(西安市第四醫(yī)院消化科，陜西 西安 710004)

·臨床醫(yī)學(xué)·

HER2和β-catenin在食管癌中表達(dá)的臨床病理意義

王君化*

(西安市第四醫(yī)院消化科，陜西 西安 710004)

目的觀察HER2和β-catenin在食管癌中的表達(dá)，并探討其臨床意義。方法以2013年10月～2014年10月在本院接受治療的食管癌患者為觀察對象，且同一病例的食管癌切除標(biāo)本包括癌組織和5 cm以外的癌旁組織。觀察HER2和β-catenin在癌組織和癌旁組織中的陽性表達(dá)率，比較不同臨床病理特征的食管癌患者的HER2和β-catenin表達(dá)情況，分析HER2和β-catenin表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果HER2在癌組織中的陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織，而β-catenin在癌組織中的陽性表達(dá)率低于癌旁正常組織(P<0.05)；中低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度為T3+T4、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期以及死亡的食管癌患者其癌組織中的HER2陽性表達(dá)率較高，而不同年齡、性別的患者HER2陽性表達(dá)率無明顯差別；中低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度為T3+T4、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期以及死亡的食管癌其癌組織中的β-catenin陽性表達(dá)率較低，而不同年齡、性別的患者β-catenin陽性表達(dá)率無明顯差別；HER2陽性表達(dá)率與患者生存率呈明顯負(fù)相關(guān)，而β-catenin陽性表達(dá)率與患者生存率呈明顯正相關(guān)(r=0.346、0.452，P<0.05)。結(jié)論HER2在食管癌患者中高表達(dá)，β-catenin在食管癌患者中低表達(dá)，且與患者預(yù)后密切相關(guān)。

食管癌； HER2； β-catenin； 生存率

食管癌是常見的消化道腫瘤，全世界每年約有30萬人死于食管癌。其發(fā)病率和死亡率各國差異很大，我國是世界上食管癌高發(fā)地區(qū)之一，每年平均病死約15萬人[1]。近年來食管癌的發(fā)生率呈現(xiàn)出了逐年上升的趨勢，相關(guān)臨床研究證實(shí)，35%左右的食管癌早期診斷時已失去手術(shù)機(jī)會[2]。

免疫靶向治療是近年來腫瘤綜合性治療的重要方式，對于無法手術(shù)的患者可以通過聯(lián)合放化療以及生物靶向治療來提高患者的中位生存時間。腫瘤的基礎(chǔ)理論研究發(fā)現(xiàn)，β-鏈蛋白(β-catenin)最早作為一種粘附因子被發(fā)現(xiàn)，廣泛存在于各種類型的細(xì)胞，在參與這些細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等方面發(fā)揮了重要的調(diào)節(jié)作用[3]。人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)基因具有酪氨酸激酶活性，可以通過對于下游癌基因轉(zhuǎn)錄翻譯產(chǎn)物的絡(luò)氨酸酶的修飾作用，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞周期。HER2以及β-catenin廣泛參與到了乳腺癌、甲狀腺癌以及卵巢癌等惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[4-5]，但在食管癌中的研究較少。本次研究重在探討HER2和β-catenin在食管癌中的表達(dá)，并探討其臨床意義，從而為食管癌的免疫治療提供新的靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1研究對象選取2013年10月～2014年10月在本院接受治療的食管癌患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡≥18周歲；(2)術(shù)后病理確診為食管癌；(3)無其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者；(2)預(yù)期存活時間≤6個月；(3)自愿參與本項研究者。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)共納入研究對象85例，男42例，女43例、年齡45～72歲，平均58.75±15.64歲；其中高分化者52例，中、低分化者33例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者35例，未轉(zhuǎn)移者50例；浸潤深度：T1+T2者：50例，T3+T4者35例；TNM分期[6]：Ⅰ+Ⅱ期者45例，Ⅲ+Ⅳ期者40例。

