鄭建濤 陳 輝 周俊峰 張 琳

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸外科，福建 福州 350005)

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直腸巨大絨毛狀腺瘤患者環(huán)氧酶-2、p53的表達(dá)及臨床意義

鄭建濤 陳 輝 周俊峰 張 琳

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸外科，福建 福州 350005)

目的 探討環(huán)氧酶(Cox)-2、p53的表達(dá)對(duì)直腸絨毛狀腺瘤經(jīng)內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)(ESD)后復(fù)發(fā)的意義。方法 回顧性分析內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后經(jīng)病理證實(shí)為直腸絨毛狀腺瘤的老年患者90例的臨床資料，標(biāo)本于病理科制作石蠟包塊，根據(jù)術(shù)后隨訪情況是否復(fù)發(fā)分組，復(fù)發(fā)組39例，未復(fù)發(fā)組51例，另選取直腸癌及正常直腸標(biāo)本各10例作為對(duì)照，通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Cox-2、p53在各組織中的表達(dá)，探討其表達(dá)水平對(duì)于腺瘤復(fù)發(fā)的意義。結(jié)果 各組Cox-2、p53表達(dá)存在差異。Cox-2表達(dá)水平在瘤體直徑大小、是否復(fù)發(fā)分組中存在差異，p53表達(dá)水平在是否復(fù)發(fā)分組中存在差異(P<0.05)。Cox-2與p53的表達(dá)呈高度正相關(guān)，且為直腸絨毛狀腺瘤復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)論 Cox-2與p53蛋白高表達(dá)與直腸絨毛狀腺瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，對(duì)其表達(dá)水平的監(jiān)測(cè)可能對(duì)預(yù)測(cè)腫瘤的復(fù)發(fā)具有重要意義。

直腸絨毛狀腺瘤；環(huán)氧酶(Cox)-2；p53；免疫組織化學(xué)

絨毛狀腺瘤屬于一種消化道常見(jiàn)的癌前病變，好發(fā)于直腸及乙狀結(jié)腸，多發(fā)于老年患者，40歲以下患者較少〔1〕。直腸絨毛狀腺瘤的癌變率可達(dá)到4%～40%，早期腸鏡活檢極難發(fā)現(xiàn)是否出現(xiàn)癌變，直腸指診常出現(xiàn)遺漏〔2,3〕。有報(bào)道稱(chēng)瘤體大于2 cm時(shí)癌變率可達(dá)50%以上，但是其具體機(jī)制尚不清楚，對(duì)于其與生長(zhǎng)因子、癌基因的關(guān)系是目前研究的熱點(diǎn)〔4,5〕。前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合成酶環(huán)氧酶(Cox)-2可將花生四烯酸代謝為各種產(chǎn)物，參與機(jī)體的炎癥、發(fā)熱等多種病理過(guò)程〔6〕。抑癌基因p53可維持機(jī)體細(xì)胞基因組的穩(wěn)定，當(dāng)致癌因素出現(xiàn)，p53會(huì)出現(xiàn)缺失突變，從而導(dǎo)致細(xì)胞的無(wú)限增殖〔7〕。Cox-2及p53均在癌前病變過(guò)程中扮演重要角色，本研究對(duì)Cox-2及p53在直腸絨毛狀腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)中的意義進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1 臨床材料 回顧性分析我院2011年1月至2014年1月行內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后經(jīng)病理證實(shí)為直腸絨毛狀腺瘤的老年患者(≥60歲)90例的臨床資料，其中男性47例，女性43例，平均年齡(71.39±11.05)歲，瘤體直徑<2 cm 48例，≥2 cm 42例。根據(jù)術(shù)后1年內(nèi)隨訪是否復(fù)發(fā)分組，復(fù)發(fā)組39例，未復(fù)發(fā)組51例。另選取年齡、性別匹配的病理科直腸癌標(biāo)本及正常直腸組織標(biāo)本各10例作為對(duì)照。本次研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員批準(zhǔn)，標(biāo)本獲取者家屬知情同意。標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定、脫水，常規(guī)石蠟包埋、切片，烤箱烘干備用。

