王緝明，李帥鵬，黃顯會*

（1.華南農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)學院，廣東 廣州 510642；2.內(nèi)蒙古金河動物藥業(yè)有限公司，內(nèi)蒙古 托克托 010200）

復方替米考星可溶性粉在雞體內(nèi)的藥動學研究

王緝明1，李帥鵬2，黃顯會1*

（1.華南農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)學院，廣東 廣州 510642；2.內(nèi)蒙古金河動物藥業(yè)有限公司，內(nèi)蒙古 托克托 010200）

本研究比較了口服復方替米考星可溶性粉與單獨肌注替米考星注射液和靜注磺胺二甲嘧啶鈉注射液在雞體內(nèi)藥物代謝動力學特征和相對生物利用度。36只健康雞，隨機分為3組，給藥劑量均為20 mg/kg，翼下靜脈采血，高效液相色譜法檢測雞血漿中的藥物濃度。采用藥動學軟件WinNonlin 6.1的非房室模型分析方法，計算出藥物的動力學參數(shù)。雞口服復方替米考星可溶性粉、肌注替米考星注射液和靜注磺胺二甲嘧啶鈉注射液后的藥時曲線下面積（AUC）分別為：9.49±3.64、37.17±10.82、12.40±4.11、61.31±11.38 μg×h/mL。復方替米考星可溶性中替米考星相對于肌肉注射的替米考星的生物利用度為75.98%，復方制劑中磺胺二甲嘧啶鈉的絕對生物利用度為60.63%。復方替米考星可溶性粉和單方藥物相比，藥動學參數(shù)經(jīng)t檢驗，t1/2、Tmax、Cmax、AUC、MRT等存在顯著性差異（P＜0.05）。結果表明復方替米考星可溶性粉單劑量口服給藥吸收較慢，達峰時間顯著延遲，平均駐留時間顯著延長，有利于抗菌作用的發(fā)揮。

復方替米考星可溶性粉；磺胺二甲嘧啶鈉；藥動學；生物利用度；雞

替米考星屬于畜禽專用的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，是泰樂菌素的衍生物。20世紀80年代由英國Elanco動物保健品公司首先研發(fā)，目前已在多個國家被批準動物臨床使用，主要用于防治畜禽呼吸道感染[1-6]。磺胺二甲基嘧啶屬于磺胺類抗生素，是磺胺類藥物中抗菌作用最強的藥物之一[7]，對多數(shù)革蘭氏陽性菌、陰性菌和許多原核生物均有抑制效果，具有抗菌譜廣、抗球蟲和價廉易得等優(yōu)點，在獸醫(yī)臨床和畜牧業(yè)中廣泛應用，用于治療巴氏桿菌病、子宮內(nèi)膜炎、呼吸道、消化道及泌尿道感染[8]。但是，由于近年來藥物的不規(guī)范使用，細菌耐藥性逐漸增強，混合感染病例的不斷增加，導致替米考星和磺胺二甲嘧啶單獨用于疾病防治的效果也在減弱。這給疾病的防治帶來了很大困難，所以迫切需要能對多種病菌起作用的復方制劑。替米考星和磺胺二甲嘧啶聯(lián)合使用可有效擴展抗菌譜，減少給藥次數(shù)，減少耐藥性的發(fā)生率，發(fā)揮更好的療效，并且藥物采用飲水給藥，應用方便易操作[9-11]。因此，本課題研究了復方替米考星可溶性粉在雞體內(nèi)的藥物代謝動力學過程，為制定臨床合理給藥方案、指導臨床合理用藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1儀器與試劑

1.1.1 儀器與設備 美國Waters公司高效液相色譜儀（配紫外檢測器、四元泵、脫氣泵、自動進樣器、柱溫箱等）；美國Thermo公司高速冷凍離心機；Milli-Q超純水系統(tǒng)；上海青浦滬西儀器廠XW-80A旋渦混合儀；高精度電子天平（1/10萬型）為賽多利斯公司等。

1.1.2 試劑 甲醇、乙腈、四氫呋喃均為色譜級；磷酸、正二丁胺、正己烷、二氯甲烷等均為國產(chǎn)分析純試劑；水為試驗室自制超純水。

1.1.3 對照藥品 替米考星注射液（批號20120312，規(guī)格：30%）、磺胺二甲嘧啶鈉注射液（批號12021701，規(guī)格：10%），均由上海公誼獸藥廠提供。替米考星對照品：含量90.3%，批號：K0310305，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。磺胺二甲嘧啶對照品：含量99.8%，批號：H0371005，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.1.4 供試藥品 復方替米考星可溶性粉（批號：12041501，主要成分為5%替米考星、5%磺胺二甲嘧啶鈉），華南農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)藥理研究室自制。