1.2方法組織采用石蠟包埋，切片機(jī)切取組織，厚度5 mm，用多聚賴氨酸處理。在脫蠟之前，將切片置于60 ℃恒溫箱中烘烤60 min。將切片用二甲苯浸泡10 min，更換二甲苯后再浸泡10 min。水化后進(jìn)行抗原修復(fù)，3%H2O2一甲醇溶液處理切片15 min，加入一抗 HER2和β-catenin鼠單抗100 μL，37 ℃，濕盒孵育1 h。加入增強(qiáng)劑50 L，室溫濕盒孵育20 min。加入HRP標(biāo)記二抗50 μL，室溫37 ℃，孵育30 min。每張片子加2滴新鮮配制的DAB溶液，顯微鏡下觀察。HOF03光學(xué)顯微鏡購自上海波斯特精密儀器有限公司，一抗HER2(批號:2016L01387克隆號：14Y2)和β-catenin鼠單抗(批號:2014L01304 克隆號：14C6)購自南京凱基生物科技有限公司，HRP標(biāo)記二抗兔抗鼠購自羅氏檢測公司。

1.3評價指標(biāo)觀察HER2和β-catenin在癌組織和癌旁組織中的陽性表達(dá)率[7-8]，比較不同臨床病理特征的食管癌患者的HER2和β-catenin表達(dá)情況，分析HER2和β-catenin表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系。HER2和β-catenin陽性表達(dá)圖見圖1。

圖1 HER2和β-catenin陽性表達(dá)圖 A:HER2陽性表達(dá)圖;B:HER2陰性表達(dá)圖；C:β-catenin陽性表達(dá)圖;D:β-catenin陰性表達(dá)圖

1.4統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)經(jīng)雙人錄入后，采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料采用例或百分率表示，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。HER2和β-catenin在癌組織和癌旁組織中的陽性表達(dá)率及不同臨床病理特征的食管癌患者的HER2和β-catenin表達(dá)情況采用卡方檢驗進(jìn)行分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HER2和β-catenin在癌組織和癌旁組織中的陽性表達(dá)率比較HER2在癌組織中的陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織，而β-catenin在癌組織中的陽性表達(dá)率低于癌旁正常組織(P<0.05)。見表1。

表1HER2和β-catenin在癌組織和癌旁組織中陽性表達(dá)率的比較(例,%)

組別HER2陽性陰性β?catenin陽性陰性癌組織65(7647)20(2353)23(2705)62(7295)癌旁正常組織17(2000)68(8000)48(5647)37(4353)χ2值54．27915．116P值<0．001<0．001

2.2不同臨床病理特征的食管癌患者的癌組織HER2陽性表達(dá)率的比較由表2可知，中低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度為T3+T4、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期以及死亡的食管癌患者其癌組織中的HER2陽性表達(dá)率較高，而不同年齡、性別的患者HER2陽性表達(dá)率無明顯差別。見表2。

表2不同臨床病理特征的食管癌患者的HER2陽性表達(dá)率的比較(例,%)

項目例數(shù)陽性陰性χ2值P值年齡(歲)0．7740．379 ≥654835(72．9)13(27．1) <653730(81．1)7(18．9)性別0．2040．652 男4233(78．57)9(21．43) 女4332(74．42)11(25．58)分化程度6．2500．012 高分化5235(67．31)17(32．69) 中、低分化3330(90．91)3(9．09)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移10．4950．001 有3533(94．29)2(5．71) 無5032(64．00)18(36．00)浸潤深度7．3990．007 T1+T25033(66．00)17(37．78) T3+T43532(92．50)3(7．50)TNM分期10．7890．001 Ⅰ+Ⅱ期4528(62．22)17(37．78) Ⅲ+Ⅳ期4037(92．50)3(7．50)預(yù)后8．0470．005 死亡2020(100．00)0(0．00) 存活6545(69．23)20(30．77)

2.3不同臨床病理特征的食管癌患者的β-catenin陽性表達(dá)率的比較中低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度為T3+T4、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期以及死亡的食管癌其癌組織中的β-catenin陽性表達(dá)率較低，而不同年齡、性別的患者β-catenin陽性表達(dá)率無明顯差別。見表3。

表3不同臨床病理特征的食管癌患者的β-catenin陽性表達(dá)率的比較(例，%)

