劉衛(wèi)東 程 璞 王章存 靳雙星

大米蛋白肽對冷應(yīng)激時鵪鶉健康狀況和血液生化指標的影響

劉衛(wèi)東1程 璞1王章存2靳雙星1

（河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院動物科技學(xué)院1，鄭州 450046）
（鄭州輕工業(yè)學(xué)院食品與生物工程學(xué)院2，鄭州 450002）

選擇3月齡健康黃羽雄性鵪鶉600只，隨機分為5組，每組120只，下設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)40只，各組鵪鶉養(yǎng)在不同的舍中。0組房舍人工采暖，舍溫22～24℃，平均為23℃；1～4組自然舍溫，溫度為9～13℃，平均為11℃，0組、1組喂不含大米蛋白肽的基礎(chǔ)日糧，2～4組分別喂含1.5%、2.0% 和2.5% 的大米蛋白肽的日糧，試驗期為18 d。添加2%～2.5% 的大米蛋白肽，使鵪鶉的發(fā)病死亡率、血清酶、血清中的醛固酮（ALD）、皮質(zhì)醇（FC）和甲狀腺素（T4）含量顯著或極顯著降低（P＜0.05或P ＜0.01），總脂（TG）和總蛋白（TP）含量明顯上升（P＜0.05）。顯示大米蛋白肽能明顯降低處于冷應(yīng)激狀態(tài)中的鵪鶉的發(fā)病死亡率，并有利于維持其機體的內(nèi)穩(wěn)態(tài)。

大米蛋白肽 冷應(yīng)激 鵪鶉 發(fā)病死亡率 生化指標

我國是世界第一的鵪鶉養(yǎng)殖大國，飼養(yǎng)量占世界的五分之一。鵪鶉喜溫怕寒，而國內(nèi)的鵪鶉養(yǎng)殖主要集中在華東和中原地區(qū)，這些地區(qū)冬春季節(jié)的低溫是引起鵪鶉生理異常和發(fā)病死亡的重要應(yīng)激原，給鵪鶉生產(chǎn)造成巨大損失，生產(chǎn)者急需找尋一種方法來解決此問題。使用安全無污染的營養(yǎng)型添加劑無疑是一種好方法。小肽是蛋白質(zhì)經(jīng)酶水解的產(chǎn)物，也是動物體內(nèi)蛋白質(zhì)消化吸收的主要方式［1］，它不僅具有遠高于游離氨基酸的營養(yǎng)吸收效率，而且還具有多種生理功能，如提高動物的免疫力和增進動物的食欲、增加養(yǎng)分的消化吸收［2-4］、減少房舍內(nèi)的有害氣體［5-6］等，因而推測小肽在動物的抗冷應(yīng)激上可能有好的作用，但目前鮮見相關(guān)報道。大米蛋白肽是大米蛋白經(jīng)酶水解的產(chǎn)物，屬于小肽，本試驗對大米蛋白肽在鵪鶉抗冷應(yīng)激方面的效果進行了研究。經(jīng)在冬季鵪鶉的日糧中使用大米蛋白肽后，其發(fā)病死亡情況和生理狀況均得到了明顯的改善。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料

大米蛋白肽：自制，平均肽鏈長度3.56，蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)75.05%。

1.1.2 儀器

HITCHI-7600-010型全自動生化分析儀：日本日立公司；Berthold Centro LB 960化學(xué)發(fā)光酶標儀：德國維克托公司。

1.2 試驗設(shè)計

選擇3月齡健康黃羽雄性鵪鶉600只，隨機分為5組，分別為0組（非冷應(yīng)激組），1組（冷應(yīng)激對照組），2～4組（冷應(yīng)激試驗組），每組120只，下設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)40只，各組鶉養(yǎng)在不同的舍中。0組房舍人工采暖，舍溫22～24℃，平均為23℃，1～4組自然舍溫，溫度為9～13℃，平均為11℃，試鶉自由采食與飲水，0組、1組喂基礎(chǔ)日糧，2～4組分別喂含1.5%、2.0% 和2.5% 的大米蛋白肽的日糧，各組日糧的組成與營養(yǎng)成分見表1。每天觀察鶉群，及時記錄發(fā)病死亡情況，試驗期為18 d。

