，C因素(提取次數(shù))影響最大，A因素(加水量)次之，B因素(煎煮時(shí)間)影響最小。方差分析結(jié)果見(jiàn)表8，結(jié)果表明，因素C有顯著影響(P<0.05)，因素A和B對(duì)試驗(yàn)結(jié)果均無(wú)顯著性影響(P>0.05)，兼顧能源的節(jié)約，以A2B2C3為佳，即最佳提取工藝為加水8倍量、煎煮3次、每次1.5h。

表2 固本清金顆粒水提L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析結(jié)果

2.5 驗(yàn)證試驗(yàn) 稱(chēng)取處方量藥材按優(yōu)選的提取工藝進(jìn)行試驗(yàn)，平行操作3份，分別測(cè)定黃芩苷含量和干膏率。計(jì)算結(jié)果接近或高于正交表中最優(yōu)值，黃芩苷和干膏率基本穩(wěn)定，黃芩苷含量分別為 6.670，6.816，6.725mg/g，干膏率分別26.03%，26.76%，26.37%，RSD分別為1.10% 和1.38%(n=3)，說(shuō)明該工藝穩(wěn)定、可行。

3 討 論 試驗(yàn)結(jié)果表明，甲醇和乙醇作為提取溶劑時(shí)黃芩苷的峰面積差異不大，因此最終選擇安全低毒的乙醇作為樣品的提取溶劑。

黃芩苷含量測(cè)定色譜條件參考2015年版《中國(guó)藥典》[1]黃芩項(xiàng)下相關(guān)條件，最終采用甲醇-0.4%磷酸(47∶53)為流動(dòng)相時(shí)，黃芩苷分離度良好，峰形對(duì)稱(chēng)，陰性對(duì)照表明黃芩苷色譜峰不受其他成分干擾，方法專(zhuān)屬性良好。

清肺健中顆粒在臨床應(yīng)用中多用湯劑，依據(jù)本處方劑量大，結(jié)合顆粒劑的特點(diǎn)，將其設(shè)計(jì)為顆粒制劑，對(duì)其水煎提取工藝，采用正交設(shè)計(jì)法進(jìn)行優(yōu)化，選擇黃芩苷含量和干膏率進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，依據(jù)各工藝參數(shù)對(duì)制劑提取結(jié)果的影響，優(yōu)選出的最佳參數(shù)，保證工藝穩(wěn)定可行，可為清肺健中顆粒的生產(chǎn)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典 [S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015.

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(收稿2016-07-25；修回2016-08-17)

黃芩苷 工藝學(xué) 色譜法,高壓液相 @清肺健中顆粒

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Adoi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.11.048

△陜西省中醫(yī)藥研究院 (西安710068)

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