1.2動物與分組36只健康的三黃肉雞，購于華南農(nóng)業(yè)大學試驗雞場，雌雄各半，體重1.8 kg左右（8周齡左右）。按常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和采食，飼料為全價日糧，不含抗菌藥物。臨床觀察2周表現(xiàn)健康。36只雞隨機分為3組，每組12只，分別進行了口服復方替米考星可溶性粉、肌注替米考星注射液和靜注磺胺二甲嘧啶鈉注射液。試驗前16 h起及給藥后4 h期間禁食，僅自由飲水。

1.3給藥和血液采集復方替米考星可溶性粉組，按含有效成分替米考星20 mg/kg體重的劑量，將藥物溶于水中，采用灌胃給藥方式給藥，灌藥后雞禁食4 h，期間保障飲水；肌注替米考星注射液組和靜注磺胺二甲嘧啶鈉注射液組分別采用胸部肌肉注射、翅下靜脈注射；每種藥物的給藥劑量均為20 mg/kg（根據(jù)復方替米考星可溶性粉的使用濃度，雞，每1 L水加2 g本品，按每只雞每天飲水量為體重的20%計算，灌服劑量為每天20 mg替米考星/kg）。雞只側臥保定，從另一側翅下靜脈采血，給藥前采1次空白血。分別于給藥后0.083（僅靜注）、0.167（內(nèi)服除外）、0.25、0.5、1、2、4、6、8、10、12、16（內(nèi)服除外）、24、48、72 h雞翅下靜脈采血約1.5 mL，置于含肝素的離心管中，4 000 r/min離心10 min，分離血漿，-20℃冰箱保存，待測。

1.4樣品的處理與測定從冰箱中取出血漿，自然解凍，搖勻。準確吸取血漿0.5 mL于10 mL塑料離心管內(nèi)，加入2.5 mL提取液，渦旋1 min后6 000 r/min離心10 min，取上清液于10 mL玻璃管中，重復提取1次，合并兩次上清液。置35℃水浴下氮氣吹干，0.5 mL流動相溶解并渦旋1 min后，過0.45 μm針筒式微孔濾膜，進行HPLC分析，用外標法求得血漿中待測藥物的濃度。

1.5數(shù)據(jù)分析處理采用美國Pharsight公司藥動學軟件 Winnonlin 6.1的非房室模型來處理藥動數(shù)據(jù)，計算出每只試驗雞的藥動學參數(shù)，然后計算平均值及標準差，同時以血藥濃度平均值對時間作藥-時曲線圖。

2 結果與分析

2.1色譜條件適用性本研究建立的血漿中替米考星、磺胺二甲嘧啶樣品處理方法和HPLC測定方法，磺胺二甲嘧啶、替米考星反式峰和順式峰的色譜峰峰形分離良好，出峰時間分別為7.9、8.6和9.7 min左右，空白血漿無干擾（色譜圖見圖1和圖2），表明本方法能夠用于磺胺二甲嘧啶、替米考星在血漿中的測定。

圖1 雞空白血漿色譜圖Fig.1 Chromatogram of blank plasma of chicken

圖2 雞空白血漿中添加制得含替米考星、磺胺二甲嘧啶標準品（0.5 μg/mL）色譜圖Fig.2 Chromatogram of blank muscle spiked with 0.5 μg/mL tilmicosin and sulfadimidine

2.2標準曲線和線性范圍血漿添加替米考星濃度在0.05～5 μg/mL范圍內(nèi)，線性關系良好，回歸方程為y=69401x+236，相關系數(shù)r2=0.9991；血漿添加磺胺二甲嘧啶濃度在0.05～5 μg/mL范圍內(nèi)，線性關系良好，回歸方程為y=62579x-900.5，相關系數(shù)r2=0.9995；若分析樣品時，濃度不在此范圍內(nèi)，則稀釋樣品即可。

