胡傳利,閆穎穎

(江蘇省連云港市東?？h畜牧獸醫(yī)站，江蘇 連云港 222300)

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近三年東?？hH5高致病性禽流感免疫抗體監(jiān)測及分析

胡傳利,閆穎穎

(江蘇省連云港市東?？h畜牧獸醫(yī)站，江蘇 連云港 222300)

為了全面了解和掌握東?？h近幾年禽流感的免疫效果，科學(xué)評(píng)價(jià)基層免疫工作質(zhì)量，作為實(shí)驗(yàn)室檢測人員的筆者匯總了從2013～2015年3年的試驗(yàn)結(jié)果，共采集血樣5888份，合格數(shù)量是5147，合格率是87.41%，合格率高于農(nóng)業(yè)部要求的70%的標(biāo)準(zhǔn)。

高致病性禽流感；抗體水平；監(jiān)測與分析

禽流感是由A型流感病毒引起多種家禽及野鳥發(fā)病的高度接觸性傳染病，又名歐洲雞瘟。高致病性禽流感是世界養(yǎng)禽業(yè)最重要的疫病之一[1]，給養(yǎng)禽業(yè)帶來了巨大的損失。在我國采取以疫苗免疫為主的綜合性防治措施來防控該病。每年東海縣不定期對(duì)已免疫家禽H5高致病性禽流感免疫抗體進(jìn)行檢測，掌握抗體水平，同時(shí)適時(shí)指導(dǎo)防疫，這樣對(duì)防控高致病性禽流感的發(fā)生和流行具有十分重要的作用。現(xiàn)將東?？h從2013～2015年高致病性禽流感免疫抗體檢測結(jié)果分析討論如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)動(dòng)物來自江蘇省連云港市東?？h21個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的部分規(guī)模雞場和散養(yǎng)戶。

血清樣品：采集全縣21個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的部分規(guī)模雞場和散養(yǎng)戶雞的全血，血液凝固后以3000r/min離心5min，吸出血清，4℃保存。如果近期不進(jìn)行檢測的話最好冷凍保存。

主要儀器：V型96孔微量反應(yīng)板，離心機(jī)，微量振蕩器，微量移液器及相配的槍頭，洗板機(jī)，滅菌離心管。

禽流感標(biāo)準(zhǔn)抗原和陽性血清：禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原和陽性血清購自青島易邦生物工程有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 單位抗原校正

①首先用微量移液槍向反應(yīng)板的第2～6孔加生理鹽水25μL。第1孔不加。②用微量移液槍吸取4U抗原25μL分別加入第1孔、第2孔，從第2孔開始擠壓6次混合，后吸出25μL至第3孔，依次倍比稀釋到第5孔，棄去25μL。③用移液槍再吸取1%紅細(xì)胞懸液依次加入到1～6孔，每孔25μL。④于微量振蕩器振蕩1min。室溫靜置30min后觀察結(jié)果。⑤結(jié)果觀察：第1、2、3孔為完全凝聚，第4孔紅細(xì)胞為50%沉淀，第5孔為對(duì)照完全沉淀，如果出現(xiàn)以上結(jié)果，表明所配4U抗原準(zhǔn)確，校正成立。一定要進(jìn)行4U抗原的校正，否則影響后面的試驗(yàn)結(jié)果。

1.2.2 抗體檢測方法

按照國標(biāo)GB/T18936-2003《高致病性禽流感診斷技術(shù)》和禽流感微量紅細(xì)胞凝聚抑制試驗(yàn)(SN/T1182.2-2004)[2]規(guī)定，采用血凝抑制試驗(yàn)，集中對(duì)血清樣品機(jī)械實(shí)驗(yàn)室檢測，并作系統(tǒng)分析。

1.2.2.1 血凝試驗(yàn)操作方法

①在V型微量反應(yīng)板中，每孔加入25μL的PBS；②第1孔加入25μL抗原，依次作25μL的對(duì)比稀釋至11孔；③每孔加入25μL PBS；④每孔加入25μL 1%的紅細(xì)胞；⑤將反應(yīng)板在振蕩器上震蕩1～2min，室溫靜置40min；⑥結(jié)果判定：將反應(yīng)板傾斜，觀察紅細(xì)胞有無呈淚滴狀流淌，完全無淚滴樣流淌的最高稀釋倍數(shù)為血凝效價(jià)。

1.2.2.2 血凝抑制試驗(yàn)操作方法

①根據(jù)血凝試驗(yàn)測定的效價(jià)，計(jì)算配置4U抗原。血凝效價(jià)除以4即為含4U抗原的稀釋倍數(shù)。②反應(yīng)板中第1～11孔加入25μL的PBS，第12孔加入20μL的PBS；③第1孔加入25μL的血清；④在反應(yīng)板上將血清作25μL的稀釋，至第10孔；⑤第1～11孔均加入25μL的4U抗原，室溫下靜置30min。⑥每孔加入25μL1%的紅細(xì)胞，輕晃均勻后，室溫靜置30min，當(dāng)對(duì)照孔紅細(xì)胞呈顯著紐扣狀時(shí)判定結(jié)果。