1.2 儀器試劑 低溫冰箱(BCD-272，博西華家電器)，電熱恒溫培養(yǎng)箱(DH-250，中興偉業(yè)儀器)，微量移液器(10～1 000 μl，Gilson)，微波爐(EM-F2108MS1，Sanyo)，生物顯微鏡(ECLIPSE80i，Nikon)。兔抗人Cox-2單克隆抗體、羊抗人p53單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒、內(nèi)源性生物素阻斷試劑盒(Boehringer Mannheim)，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒、磷酸鹽緩沖液(PBS)、檸檬酸鹽抗原修復(fù)緩沖液(康為世紀(jì))。

1.3 免疫組織化學(xué)方法測(cè)定Cox-2、p53在各組織中的表達(dá) 所有蠟塊4 μm連續(xù)切片，60℃烤箱恒溫干燥，二甲苯脫蠟10 min，梯度酒精脫水5 min，沖洗后PBS浸泡5 min。微波爐加熱檸檬酸鹽組織抗原修復(fù)液進(jìn)行修復(fù)，pH6.0，750 W 5 min，150 W 15 min，PBS沖洗甩干。50 μl內(nèi)源性生物素阻斷劑室溫孵育10 min，PBS沖洗3 min。滴加一抗(兔抗人Cox-2單克隆抗體或羊抗人p53單克隆抗體)，4℃冰箱孵育過(guò)夜，PBS沖洗；滴加二抗，室溫孵育40 min，PBS沖洗。最后DAB顯色，Nikon顯微鏡下觀察顯色反應(yīng)。

1.4 鏡下觀察結(jié)果判定 Cox-2定位于上皮細(xì)胞的胞質(zhì)、包膜及間質(zhì)組織，棕黃色為陽(yáng)性表達(dá)。參照相關(guān)文獻(xiàn)〔6〕，統(tǒng)計(jì)Cox-2在每個(gè)標(biāo)本組織中的表達(dá)情況，包括上皮細(xì)胞、淺部間質(zhì)(腺體周邊間質(zhì))及深部間質(zhì)(組織內(nèi)部間質(zhì))中的表達(dá)。上皮細(xì)胞表達(dá)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)表達(dá)為0分；0%～25%為1分；26%～50%為2分；≥51%為3分。0～1分為低表達(dá)，≥2分為高表達(dá)。p53定位于上皮細(xì)胞核中，棕黃色為陽(yáng)性表達(dá)。無(wú)表達(dá)為0分；局部上皮表達(dá)為1分；2個(gè)高倍鏡異型增生上皮細(xì)胞表達(dá)；多于2個(gè)高倍鏡異型增生上皮細(xì)胞表達(dá)為3分。0～1分為低表達(dá)，≥2分為高表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、Spearman等級(jí)相關(guān)分析及Logistic多元回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1 Cox-2、p53在不同標(biāo)本組織中的表達(dá) Cox-2在腺瘤組織中高表達(dá)率顯著高于正常組織(P<0.05)，與癌組織不存在差異(P>0.05)。p53在腺瘤組織中高表達(dá)率顯著低于癌組織(P<0.05)，與正常組織不存在差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 Cox-2、p53在不同標(biāo)本組織中的表達(dá)(n)

與正常組織比較：1)P<0.05；與癌組織比較：2)P<0.05

2.2 Cox-2表達(dá)與直腸腺瘤臨床特征的關(guān)系 Cox-2表達(dá)水平在瘤體直徑大小、是否復(fù)發(fā)分組中存在差異(P<0.01)，在性別、年齡、瘤體數(shù)目、瘤體部位不存在差異(P>0.05)。見(jiàn)表2。

2.3 p53表達(dá)與直腸腺瘤臨床特征的關(guān)系 p53表達(dá)水平在是否復(fù)發(fā)分組中存在差異(P<0.05)，在性別、年齡、瘤體數(shù)目、瘤體部位、瘤體直徑不存在差異(P>0.05)。見(jiàn)表2。