2.3回收率和精密度經(jīng)本方法測定，在0.05、0.5和5 μg/mL 3個添加濃度下，血漿中替米考星的回收率為 82.38～108.75%，批內(nèi)變異系數(shù)2.25%～4.33%，批間變異系數(shù)5.82%～8.49%，；血漿中磺胺二甲嘧啶的回收率為80.30～93.40%，批內(nèi)變異系數(shù)2.29%～4.32%，批間變異系數(shù)5.25%～6.28%；該方法替米考星和磺胺二甲嘧啶檢測限均為0.02 μg/mL，定量限均為0.05 μg/mL，表明該方法靈敏度高，能滿足血漿中替米考星和磺胺二甲嘧啶檢測需要。

2.4血藥濃度及藥動學參數(shù)健康雞單劑量口服復方替米考星可溶性粉、肌注替米考星注射液和靜注磺胺二甲嘧啶鈉注射液后，不同時間血藥濃度的實測值見表1，血漿藥物濃度-時間曲線見圖3和圖4。采用藥動學軟件WinNonlin6.1的非房室模型統(tǒng)計矩分析方法對藥物在雞體內(nèi)的藥物動力學參數(shù)進行分析，得到藥動學參數(shù)見表2。

由表2可知，主要藥動學參數(shù)t1/2、Tmax、Cmax、AUC、MRT統(tǒng)計差異顯著（P＜0.05）。

表1 3組健康雞單劑量（20 mg/kg）給藥后血漿中的藥物濃度（n=12）Table1 Drug concentration of 3 groups after administration with 20 mg/kg(n=12)

表2 3組健康雞單劑量(20 mg/kg)給藥后的藥代動力學參數(shù)(n=12)Table2 Pharmacokinetic parameters of 3 groups after administration with 20 mg/kg(n=12)

圖3 雞內(nèi)服復方替米考星可溶性粉與肌注替米考星（20 mg/kg）后的血藥濃度-時間曲線Fig.3 Drug concentration-time curve of compound tilmicosin soluble powder orally and tilmicosin intramuscularly to chickens

3 討論與結論

3.1口服復方替米考星可溶性粉藥動學特征健康雞口服復方替米考星可溶性粉（20 mg/kg）后，磺胺二甲嘧啶鈉的吸收較快，給藥后2.25 h血藥濃度達峰值（Cmax），為10.03 mg/mL，血漿中平均消除半衰期（t1/2）為1.38 h，曲線下面積（AUC）為37.17 μg· h·mL-1，平均滯留時間（MRT）為3.95 h，表觀分布容積（Vz）為1.09 L/kg。健康雞口服復方替米考星可溶性粉（20 mg/kg）后，替米考星吸收緩慢，給藥后9.00 h，替米考星的血藥濃度達峰值（Cmax），為1.43 mg/mL；血漿中平均消除半衰期（t1/2）為12.24 h，曲線下面積（AUC）為9.49 μg·h·mL-1，平均滯留時間（MRT）為11.75 h，表觀分布容積（Vz）為35.00 L/kg。

圖4 雞內(nèi)服復方替米考星可溶性粉與靜注磺胺二甲嘧啶鈉（20 mg/kg）后的血藥濃度-時間曲線Fig.4 Drug concentration-time curve of compound tilmicosin soluble powder orally and sulfadimidine intravenously to chickens

3.2肌注替米考星注射液的藥動學特征由于替米考星禁止靜脈注射給藥，故選擇了肌注作為參考給藥途徑。肌注替米考星注射液（20 mg/kg）后，吸收迅速，肌內(nèi)注射給藥后0.50 h，血藥濃度達峰值（Cmax），為2.33 mg/mL。血漿中平均消除半衰期（t1/2）為8.99 h；曲線下面積（AUC）為12.40 μg·h·mL-1，平均滯留時間（MRT）為10.69 h，表觀分布容積（Vz）為20.56 L/kg。

3.3靜注磺胺二甲嘧啶鈉注射液的藥動學特征靜注磺胺二甲嘧啶鈉注射液（20 mg/kg）后，吸收迅速，靜脈注射給藥后0.083 h，血藥濃度達峰值（Cmax），為22.99 mg/mL。血漿中平均消除半衰期（t1/2）為1.26 h；曲線下面積（AUC）為61.31 μg·h· mL-1，平均滯留時間（MRT）為2.50 h，表觀分布容積（Vz）為0.60 L/kg。