表1 試驗日糧組成與營養(yǎng)水平

1.3 樣品采集與測定方法

1.3.1 血清樣品的的采集與制備

于試驗結(jié)束的早晨每個重復(fù)選1只鵪鶉空腹頸靜脈采血約4 mL。

測定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）和膽堿脂酶（CHE）等血清酶時血清樣本制備：取2 mL采集好的血液，置于離心管中，37℃ 恒溫水浴20 min，4℃、3 500 r／min離心10

min，收集血清，將血清樣品裝在離心管中，置于冰箱中-70℃低溫保存待用；測定醛固酮（ALD）、皮質(zhì)醇（FC）、總蛋白（TP）、總脂（TG）、甲狀腺素（T4）等指標時血清樣本的制備：取1.5～2 mL采集好的血液，注入離心管中，3 000 r／min離心15 min，取出血清裝入離心管，-20℃保存待用。

1.3.2 血清生理生化指標的測定

ALT、CK、LDH、CHE 采用試劑盒法，用全自動生化分析儀進行測定；TG、TP用全自動生化分析儀進行測定；T4采用試劑盒法，用化學(xué)發(fā)光酶標儀測定；ALD、FC用試劑盒測定。

1.3.3 發(fā)病死亡情況觀測統(tǒng)計

每天觀察鶉群，重點觀測眼病、呼吸道疾病及死亡情況，并計算發(fā)病率和死亡率。

發(fā)病率＝試驗期發(fā)病鶉數(shù)×發(fā)病時間（d）／試驗期鶉數(shù)×試驗時間（d）×100%

死亡率＝試驗期死亡鶉數(shù)／開始試驗時鶉數(shù)×100%

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，差異顯著時用SSR法進行多重比較，試驗數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標準差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 鵪鶉的發(fā)病死亡情況

冷應(yīng)激時鵪鶉的發(fā)病死亡率極顯著升高，使用大米蛋白肽后，鵪鶉的健康狀況得到改善（表2）。1組鵪鶉的眼病發(fā)生率、呼吸道發(fā)病率和死亡率都低極顯著高于0組（P＜0.01），2組的眼病發(fā)生率、呼吸道發(fā)病率和死亡率明顯低于1組（P＜0.05），但眼病發(fā)生率和死亡率明顯高于0組（P＜0.05）；3、4組的眼病發(fā)生率、呼吸道發(fā)病率和死亡率極顯著的低于1 組（P ＜0.01），與0 組差異不顯著（P ＞0.05）。

表2 試鶉的發(fā)病死亡情況

2.2 鵪鶉血清酶含量

對血清酶的測定結(jié)果（表3）顯示，2、3、4組的ALT含量明顯低于1組（P＜0.05），而與0組接近（P＞0.05）；2 組與1 組CK、LDH 和CHE 差異不顯著（P ＞0.05），而3、4 組的CK、LDH 和CHE 明顯低于1 組（P ＜0.05）。

表3 試鶉的血清酶含量

2.3 鵪鶉血清中營養(yǎng)物質(zhì)與激素含量

對血清中營養(yǎng)物質(zhì)與激素含量的測定結(jié)果（表4）表明，TP：2、3、4 組明顯的高于1 組（P ＜0.05），而與0組差異不顯著（P＞0.05）；TG：2組與1組差異不顯著（P＞0.05），3組和4組顯著高于1組（P＜0.05），且與0 組不存在顯著差異（P ＞0.05）；ALD：2、3組與1組差異不顯著（P＞0.05），4組明顯低于1組（P ＜0.05），與0 組相似（P ＞0.05）；FC：2 組與1組差異不顯著（P ＞0.05），3、4組明顯低于1組（P ＜0.05），而與0 組的差異不顯著（P ＞0.05）；T4：2 組與1組差異不顯著（P＞0.05），3、4組明顯低于1組（P ＜0.05），而與0 組接近（P ＞0.05）。