2.4 Cox-2與p53表達(dá)相關(guān)性 Cox-2與p53在直腸絨毛狀腺瘤中的表達(dá)呈高度正相關(guān)(r=0.241,P=0.022)。

2.5 Logistic多元回歸分析 Cox-2、p53的高表達(dá)均為直腸絨毛膜腺瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。見(jiàn)表3。

表2 Cox-2、p53高表達(dá)與直腸腺瘤臨床特征的關(guān)系(n,n=90)

表3 Logistic多元回歸分析

3 討 論

結(jié)直腸癌主要起源于腺瘤，早期發(fā)現(xiàn)腺瘤并進(jìn)行手術(shù)治療是預(yù)防癌變的有效手段〔8〕。直腸絨毛狀腺瘤被認(rèn)為是直腸癌的癌前病變〔9〕。瘤體表面呈絲絨或海綿狀，質(zhì)軟易碎，高于正常黏膜表面，呈廣基型生長(zhǎng)，可單發(fā)可多發(fā)〔10〕，其治療主要以手術(shù)治療為主。細(xì)胞因子、癌基因提示可能在腺瘤的生長(zhǎng)及復(fù)發(fā)中起一定作用〔11〕。Cox-2被公認(rèn)為促進(jìn)結(jié)直腸腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，在幾乎所有的腫瘤中也可發(fā)現(xiàn)p53表達(dá)水平的增高，Cox-2、p53一般不表達(dá)于正常組織中〔12〕，相關(guān)文獻(xiàn)也提及腫瘤大小及上皮內(nèi)瘤變等均可上調(diào)Cox-2、p53的表達(dá)水平，且與腺瘤的復(fù)發(fā)也高度相關(guān)〔13〕。Cox-2不僅表達(dá)于上皮細(xì)胞，也可表達(dá)于巨噬細(xì)胞及成纖維細(xì)胞中，該類(lèi)細(xì)胞的積聚可導(dǎo)致正常組織基質(zhì)的炎性反應(yīng)，從而導(dǎo)致直腸早期腫瘤的發(fā)生，p53的陽(yáng)性表達(dá)也預(yù)示著腫瘤細(xì)胞的高增殖性，兩者相互作用促進(jìn)了腫瘤的產(chǎn)生，本次研究也證實(shí)了Cox-2與p53的表達(dá)水平具有高度正相關(guān)性〔14，15〕。

直腸絨毛狀腺瘤的復(fù)發(fā)率極高，本次研究中隨訪的所有患者復(fù)發(fā)率與國(guó)外相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的20%～50%相一致。Cox-2及p53的高表達(dá)與結(jié)直腸腺瘤的復(fù)發(fā)具有高度相關(guān)性，Cox-2通過(guò)調(diào)節(jié)血管生長(zhǎng)、細(xì)胞凋亡及腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移促進(jìn)了細(xì)胞癌變的過(guò)程，其在正常環(huán)境下表達(dá)可被嚴(yán)格控制，但由于炎性反應(yīng)等高危因素刺激卻可使其表達(dá)迅速升高〔16〕。p53基因的突變使其具有了癌基因活性，使細(xì)胞惡性增殖具有抗凋亡的能力，編碼的相關(guān)蛋白也喪失了移植細(xì)胞增殖的作用，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的無(wú)限制生長(zhǎng)，對(duì)腫瘤的產(chǎn)生、發(fā)展起到促進(jìn)作用〔17〕，即使手術(shù)治療后，該兩類(lèi)蛋白的表達(dá)仍處于失調(diào)水平，也不可避免地導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)。

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〔2015-01-19修回〕

(編輯 杜 娟)

福建省衛(wèi)生計(jì)生委面向農(nóng)村和城市社區(qū)推廣適宜技術(shù)項(xiàng)目(No.2015018)

鄭建濤(1967-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事胃腸癌研究。

R735.3+7

A

1005-9202(2016)22-5608-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.22.051