3.4復方替米考星可溶性粉與單用替米考星、磺胺二甲嘧啶鈉注射液的藥動學參數(shù)比較健康雞口服復方替米考星可溶性粉24 h后，替米考星的平均血藥濃度為0.12 mg/mL；給藥后12 h，磺胺二甲嘧啶的平均血藥濃度達0.38 mg/mL，24 h低于定量限。肌注替米考星后，在24 h平均血藥濃度為0.10 mg/ mL。靜注磺胺二甲嘧啶后，在8 h平均血藥濃度為1.08 mg/mL，16 h后多數(shù)動物低于定量限。采用統(tǒng)計分析軟件Excel 2003和SPSS 16.0分析藥動學參數(shù)，復方替米考星可溶性粉和單方藥物相比，藥動學參數(shù)經(jīng)t檢驗，t1/2、Tmax、Cmax、AUC、MRT等存在顯著性差異（P＜0.05），表明復方替米考星可溶性粉單劑量口服給藥吸收較慢，達峰時間顯著延遲，平均駐留時間顯著延長。

與單方相比，健康雞口服復方替米考星可溶性粉（20 mg/kg）后，吸收表現(xiàn)一快一慢，達峰時間顯著延遲，達峰濃度都顯著低于單方制劑，在臨床用藥中能降低動物肝腎負擔（替米考星屬大環(huán)內(nèi)酯類，屬于時間依賴性型藥物，血藥濃度＞MIC的時間越長，抗菌效果越好[12]，太高的血藥濃度導致浪費，反而增加動物的肝腎負擔），減輕藥物的毒副作用，尤其是替米考星對心肌的毒性作用；平均駐留時間較長，有效血藥濃度維持時間延長，這在臨床用藥中能延長投藥間隔，減少給藥次數(shù)，降低動物應激反應[13]，這有利于兩藥抗菌作用的發(fā)揮；復方替米考星可溶性粉中替米考星相對于肌肉注射的替米考星的生物利用度為75.98%，復方制劑中磺胺二甲嘧啶鈉的絕對生物利用度為60.63%，說明復方制劑中替米考星和磺胺二甲嘧啶鈉吸收良好。

[1]馮明教，胡玉，馬滿堂，等.獸藥替米考星的研究進展[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2007，（2）：44-45.

[2]宋福杰，劉明春，符特.替米考星的應用研究進展[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2006，（7）：63-65.

[3]劉桂蘭，劉愛玲，鮑恩東.口服不同劑型替米考星在雞體內(nèi)相對生物等效性研究[J].畜牧與獸醫(yī)，2009，41（4）：14-18.

[4]韓孝欣，王建兵，劉芳，等.兩種替米考星可溶性粉在雞體中的藥動學比較研究[J].中國家禽，2015，37（17）：27-30.

[5]中國獸藥典委員會.獸藥使用指南（化學藥品卷）[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2010：181.

[6]熊浩山.血癖證下三黃雞單劑量內(nèi)服替米考星的藥動學研究[D].成都：四川農(nóng)業(yè)大學，2004.

[7]賀生中，周紅蕾，張斌，等.復方磺胺二甲嘧啶鈉在雞大腸桿菌病上的臨床應用[J].畜牧與獸醫(yī)，2008，40（2）：80-81.

[8]張利環(huán)，張春善，韓河平.高效液相色譜法測定肉鴨組織中磺胺二甲基嘧啶的殘留量[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2006，31（5）：309-310.

[9]李建成.替米考星飲水劑的穩(wěn)定性及其在肉雞體內(nèi)的藥代動力學研究[D].北京：中國農(nóng)業(yè)大學，2003.

[10]徐康.雞飲水給藥注意事項[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2008，（12）：11.

[11]趙海全.家禽飲水給藥的注意事項[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2010，（12）：67.

[12]郭傲民，張軍，柴桂珍，等.雞口服復方替米考星緩釋微球的血漿藥動學研究[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2014，（11）：46-50.

[13]梁文權主編.生物藥劑學與藥物動力學，第3版[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：292-293.

