褚雪鐳,楊興言,甄蓉蓉,王彥芳,秦林
(山東中醫(yī)藥大學(xué),山東 濟(jì)南 250355)
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“附子走而不守”性能表征的實(shí)驗(yàn)研究
褚雪鐳,楊興言,甄蓉蓉,王彥芳*,秦林
(山東中醫(yī)藥大學(xué),山東 濟(jì)南 250355)
目的:通過比較觀察附子以及附子配伍干姜后對(duì)正常小鼠的影響,研究“附子走而不守”的性能表征。方法:采用小鼠肛溫、抗疲勞游泳、毒性實(shí)驗(yàn)、心電圖檢測以及溫度趨向性等實(shí)驗(yàn),比較觀察正??瞻捉M、附子組、附子干姜組(2:1、1:1組)對(duì)正常小鼠上述實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的影響。結(jié)果:與正??瞻捉M比較,附子組平均體溫明顯降低,平均體能減弱,抗疲勞游泳時(shí)間縮短,心率、心電圖幅度均呈下降趨勢,LD50全部死亡。而附子配伍干姜?jiǎng)t能明顯改善其反應(yīng)。結(jié)論:附子“走而不守”之性,體現(xiàn)在使正常老鼠的代謝加快,出汗量增加,從而導(dǎo)致肛溫、體能、心率降低,甚至死亡等毒性表征。提示臨床單用本品需尤為謹(jǐn)慎。
附子走而不守;小鼠肛溫;抗疲勞游泳;附子致死毒性;溫度趨向性
附子為毛茛科植物烏頭(AconitumcarmichaeliDebx)的子根的加工品。味辛甘、性大熱、有毒,歸心、腎、脾經(jīng),具有回陽救逆,補(bǔ)火助陽,散寒止痛之功效。對(duì)于“附子走而不守”之性能,歷代醫(yī)家早有論述,如元代王好古言:“附子,入手少陽三焦、命門之劑,浮中沉,無所不至,味辛大熱,為陽中之陽,故行而不止,非若干姜止而不行也”,并曰“附子善走,過于發(fā)散?!?《湯液本草》);朱震亨謂:“附子之性走而不守,但取其健悍走下之性,以行地黃之滯,可致遠(yuǎn)爾?!?《丹溪心法》);清代汪昂也有“附子辛甘有毒,大熱純陽。其性浮而不沉,其用走而不守,通行十二經(jīng),無所不至。”(《本草備要》)之言。近年來諸多學(xué)者從藥理、毒理實(shí)驗(yàn)以及化學(xué)成分檢測等方面,對(duì)附子進(jìn)行了研究[1-9],但是如何認(rèn)識(shí)附子“走而不守”,其臨床或?qū)嶒?yàn)反應(yīng)如何,仍有待于進(jìn)一步明確。
本項(xiàng)目在前人研究的基礎(chǔ)上,以中醫(yī)藥理論和藥理學(xué)方法為指導(dǎo),以附子與附子配伍干姜做比較,探討了“附子走而不守”的性能表征,以期為臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
健康昆明種系小鼠,雌雄各半,體質(zhì)量(30±5)g。購于山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。動(dòng)物飼養(yǎng)于清潔級(jí)動(dòng)物室,明暗周期12 h,自由飲食飲水,室內(nèi)溫度22~26℃,濕度50%~60%。
1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
附子(Radix Aconiti Praeparata),產(chǎn)地四川,購于濟(jì)南漱玉平民大藥房有限公司;干姜(rhizome zingiberis),產(chǎn)地四川,購于濟(jì)南漱玉平民大藥房有限公司。經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)中藥教研室周鳳琴教授鑒定,符合《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)。
1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
常用手術(shù)器械、MPA-2002生物信號(hào)分析系統(tǒng)(上海奧爾科特生物科技有限公司);電子溫度計(jì)(東莞市黃江百綠電子廠,KD-204);電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有統(tǒng)公司,BS223S型);心電圖儀(上海奧爾科特生物有限公司生產(chǎn)的MPA2002生物信號(hào)分析系統(tǒng));動(dòng)物溫度趨向性行為學(xué)智能檢測系統(tǒng)(山東中醫(yī)藥大學(xué)自制)。
1.4 實(shí)驗(yàn)方法
1.4.1 中藥水煎劑的制備
