朱術(shù)會 宿志民 孫新堂 王加才 （山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 山東 濰坊 261061）

試驗研究

乙酰甲喹納米乳的制備及性狀考察

朱術(shù)會 宿志民 孫新堂 王加才 （山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 山東 濰坊 261061）

為方便乙酰甲喹的臨床使用，提高乙酰甲喹的生物利用度，本實驗使用油相、表面活性劑、助表面活性劑和水制備了乙酰甲喹納米乳。結(jié)果顯示，乙酰甲喹納米乳為黃色澄明液體，粒徑區(qū)間在30～50nm，在稀釋試驗和高速離心試驗及長期放置條件下，未見乳液分層、破乳和藥物析出現(xiàn)象，穩(wěn)定性較好。

乙酰甲喹 表面活性劑 納米乳 生物利用度

乙酰甲喹(Mequindox)又名痢菌凈[1]，為廣譜抗菌藥，對革蘭氏陰性菌作用強于陽性菌，對密螺旋體作用較強，對仔豬黃痢、白痢、犢牛腹瀉，副傷寒、禽巴氏桿菌、雛雞白痢、雞大腸桿菌均有效，主用于密螺旋體所致豬痢疾及細菌性腸炎[2]。在臨床使用過程中發(fā)現(xiàn)禽類對該藥物較為敏感，尤其是雛雞如果不按要求使用，隨意加大劑量或長期使用則會引起急性和蓄積中毒[3]。水溶性差是影響乙酰甲喹制劑發(fā)展和臨床應(yīng)用的一個關(guān)鍵因素[4,5]。目前，臨床中常用的乙酰甲喹型主要有注射劑、粉劑和溶液劑等。由于水溶性低，使其粉劑和溶液劑在動物口服給藥中的應(yīng) 用和療效受到了很大限制，而其注射劑在使用時需多次重復(fù)給藥，對動物應(yīng)激大，且注射給藥也增加了集約化養(yǎng)殖場的勞動量，增加了飼養(yǎng)管理成本等。因此，研制新劑型對其臨床用藥具有重要的生產(chǎn)意義。

納米乳液(nanoemulsion)又稱微乳液(microemulsion)，是由水相、油相、表面活性劑和助表面活性劑組成的透明或半透明的均相分散體系，粒徑一般為1～100nm，具有熱力學(xué)穩(wěn)定性，可分為水包油(O/W)、油包水(W/O)以及雙連續(xù)(B.C)三種納米乳類型[6]。目前，納米乳化技術(shù)已滲透到醫(yī)藥、石油化工、食品及生物技術(shù)等領(lǐng)域。納米乳作為一種藥物載體具有緩釋和靶向作用，提高藥物載樣量，減少藥物體內(nèi)的酶解，同時降低藥液的黏度低，減少注射時的疼痛，還可以提高藥物的生物利用度[7]。納米乳制備大致可分為機械法和物理化學(xué)法兩大類。由于納米乳劑是非平衡體系，因此其形成過程中就需要外加能量，能量一般來自化學(xué)制劑的結(jié)構(gòu)潛能或者是來自機械設(shè)備的能力[8,9]。其中利用機械設(shè)備的能量，例如采用高壓均質(zhì)機、高速攪拌器和超聲波發(fā)生器等這類方法被稱作為高能乳化法；而利用結(jié)構(gòu)中的化學(xué)潛能的方法則通常被認為是低能乳化法或濃縮法，通常這種方法需要添加表面活性劑或助表面活性劑[10,11]。

本研究從提高乙酰甲喹的生物利用度，減少其毒副作用，方便臨床使用為目的，采用低能乳化法，使用油相、表面活性劑、助表面活性劑和水制備乙酰甲喹納米乳，并對其性狀進行考察。

1 材料與方法

1.1 材料 乙酰甲喹原料藥(濰坊亞康藥業(yè)有限公司)、電子天平(上海永琪儀器設(shè)備有限公司)、MYP11-2數(shù)顯恒溫磁力攪拌器(上海梅穎儀器有限公司)、透射電鏡粒徑分析儀(中國藥科大學(xué)分析測試中心)、萬用電烤爐(上海永琪儀器設(shè)備有限公司)、酸度計(PHS-3C，上海越磁電子科技有限公司)、紫外可見分光光度計(Gold$53，上海華巖儀器設(shè)備有限公司)。

1.2 主要試劑 肉豆寇酸異丙酯(化學(xué)純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司)、吐溫-80(tween-80，AR，天津大茂化學(xué)試劑廠)、聚氧乙烯(40)氫化蓖麻油(RH240，AR，國藥集團化學(xué)試劑有限公司)、無水乙醇(AR，國藥集團化學(xué)試劑有限公司)、PVP—K30(博愛新開源制藥股份有限公司)、PBS(PH=7．0)、痢菌凈(注射級，山東天宇生物科技有限公司)、甲醇、二甲基甲酰胺(AR，天津大茂化學(xué)試劑有限公司)、鹽酸(AR，深圳市騰龍源實業(yè)有限公司)。