表4 試鶉血清中營養(yǎng)物質(zhì)與激素含量

3 討論

3.1 大米蛋白肽對鵪鶉發(fā)病死亡的影響

冬季的低溫造成鵪鶉生理機能失衡，免疫機能下降［7］，加上冬季為了保溫，通風(fēng)換氣量較小，舍內(nèi)有害氣體濃度升高，致使動物的發(fā)病死亡率上升。本試驗中，添加1.5%的大米蛋白肽，鵪鶉的眼病發(fā)生率、呼吸道發(fā)病率和死亡率與冷應(yīng)激對照組相比明顯降低；而添加2.0%的大米蛋白肽時，上述指標降低極為顯著，添加2.5%的大米蛋白肽與添加2.0%者相比，上述指標雖然有所改善，但沒有統(tǒng)計學(xué)上的差異。作者前期的研究表明，飼料中添加大米蛋白肽可以降低冬季雞舍中有害氣體的含量［8］，且能提高豬的免疫機能［9］。本研究在冷應(yīng)激環(huán)境下添加大米蛋白肽顯著降低了鵪鶉的發(fā)病率和死亡率，其原因可能也在于此。本試驗結(jié)果還表明，在減少冷應(yīng)激狀態(tài)鵪鶉發(fā)病死亡率方面，大米蛋白肽的適宜添加量為不少于2%。

3.2 大米蛋白肽對鵪鶉血清酶的影響

血清酶大多是組織特異性的，血清中酶的活性代表著特定組織器官的代謝水平和功能狀態(tài)。ALT主要來自肝臟、骨骼、膽囊，存在于組織細胞中，參與脂肪代謝；CK主要來自骨骼肌，在體內(nèi)主要促進磷酸肌酸轉(zhuǎn)化為肌酸和ATP；LDH廣泛存在于動物機體的組織器官中，CHE定位于神經(jīng)突觸前后膜上。正常情況下，細胞內(nèi)的酶由于細胞膜的屏障作用不易逸出，只有細胞受到損傷，才使細胞內(nèi)酶釋放的速度加大，血清酶活性升高。有研究表明，冷應(yīng)激時細胞膜的通透性升高，致使血清酶活性增強［10］。本試驗中添加1.5%的大米蛋白肽只有ALT的含量明顯低于冷應(yīng)激對照組，而添加2.0%和2.5%時，ALT、CK、LDH和CHE都明顯低于冷應(yīng)激對照組，原因可能是大米蛋白肽能夠減輕動物的應(yīng)激，且使血清中蛋白質(zhì)和脂肪的合成量增加［11］，血清中蛋白質(zhì)和脂肪的含量增加則有利于維持細胞膜的完整性和機體的內(nèi)穩(wěn)態(tài)。本研究結(jié)果顯示，添加大米蛋白肽條件下鵪鶉血清酶活性的變化趨勢與鵪鶉發(fā)病死亡率一致。