附子水煎液:取附子30 g,加8倍蒸餾水煎煮,至口嘗無麻后過濾,經(jīng)65℃水浴濃縮成100%的附子水煎液,即1 ml水煎液含1 g附子。
附子干姜2:1水煎液:取附子20 g、干姜10 g,制備原理同附子水煎液。
附子干姜1:1水煎液:取附子15 g、干姜15 g,制備原理同附子水煎液。
水煎液放入冰箱儲(chǔ)存。
1.4.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
實(shí)驗(yàn)小鼠稱重、編號(hào)并按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組:正??瞻捉M(簡稱空白組)、附子組、附子干姜2:1組、附子干姜1:1組,10只/組。
1.4.3 小鼠體溫測定
在實(shí)驗(yàn)前12 h對(duì)小鼠禁食,排凈排泄物,防止檢測體溫有誤??瞻捉M、附子組、附子干姜2∶1組、附子干姜1∶1組小鼠分別給予生理鹽水、附子水煎液、附子干姜2∶1水煎液、附子干姜1:1水煎液灌胃,根據(jù)小鼠體質(zhì)量計(jì)算給藥量。給藥劑量為0.6 ml/20 g。
給藥30 min后,用電子體溫計(jì)檢測小鼠直腸溫度。檢測前,先將膠布纏在體溫計(jì)表頭2 cm位置,以防止在檢測時(shí)因體溫表插入深淺不同而引起誤差。
1.4.4 小鼠抗疲勞游泳實(shí)驗(yàn)
水煎劑灌胃30 min后,將小鼠放入水溫30℃、水深30 cm的水槽中游泳,記錄小鼠游泳時(shí)間。用木棒輕輕攪動(dòng)水面保證小鼠持續(xù)游泳。小鼠放入水槽時(shí)開始計(jì)時(shí),當(dāng)小鼠沉入水中不再浮出水面超過10 s時(shí)停止計(jì)時(shí)。
1.4.5 小鼠致死毒性實(shí)驗(yàn)(LD50實(shí)驗(yàn))
先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),得出小鼠0和100%死亡率的附子劑量。
取100只小鼠,隨機(jī)分成空白對(duì)照組和9個(gè)劑量組,每組雌雄各5只。禁食12 h后一次性給予0.9%的生理鹽水和不同劑量的附子水煎液灌胃(0.3 ml/10 g),連續(xù)觀察7 d,記錄小鼠的毒性反應(yīng)癥狀、死亡數(shù)和死亡時(shí)間。
1.4.6 小鼠心電圖檢測
水煎劑灌胃小鼠,觀察小鼠的死亡時(shí)間和死亡過程中心電圖的變化。
心電圖記錄:記錄小鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖。增益1000,濾波50,時(shí)間常數(shù)0.1 S。檢測心電圖心率、R波幅度、心電圖漏博和R波倒置狀況。
1.4.7 溫度趨向性實(shí)驗(yàn)
本實(shí)驗(yàn)在冷熱板示差法[10]的基礎(chǔ)上加以改進(jìn),采用動(dòng)物溫度趨向性行為學(xué)智能檢測系統(tǒng),觀察小鼠溫度趨向性行為。室溫(24±2)℃下,設(shè)置自動(dòng)溫度控制系統(tǒng)不同溫區(qū)的底板溫度(低溫板25℃,高溫板40℃),待冷熱板的溫度達(dá)到預(yù)設(shè)溫度,小鼠灌胃30 min后,分別將各組小鼠放入相應(yīng)的冷熱板中,監(jiān)測其冷熱板冷熱溫區(qū)趨向活動(dòng), 并對(duì)活動(dòng)軌跡進(jìn)行全程記錄。
停留比例(%)=高溫區(qū)停留時(shí)間(s)/總監(jiān)測時(shí)間(s)×100%
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2.1 各組小鼠肛溫測定結(jié)果
體溫的高低標(biāo)志著機(jī)體熱量代謝的盈虧。實(shí)驗(yàn)過程中肉眼觀察,給藥30 min后,附子組小鼠皮毛和墊料明顯濕潤,出汗量、飲水量、尿量明顯多于空白組和配伍組。附子組小鼠肛溫與空白組和配伍組比較均有顯著差異。提示附子降低小鼠肛溫可能與出汗量較多有關(guān)。見表1。
表1 對(duì)小鼠肛溫的影響
注:與正??瞻捉M比較,*P<0.05,**P<0.01;與附子干姜2∶1組比較,#P<0.05;與附子干姜1∶1組比較,&&P<0.01。
2.2 小鼠抗疲勞游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果
小鼠游泳時(shí)間的長短可以反映小鼠抗疲勞的程度[11]。給藥30 min后進(jìn)行游泳。結(jié)果發(fā)現(xiàn):附子組小鼠游泳時(shí)間明顯短于對(duì)照組和配伍組,與對(duì)照組和配伍組比較差異均有顯著性意義,提示附子縮短了小鼠抗疲勞游泳的時(shí)間,附子組小鼠明顯易疲勞。見表2。