項目例數(shù)陽性陰性χ2值P值年齡(歲)0．2480．618 ≥654814(29．17)34(70．83) <65379(24．32)28(75．68)性別0．0960．756 男4212(28．57)30(71．43) 女4311(25．58)32(74．42)分化程度8．8240．003 高分化5220(38．46)32(61．54) 中、低分化333(9．10)30(90．90)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移4．9180．027 有355(14．29)30(85．71) 無5018(36．00)32(64．00)浸潤深度7．3650．007 T1+T25019(38．00)31(62．00) T3+T4354(11．43)31(88．57)TNM分期8．1140．004 Ⅰ+Ⅱ期4518(40．00)27(60．00) Ⅲ+Ⅳ期405(12．50)35(87．50)預(yù)后6．4480．011 死亡201(5．00)19(95．00) 存活6522(33．85)43(66．15)

2.4 HER2和β-catenin的陽性表達(dá)率與患者生存率的關(guān)系HER2陽性表達(dá)率與患者生存率明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.346，P<0.05)，而β-catenin陽性表達(dá)率與患者生存率呈明顯正相關(guān)(r=0.452，P<0.05)。

3 討 論

食管癌早期臨床癥狀多不明顯，可表現(xiàn)為非特異性的食物梗噎感、胸骨后燒灼樣疼痛不適，食管癌典型的癥狀為進(jìn)行性咽下困難，先是難咽干的食物，繼而是半流質(zhì)食物，最后水和唾液也不能咽下。食管癌進(jìn)展期對于臨近部位的器官或者組織的壓迫作用可以產(chǎn)生Horner綜合征、聲音嘶啞，部分患者可有明顯的惡病質(zhì)表現(xiàn)。通過食管鏡或者胃鏡對于食管以及食管胃賁門交界處黏膜上皮的觀察，可以對于可疑的早期病變進(jìn)行內(nèi)鏡下取材活檢。但相關(guān)研究證實(shí)，我國農(nóng)村地區(qū)食管癌的早期臨床診斷水平較低，約1/3左右的患者臨床確診時已失去手術(shù)機(jī)會[6-7]。而單純放化療治療的臨床效果有效，Kanaya N等[8-9]學(xué)者分析了食管下端鱗狀細(xì)胞癌患者的放化療資料，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合放化療的總體病情緩解率不足55%，患者術(shù)后五年生存率并無明顯改善。腫瘤的生物免疫學(xué)治療是近年來發(fā)展較快的學(xué)科，對于食管癌早期病變過程中相關(guān)癌基因以及癌蛋白修飾產(chǎn)物的研究，有利于進(jìn)一步揭示食管癌臨床進(jìn)展的相關(guān)因素，并為食管癌的靶向治療提供理論基礎(chǔ)。

HER2主要通過有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPK)及磷脂酞肌醇—3—激酶(P13K)兩條途徑將信號傳遞至入核，這種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的級聯(lián)反應(yīng)最終引起核內(nèi)早期反應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄水平的增加,使細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化[10]。β-catenin參與到了細(xì)胞粘附、細(xì)胞極性的維持以及正常上皮組織的分化等病理過程，同時可以通過對于wnt通路激活進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白BCL-2以及BAX的表達(dá)，參與到惡性腫瘤[11]的早期過程[12-13]。本次研究的創(chuàng)新性在于首次探討了HER2和β-catenin與食管癌患者臨床病理特征如細(xì)胞分化程度或者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間的關(guān)系。