2 制備方法及工藝優(yōu)化

2.1 乙酰甲喹納米乳制備 分別以吐溫-80、RH240為表面活性劑，無水乙醇、丙二醇為助表面活性劑，乙酸乙酯，肉豆寇酸異丙酯為油相。稱取乙酰甲喹用一定量的油相攪拌溶解完全，依次加入表面活性劑、助表面活性劑各組分，混合攪拌均勻，然后慢慢滴加蒸餾水并不斷攪拌，觀察體系由渾濁變?yōu)槌吻鍟r停止加水，此時體系即為納米乳溶液。

2.2 工藝優(yōu)化 采用單因素考察法，依次分別對油相、表面活性劑和助表面活性劑進行考察，分別固定其中一項來考察體系中的其他成分對納米乳體系形成的影響，選擇最優(yōu)的制備工藝路線。

3 納米乳性質(zhì)考察

3.1 納米乳鑒別 取制備好的透明的納米乳，以6000r/min離心40min，觀察乳液是否分層或是否變渾濁。如果離心之后乳液仍保持透明則可以判定為納米乳。如若出現(xiàn)沉淀或混濁現(xiàn)象則說明為非納米乳。

3.2 納米乳粒徑分析 用透射電鏡檢測納米乳的形態(tài)，取乙酰甲喹納米乳適量，用蒸餾水稀釋后滴在覆有支持膜的銅網(wǎng)上，靜置后用濾紙片吸干，滴加磷鎢酸溶液于銅網(wǎng)上負染，自然揮干，在電鏡下觀察納米乳液滴的形態(tài)及測定其粒徑大小。

3.3 納米乳稀釋考察 取本試驗制備的納米乳分別進行10倍、100倍、1000倍和10000倍稀釋，觀察有無沉淀和破乳現(xiàn)象產(chǎn)生。

3.4 納米乳穩(wěn)定性考察 取本研究制取的納米乳放置室溫條件下，分別于0、1、2、3、4、5、6個月時抽取一定量進行外觀檢查有無沉淀混濁現(xiàn)象。

4 試驗結(jié)果

4.1 制備乙酰甲喹納米乳油相、表面活性劑和助表面活性劑的優(yōu)化結(jié)果 本試驗采用的低能乳化法制備了乙酰甲喹納米乳，該納米乳為黃色澄明溶液(見圖1)，在制備過程中油相具有溶解藥物的作用，表面活性劑和助表面活性劑能夠大幅度降低水的表面張力，有助于納米乳的形成。為了確保制備工藝穩(wěn)定，本試驗分別對油相、表面活性劑和助表面活性劑的使用進行了優(yōu)化，工藝優(yōu)化詳細見表1，從優(yōu)化結(jié)果來看本試驗制備的納米乳的最佳油相、表面活性劑和助表面活性劑搭配分別為乙酸乙酯、吐溫-80和丙二醇；肉豆寇酸異丙酯、吐溫-80和丙二醇。

圖1 a空白微乳，b乙酰甲喹納米乳

表1 乙酰甲喹納米乳油相、表面活性劑和助表面活性劑優(yōu)化

4.2 納米乳性質(zhì)考察結(jié)果 （1）分別取以油相、表面活性劑和助表面活性劑搭配分別為乙酸乙酯、吐溫-80、丙二醇和肉豆寇酸異丙酯、吐溫-80、丙二醇制備的納米乳，以6000r/min離心40min后觀察，結(jié)果顯示納米乳無沉淀產(chǎn)生，顏色無變化，整個體系仍然為黃色澄清溶液，這說明本實驗形成的納米乳為均一穩(wěn)定的分散體，符合納米乳制劑。（2）將乙酰甲喹納米乳用蒸餾水稀釋后滴在覆有支持膜的銅網(wǎng)上，靜置后用濾紙片吸干，滴加磷鎢酸溶液于銅網(wǎng)上負染，自然揮干，在電鏡下觀察納米乳并測定納米乳的粒徑，結(jié)果顯示本實驗制備的納米乳粒徑分布均一，粒徑分布在30～50nm，平均為40nm，電鏡觀察如圖2所示。

圖2 痢菌凈納米乳透射電鏡觀察

取本試驗制備的納米乳用水進行10倍、100倍、1000倍和10000倍稀釋，結(jié)果顯示納米乳無沉淀產(chǎn)生，能夠與水互溶無破乳藥物析出現(xiàn)象。在納米乳放置室溫條件下(25℃)，分別于0、1、2、3、4、5、6個月時抽取一定量進行外觀檢查發(fā)現(xiàn)本試驗制備的納米乳無沉淀，無混濁現(xiàn)象，外觀無明顯差異。這說明本試驗制備的納米乳具有較好的穩(wěn)定性，可以再常溫下長時間放置。

5 結(jié)論

本試驗采用的低能乳化法制備了乙酰甲喹納米乳并對油相、表面活性劑和助表面活性劑搭配進行了優(yōu)化。納米乳經(jīng)過電鏡粒徑分析顯示，納米乳粒徑分布30～50nm，平均粒徑在40nm，經(jīng)過稀釋和穩(wěn)定性考察顯示本研究制備的納米乳能夠用水稀釋，長時間放置無破乳、沉淀和藥物析出現(xiàn)象，這說明本試驗制備的乙酰甲喹納米乳性質(zhì)穩(wěn)定，符合納米乳的范疇，這為拓展乙酰甲喹臨床使用提供了新的劑型。

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