表2 對(duì)小鼠抗疲勞游泳的影響
注:與正??瞻捉M比較,*P<0.05,**P<0.01;與附子干姜2∶1組比較,#P<0.05;與附子干姜1∶1組比較,&&P<0.01。
2.3 附子急性毒性實(shí)驗(yàn)
通過LD50實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),附子灌胃后小鼠全部死亡,但死亡時(shí)間差異較大,最短20 min,最長10 h,大約平均6 h。其致死原因,可能與小鼠大量出汗,導(dǎo)致陽氣外脫有關(guān)。
2.4 附子對(duì)小鼠心電圖的影響
2.4.1 對(duì)心率的影響
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示隨灌胃時(shí)間的延長,附子組小鼠心率下降最明顯,與正常空白組和配伍組比較有明顯差異。結(jié)果見圖1。
圖1 灌胃后小鼠心率隨時(shí)間的變化注:與空白組比較, **P<0.01;與附子干姜2∶1組比較,##P<0.05;與附子干姜1∶1組比較,&&P<0.01。
2.4.2 對(duì)幅度的影響
圖2顯示,附子組小鼠心電圖振幅變化大,呈顯著下降趨勢,與時(shí)間成正比。差異有顯著性意義。
圖2 灌藥后小鼠心電圖幅度隨時(shí)間的變化注:與空白組比較,**P<0.01;與附子干姜2∶1組比較,##P<0.05;與附子干姜1∶1組比較,&&P<0.01。
2.5 對(duì)小鼠溫度趨向行為的影響
圖3顯示,附子組小鼠熱區(qū)停留比例與正??瞻捉M相近。配伍組熱區(qū)停留比例明顯降低,小鼠趨寒性感知增強(qiáng)。而與附子干姜配伍組比較,附子組小鼠高溫區(qū)停留比例>50%,提示附子組小鼠體內(nèi)熱量不及配伍組,其結(jié)果也能反應(yīng)“附子無姜不熱”、附子“走而不守” 的性能特點(diǎn)。
圖3 附子及附子配伍干姜水煎劑對(duì)正常小鼠熱區(qū)停留比例的影響注:與空白組比較, **P<0.01;與附子干姜2∶1組比較,##P<0.05;與附子干姜1∶1組比較,&&P<0.01。
綜上所述,附子能明顯增加正常小鼠出汗量,表現(xiàn)為降低體溫,減弱體能,使心電圖異常甚至死亡等毒性反應(yīng)。說明對(duì)于正常小鼠,附子“走而不守”的性能,主要體現(xiàn)在附子對(duì)于機(jī)體的毒性反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)證明附子“走而不守”之性可能因大辛大熱,驅(qū)汗外泄,導(dǎo)致陽氣外脫,故臨床單用本品需尤為謹(jǐn)慎。而配伍干姜后,小鼠體溫、體能、心電圖等呈平穩(wěn)趨勢,毒性明顯減弱,小鼠耐寒性明顯增加。
附子“走而不守”,一方面體現(xiàn)于毒性表征,表現(xiàn)在體溫、體能降低,心率減慢甚至亡陽死亡。以往研究也證實(shí),附子主要作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心臟、肌肉組織[12],應(yīng)用不當(dāng)可能導(dǎo)致嚴(yán)重后果,本項(xiàng)目研究與之相符。但是另一方面,中醫(yī)臨床通過與相關(guān)藥物配伍,附子“走而不守”之性又表現(xiàn)了積極意義。如附子與熟地黃配伍,可制熟地黃之滋膩,使熟地黃補(bǔ)而不滯;附子與干姜配伍可回陽救逆,搶救亡陽證,故有“有姜無附,難收斬將奪旗之功; 有附無姜,難取堅(jiān)壁不動(dòng)之效”之言(《本經(jīng)疏證》)。因此,附子臨床用藥要配伍嚴(yán)謹(jǐn),既要防止和制約其走散之性,又要善于利用附子“走而不守”之性,通過合理配伍以趨利避害。
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山東中醫(yī)藥大學(xué)大學(xué)生研究訓(xùn)練計(jì)劃(SRT)項(xiàng)目(No.2015401);山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)研究課題(No.2014-011)
褚雪鐳(1995-),女,山東中醫(yī)藥大學(xué)2013級(jí)中西醫(yī)臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)生。
王彥芳*(1984-),女,講師,主要研究方向:中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)。
2016-05-12
R285.5
A
1002-2406(2016)06-0005-03
修回日期:2016-06-10