《現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)》雜志征稿啟事

一、雜志簡介

《現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)》雜志是經(jīng)國家新聞出版總署批準，由遼寧省畜牧獸醫(yī)局主管，遼寧省畜牧獸醫(yī)學會與遼寧省動物衛(wèi)生監(jiān)測預警中心聯(lián)合主辦，旨在打造全國一流的畜牧獸醫(yī)學術性、指導性刊物。國際統(tǒng)一刊號：ISSN 1672-9692，國內(nèi)統(tǒng)一刊號：CN 21-1515/S。本刊被中國知網(wǎng)、萬方數(shù)據(jù)庫、維普數(shù)據(jù)庫等國內(nèi)知名數(shù)據(jù)庫全文收錄。

二、征稿內(nèi)容

本刊堅持學術性與技術性兼顧的原則，主要刊登內(nèi)容涉及動物營養(yǎng)與飼料、動物遺傳育種與繁殖、動物生理生化、基礎獸醫(yī)學、預防獸醫(yī)學、臨床獸醫(yī)學、草業(yè)科學等方面前沿性研究成果、創(chuàng)新性理論研究及實用性技術報告。

三、稿件要求

1.本刊發(fā)稿以試驗報告為主，要求方案設計合理，數(shù)據(jù)翔實可靠，結構完整清晰；少量刊發(fā)以國內(nèi)外進展為主，高水平專題文獻綜述，以及較有深度的專題調(diào)研報告，所發(fā)稿件內(nèi)容對畜牧獸醫(yī)學術和實踐具有顯著的指導意義。

2.稿件字數(shù)以3 000～5 000字為宜。需按規(guī)范要求撰寫中英文摘要、關鍵詞、參考文獻，引用文獻在正文中準確標出。

3.基金項目應注明來源及編號，第一作者及通訊作者需提供簡介（出生年、性別、學歷、職務、職稱、主要從事工作或研究方向）。

四、獎勵政策

1.來稿確保在三天內(nèi)告知作者錄用情況。

2.對優(yōu)質稿件免收版面費，并給予200～1 000元不等的稿酬。

五、本刊投稿方式

登陸www.xdxmsy.com網(wǎng)站，進入“作者投稿中心”——“作者投稿”——“作者登錄”處注冊——使用注冊過的用戶名和密碼登錄——“投新稿件”處點擊“列表式投稿”——按所要求步驟進行即可成功投稿。

本刊聯(lián)系電話：024-23264602

郵箱：3091174540@qq.com

Study of pharmacokinetics of Compound Tilmicosin Soluble Powder in healthy chickens

Wang Jiming1,Li Shuaipeng2,Huang Xianhui1*
(1.College of Veterinary Medicine，South China of Agricultural University，Guangdong Guangzhou 510642; 2.Inner Mongolia Jinhe Animal Phamaceutical CO.,LTD，Neimenggu Tuoketuo 010200)

The pharmacokinetics and relative bioavailability of Compound Tilmicosin Soluble Powder after oral administration、Tilmicosin injection after intramuscular administration and Salfadimidine injection after intravenous administration were investigated in chickens.36 chickens were divided to 3 groups randomly,and then received 20 mg/kg of Compound Tilmicosin Soluble Powder、Tilmicosin injection and Salfadimidine injection respectively.Blood samples were collected and analyzed by high-performance liquid chromatography(HPLC).Pharmacokinetics parameters were estimated by the WinNonlin6.1 software package and SPSS 16.0 analysis of the time and concentration data..The AUC of Compound Tilmicosin Soluble Powder、Tilmicosin injection and Salfadimidine injection were respectively 9.49±3.64,37.17±10.82,12.40±4.11 and 61.31±11.38 μg×h/mL.The relative bioavailability of Tilmicosin after oral administration was 75.98%,and the absolute bioavailability of Salfadimidine after oral administration was 60.63%.Comparing Compound Tilmicosin Soluble Powder with Tilmicosin injection and Salfadimidine injection,statistical analysis showed that the main pharmacokinetic parameters of t1/2、Tmax、Cmax、AUC and MRT were different significantly (P＜0.05).In conclusion,it appeared that Compound Tilmicosin Soluble Powder was absorbed slowlyand completely,and Tmaxwas significantly delayed,and MRT was significantly prolonged,which broadens their antibacterial spectrum and benefits their pharmacodynamics.

Compound Tilmicosin Soluble Powder;Salfadimidine;Pharmacokinetics;Bioavailability;Chicken

S859.796 < class="emphasis_bold"> 文獻標識碼：B

B

1672-9692(2016)06-0045-07

2016-04-13

王緝明（1985-），男，在校研究生。

黃顯會（1969-），男，博士，高級獸醫(yī)師。

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項（201303038-5）。