本次研究分析了HER2和β-catenin在癌組織和癌旁組織中的陽性表達(dá)率比較，發(fā)現(xiàn)HER2在食管癌組織中的表達(dá)明顯高于食管癌旁組織，而β-catenin在食管癌旁組織中的表達(dá)更高，提示HER2可能促進(jìn)了食管癌病灶的早期發(fā)生發(fā)展，而β-catenin對于抑制腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲或者分化等病理過程中可能具有重要的保護(hù)作用。喬建兵等[14-15]學(xué)者發(fā)現(xiàn)，食管癌組織中浸潤深度為T1+T2的患者，其免疫組化分析結(jié)果可見HER2的陽性表達(dá)率可達(dá)33%，明顯高于癌旁組織4.8%的陽性率，同時低分化的鱗狀細(xì)胞癌患者，其HER2陽性表達(dá)水平可上升3～4倍。本次研究的結(jié)果與喬建兵等較為一致，中低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度為T3+T4、TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期的食管癌患者其癌組織中的HER2陽性表達(dá)率較高，臨床上對于食管癌根治性手術(shù)的患者，術(shù)后聯(lián)合檢測HER2蛋白的表達(dá)，對于評估患者的臨床轉(zhuǎn)歸、術(shù)后聯(lián)合放化療方案的制定等可能具有重要的參考價值。β-catenin不僅是一種細(xì)胞間的黏附分子，可以與E鈣黏蛋白形成復(fù)合體，再與肌動蛋白的細(xì)胞骨架相連，進(jìn)一步加強(qiáng)細(xì)胞之間的緊密連接，保持細(xì)胞的穩(wěn)定性，同時對于抑制細(xì)胞異常擴(kuò)增和減輕細(xì)胞侵襲能力等方面具有重要的生物學(xué)意義。本次研究發(fā)現(xiàn)，β-catenin與食管癌患者的臨床病理特征間的關(guān)系較為明顯，細(xì)胞分化水平較差、浸潤深度較高以及臨床分期較晚的患者，β-catenin蛋白水平的表達(dá)反而較低，提示β-catenin對于抑制食管癌病灶的臨床進(jìn)展具有重要的保護(hù)意義。β-catenin作為一個新的癌基因與食管癌的發(fā)生有關(guān)，對其作用機(jī)制的進(jìn)一步深入研究有可能使其成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)。最后，本次研究發(fā)現(xiàn)HER2陽性表達(dá)率與患者生存率明顯負(fù)相關(guān)，而β-catenin陽性表達(dá)率與患者生存率明顯正相關(guān)，HER2和β-catenin與食管癌患者的臨床預(yù)后或者臨床治療結(jié)局具有密切的關(guān)系，HER2陽性率越高患者的預(yù)后越差，病死率越高，而β-catenin陽性率越高患者的預(yù)后越好，患者食管癌手術(shù)或者放化療治療后的生存率更高，通過術(shù)后檢測HER2和β-catenin的表達(dá)，可以為評估患者的遠(yuǎn)期生存時間提供參考。

HER2在食管癌患者中高表達(dá)，β-catenin在食管癌患者中低表達(dá)，EGFR過表達(dá)、β-catenin表達(dá)的下降可能在食管鱗癌的發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移中起重要作用，提示聯(lián)合監(jiān)測二者的表達(dá)可為食管癌進(jìn)展程度和預(yù)后判斷提供幫助,亦為食管癌的基因治療提供一個新的思路。

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ExpressionandSignificanceofHER2and-catenininEsophagealCarcinoma

WANG Junhua
(Xi’anFourthHospital,Xi’an,Shanxi710004,China)

ObjectiveTo observe the expression of HER2 and-catenin in esophageal carcinoma,and to explore its clinical significance.MethodsEsophageal cancer patients treated in our hospital from October 2013 to October 2014 were selected as the observation object,and esophageal cancer resection specimens of the same case included cancer tissue and adjacent to the 5 cm.Observe positive expression rate of HER2 and beta catenin in cancer tissue and paracancerous tissue,compare the different clinical and pathological features of esophageal cancer patients with HER2 and beta catenin and analyze the relation between expression of HER2 and beta catenin and the prognosis of patients.ResultsThe positive expression of HER2 in cancer tissues was higher than that in normal tissues,but the expression of beta-catenin in cancer tissues was lower than that of normal tissues,the difference was statistically different(P<0.05);Low differentiation,lymph node metastasis,infiltration depth for T3 + T4,TNM stage III and IV and the death of esophageal cancer patients in their cancer tissues of women with HER2 positive rate is higher,and in different gender and age in patients with HER2 positive expression rate had no significant difference;low differentiation,lymph node shift,depth of invasion for T3 + T4,TNM stage III and IV and the death of esophageal cancer tumor tissue of beta catenin positive expression rate is low,and positive expression of beta catenin in patients with different age and gender rate has no obvious difference.The positive expression rate of HER2 was negatively correlated with the survival rate of patients,but the positive expression rate of-catenin was positively correlated with the survival rate of the patients (r=0.346,0.452,P<0.05).ConclusionsHER2 is highly expressed in esophageal cancer patients,and the expression of-catenin in esophageal cancer patients is low,which is closely related to the prognosis of patients with esophageal cancer.

Esophageal carcinoma; HER2; -catenin; survival rate

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2016.05.012

2016-03-17；

2016-06-28

*通訊作者，E-mail:121281256@qq.com.

R735.1

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蔣湘蓮)