1.2.2.3 結(jié)果判定

以完全抑制4U抗原的最高血清稀釋倍數(shù)為該血清的血凝抑制效價(jià)。當(dāng)陽性對(duì)照血清的試驗(yàn)結(jié)果符合血凝抑制試驗(yàn)的要求，陰性血清效價(jià)不高于1∶4時(shí)候，試驗(yàn)才成立。被檢樣品血凝抑制效價(jià)小于等于1∶4的為陰性，大于等于1∶16的為陽性。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 不同年份免疫抗體合格率情況

表1 不同年份免疫抗體合格率情況

由表1可見2013～2015年共檢測5888份血清，2013年的合格率為82.06%，2014年的合格率為87.15%，2015年的合格率為96.21%，近三年整體的合格率為87.41%。

2.2 免疫次數(shù)與免疫效果的相關(guān)分析

表2 免疫次數(shù)與免疫效果的相關(guān)分析

由表2可見，免疫次數(shù)越多，合格率越高。

2.3 不同飼養(yǎng)方式免疫抗體合格率情況

表3 不同飼養(yǎng)方式免疫抗體合格率情況

由表3可見，規(guī)模場的合格率遠(yuǎn)高于散養(yǎng)戶的合格率。

3 分析與討論

從以上數(shù)據(jù)可以看出，近三年東海縣的高致病性禽流感的抗體水平為87.41%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%的要求。我們通過這幾年的試驗(yàn)也驗(yàn)證了一點(diǎn)，免疫1次的合格率僅為31.52%，而免疫2次以上的合格率高達(dá)88.74%，隨著免疫次數(shù)的增加，抗體合格率明顯升高，免疫效果與免疫次數(shù)成正比的關(guān)系。

規(guī)模場比散養(yǎng)戶的抗體合格率高，據(jù)分析其原因是，規(guī)模場的技術(shù)力量強(qiáng)，技術(shù)人員操作熟練，保證了禽流感的抗體合格率。另外，規(guī)模場防疫意識(shí)比較強(qiáng)，管理實(shí)行規(guī)范化、科學(xué)化、常態(tài)化；而散養(yǎng)戶，養(yǎng)殖量小，硬件設(shè)施跟不上，防疫意識(shí)差，免疫工作不到位，所以抗體水平低。

禽流感抗體監(jiān)測工作是評(píng)價(jià)和指導(dǎo)防控工作的重要措施。在家禽養(yǎng)殖中，長期對(duì)AI的血清學(xué)監(jiān)測是十分必要，通過血清學(xué)監(jiān)測，可以準(zhǔn)確掌握疫情動(dòng)態(tài)，科學(xué)地進(jìn)行綜合免疫預(yù)防禽流感，尤其是高致病性禽流感。禽流感防控是一項(xiàng)長期持久的工作，但只要認(rèn)真做好疫情的監(jiān)測，及時(shí)采取有關(guān)措施，緊急免疫預(yù)防，禽流感疫情是完全可以得到有效控制和消滅的。

從最近三年的數(shù)據(jù)可以看出，禽流感抗體的合格率是逐年提高的，說明東?？h在禽流感防控這方面做的很到位，尤其是在2016年更加大了力度，要求各鄉(xiāng)鎮(zhèn)(街道、場、區(qū))及相關(guān)養(yǎng)殖企業(yè)要高度重視監(jiān)測結(jié)果，針對(duì)存在問題，要追本溯源，明確責(zé)任，免疫抗體未達(dá)標(biāo)的鄉(xiāng)鎮(zhèn)(街道)要深刻反思、認(rèn)真查找原因，及時(shí)組織整改。一要開展補(bǔ)免。要針對(duì)規(guī)模場、小規(guī)模養(yǎng)殖及散養(yǎng)畜禽的不同特點(diǎn)，實(shí)行分類指導(dǎo)，強(qiáng)化程序免疫與集中免疫相結(jié)合，不留死角，確保抗體合格率達(dá)標(biāo)。二要加強(qiáng)對(duì)自免規(guī)模養(yǎng)殖場的監(jiān)管。大力推廣使用政府采購的免費(fèi)疫苗。要加強(qiáng)對(duì)防疫員、規(guī)模場技術(shù)人員防疫知識(shí)的普及，適時(shí)開展免疫技術(shù)培訓(xùn)，規(guī)范免疫操作。三要加強(qiáng)疫苗存儲(chǔ)、運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)的冷鏈管理，及時(shí)保養(yǎng)維修，確保疫苗質(zhì)量。四要適時(shí)開展免疫監(jiān)測采樣，根據(jù)監(jiān)測結(jié)果進(jìn)行疫情分析，及時(shí)補(bǔ)免，確保全縣畜禽重大動(dòng)物疫病免疫抗體處于有效保護(hù)狀態(tài)。

[1] 劉素梅,楊士清,張連英,等.禽流感區(qū)域控制重點(diǎn)環(huán)節(jié)-抗體監(jiān)測應(yīng)用技術(shù)的探討[J].當(dāng)代畜牧，2006(03)：9.

[2] 國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).SN/T1182.2-2004禽流感微量紅細(xì)胞凝聚抑制試驗(yàn)[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2004.

2016-07-21 修改日期：2016-07-22

胡傳利(1979-)，女，江蘇東海人，碩士研究生，獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物門診診療及實(shí)驗(yàn)室檢測工作。

10.19369/j.cnki.2095-9737.2016.11.002

S851.3

A

2095-9737(2016)11-0002-02