3.3 大米蛋白肽對鵪鶉血清中營養(yǎng)物質(zhì)與激素含量的影響

有研究表明，血清中TP能夠保持血液PH值的穩(wěn)定，并能在應(yīng)激的情況下為機體供能，從而提高動物的免疫能力［12］，血清中TG有利于磷脂的合成和保證寒冷時體內(nèi)生物膜的完整，從而降低其通透性［13］。在本試驗中表現(xiàn)出了鵪鶉血清酶的濃度降低；還有研究認為，動物在應(yīng)激情況下，體內(nèi)的FC和ALD分泌增多［14］，而FC使蛋白和脂肪分解加強，降低TP和TG含量，ALD過多會打破體內(nèi)離子平衡，促進鉀離子和鈣離子的排出［15］，不利于動物維持機體的內(nèi)穩(wěn)態(tài)；另外，寒冷時動物為維持體溫，體內(nèi)代謝加強，血液中T4濃度升高。本試驗中，添加1.5%的大米蛋白肽，僅使血液中的TP含量得到明顯改善，而添加2.0%的大米蛋白肽的組則能使TP、FC、T4都得到明顯改善，添加2.5%的大米蛋白肽與添加2.0%相比，還能改善血液中的ALD。本試驗結(jié)果表明，大米蛋白肽具有提高鵪鶉抗冷應(yīng)激的作用，且從改善鵪鶉血清中營養(yǎng)物質(zhì)與激素含量的方面考慮，大米蛋白肽的適宜添加量為2%～2.5%。

［1］Daniel H.Molecular and integrative physiology of intestinal peptide transport［J］.Annual Review of Physiology ，2004，66：361-384

［2］Herrera-Ruiz R D，Knipp G T.Current perspectives on established and putative mammalian oligopeptide transporters［J］.Journal of Pharmaceutical Sciences ，2003，92（4）：691-714

［3］Gilbert E R，Wong E A，Webb K E.Peptide absorption and utilization：Implications for animal nutrition and health［J］.Journal of Animal Science，2008，86（9）：2135-2155

［4］Klang J E，Burnworth L A，Pan Y X ，et al.Functional characterization of a cloned pig intestinal peptide transpouter［J］.Journal of Animal Science ，2005 ，83（1）：172-181

［5］Shlomo Y.Ammonia affects performance and thermoregulation of male broiler chickens［J］.Animal Research ，2004 ，53（4）：289-293

［6］劉衛(wèi)東，程璞，王章存，等.大米蛋白肽對蛋雞的飼養(yǎng)環(huán)境和生產(chǎn)性能的影響［J］.家畜生態(tài)學(xué)報，2012 ，33（5）：93-95.

Liu Weidong ，Cheng Pu ，Wang Zhangcun，et al.Effect of rice peptide on house environment and production performance of laying hens［J］.Journal of Domestic Animal Ecology，2012 ，33（5）：93-95

［7］甄莉，陳勇，計紅，等.冷應(yīng)激鵪鶉部分生理指標和血清酶活性的變化［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2013（3）：139-141

Zhen Li，Chen Yong ，Ji Hong ，et al.Changes of some physiological indexes and serum enzyme activities in cold stressed quail［J］.Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine ，2013（3）：139-141

［8］劉衛(wèi)東，程璞，王章存，等.大米蛋白肽對肉雞生產(chǎn)性能、健康狀況及雞舍氨氣含量的影響［J］.中國糧油學(xué)報，2013，28 （12）：82-85

Liu Weidong ，Cheng Pu ，Wang Zhangcun ，et al.Effect of rice peptides on the performance，health condition of broiler and ammonia xoncentration in henhouse［J］.Journal of the Chinese Cereals and Oils Associatins，2013，28（12）：82-85

［9］劉衛(wèi)東，王章存，程璞，等.大米蛋白肽對育成豬生產(chǎn)性能、養(yǎng)分代謝和血液生化指標的影響［J］.中國糧油學(xué)報，2011，26 （7）：72-75

Liu Weidong，Wang Zhangcun，Cheng Pu，et al.Effect of rice peptides the performance nutritional metabolism and blood biochemical index of growing pigs e［J］.Journal of the Chinese Cereals and Oils Associatins，2011，26 （7）：72-75

［10］夏倫志，曹永紅.土耳其蜂膠對鵪鶉的生長性能、胴體品質(zhì)及血清生化指標的影響［J］.安徽畜牧獸醫(yī)，2005，（11）：22-26.

Xia lunzhi，Cao Yonghong.Effects of Turkey propolis on growth performance，carcass quality and serum biochemical indexes of equail［J］.Anhui Animal Husbandry and Veterinary medicine ，2005，（11）：22-26

［11］劉衛(wèi)東，宋素芳，程璞，等.大米蛋白肽對固始雞生產(chǎn)性能、蛋白沉積及相關(guān)激素分泌的影響［J］.中國糧油學(xué)報，2010，25（3）：94-97

Liu Weidong，Song Sufang，Cheng Pu，et al.Effect of Rice Peptides on Performance，Protein Deposition and Relative Hormone Secretion of Gushi Chicken［J］.Journal of the Chinese Cereals and Oils Associatins，2010，25（3）：94-97

［12］楊維仁，祝平，楊在賓，等.哺乳期使用植物小肽對斷奶仔豬消化酶活性、免疫功能及消化道酸度的影響［J］.中國糧油學(xué)報，2008 ，23（2）：136-141

Yang Weiren，Zhu Ping，Yang Zaibing，et al.Effects of plant mini-peptide administration in sucking period on digestive enzyme acyivity immune performance andenteron acidity of weaned piglets［J］.Journal of the Chinese Cereals and Oils Associatins，2008 ，23（2）：136-141

［13］Ahmed A F，Consatble P D，Misk N A.Effect of feeding frequency and route of administration on abomasal luminal pH indairy calvefed milk replacer［J］.Journal of Dairy Science ，2002 ，85（6）：1502-1509

［14］趙聘，趙云煥.復(fù)合抗熱應(yīng)激添加劑對蛋雞血液生化指標的影響［J］.河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005（2）：70-73

Zhao Pin，Zhao Yunhuan.Effect of Complicated Anti-heat Stress Additiveson Blood Biochemical Indexes of Layers［J］.Journal of Henan Agricultural Sciences，2005（2）：70-73

［15］顧憲紅，杜榮.家畜應(yīng)激機理及其診斷［J］.當代畜牧，1994（4）：2-5

Gu Xianhong，Du Rong.Stress mechanism of domestic animals and its diagnosis［J］.Contemporary Animal Husbandry，1994（4）：2-5.

Effect of Rice Peptides on Health Condition and Blood
Biochemical Indicators of Quail During Cold Stress

Liu Weidong1Cheng Pu1Wang Zhangcun2Jin Shuangxing1
（College of Animal Science and Technology，Henan Univeisity of Animal Husbandry and Economy1，Zhengzhou 450046）（School of Food＆ Bioengineering，Zhengzhou University of Light Industry2，Zhengzhou 450002）

Six hundred 3-month-old yellow male quails were randomly assigned to five groups （120 for each group）with three replicates and 40 quails for each replicate.Every group quails were fed in different temperature houses.The control group （group 0）was fed in the poultry house with articifical warming（23 ±1）℃.Test group 1～4 were fed in the natural condition house（11±2）℃.Group 0 and group 1 were fed with rice peptides-free basal diet，and test group 2 ～4 were fed with different supplement of 1.5%，2%and 2.5%rice peptides in the control diet，respectively.The experiment lasted for 18 days.The results showed that the supplementation of the rice peptides（2%～2.5%）significantly or very significantly decreases the disease incidence，mortality，serum enzyme，aldosterone（ALD）and cortisal（FC）as well as thyroxine （T4）contents of the quails（P ＜0.05 or P ＜0.01）；nevertheless increases the contents of serum total lipids（TG）and total protein （TP）（P ＜0.05）.In conclusion，this research indicates that the rice peptides could decrease the mortality of the quails under cold stress，and it was conducive for quails to maintain the physiological balance in stress environment.

rice peptides，cold stress，quails，mortality，biochemical index

S831.5

A

1003-0174（2016）11-0081-04

國家自然科學(xué)基金（31071517）

2015-04-06

劉衛(wèi)東，女，1962年出生，教授，動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)