劉 露，宋 波，趙大群，許 婷，丁 祥，侯怡鈴

(西華師范大學(xué)a.生命科學(xué)學(xué)院;b.西南野生動植物資源保護(hù)教育部重點(diǎn)實驗室，四川 南充 637009)

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松乳菇多糖(LDG-A)對S180荷瘤小鼠生理生化指標(biāo)的影響

劉 露，宋 波，趙大群，許 婷，丁 祥，侯怡鈴

(西華師范大學(xué)a.生命科學(xué)學(xué)院;b.西南野生動植物資源保護(hù)教育部重點(diǎn)實驗室，四川 南充 637009)

本研究主要觀察松乳菇多糖 (LDG-A) 對S180荷瘤小鼠生理生化指標(biāo)的影響, 以進(jìn)一步了解松乳菇多糖 (LDG-A) 是否有毒副作用。實驗選取S180荷瘤小鼠眼球動脈血用于生化指標(biāo)測定，并對這些指標(biāo)進(jìn)行生物學(xué)功能分析。結(jié)果表明各實驗組小鼠生理生化指標(biāo)均有不同程度變化。生物學(xué)功能分析結(jié)果提示松乳菇多糖LDG-A對小鼠的肝臟無毒副作用，且能緩解S180荷瘤小鼠的肝臟損害，同時松乳菇多糖LDG-A不影響小鼠的脂肪代謝途徑。以上研究結(jié)果為多糖類抗腫瘤藥物的篩選提供了科學(xué)依據(jù)。

松乳菇；多糖；S180荷瘤小鼠；生理生化指標(biāo)

圖1 松乳菇多糖(LDG-A)的結(jié)構(gòu)

多糖(polysaccharide)又稱多聚糖，是由10個以上的單糖聚合而成的生物大分子物質(zhì)。近年來，食用菌多糖因具有抑制腫瘤[1-3]作用而備受關(guān)注。而食用菌多糖的高級結(jié)構(gòu)、有無側(cè)鏈以及連接方式均與藥理作用有關(guān)，所以在我們的前期研究中，從松乳菇[4](Lactariusdeliciosus(L．exFr．)Gray)中純化得到了水溶性的松乳菇多糖(LDG-A)單體，運(yùn)用光譜學(xué)技術(shù)解析了其結(jié)構(gòu) (圖1)，結(jié)果顯示其為一種結(jié)構(gòu)新穎的多糖(LDG-A)。該多糖是由兩個單糖組成的雜多糖，即α-L-甘露糖和α- D-木糖以3∶1的比例組成，平均分子量約為110 kD，具有(1-6)α-L-甘露糖的骨架，2-O上連接一個→3)-α-D-木糖的側(cè)鏈，且松乳菇多糖(LDG-A)能夠顯著抑制移植性腫瘤S180的生長[5]，在28 mg/kg的劑量下，抑瘤率高達(dá)68.51 %。本文擬探究松乳菇多糖(LDG-A) 對S180荷瘤小鼠[6]生理生化指標(biāo)的影響，探尋其有無毒性作用，以期尋找為多糖類抗腫瘤藥物的篩選提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 動 物

昆明系小鼠30只,體重(30±3)g,均購于四川南充川北醫(yī)學(xué)院動物實驗中心。

1.1.2 藥 品

松乳菇多糖(LDG-A)來自本實驗室，按照參考文獻(xiàn)的方法制備。各種生化試劑購自南京建成生物工程研究所。

1.1.3 儀器設(shè)備

AY-220 電子天平(日本島津制作所)、UV-9100 紫外可見分光光度計(北京瑞利)、Force1418高速離心機(jī)(Labnet)、OLYMPUS光學(xué)顯微鏡(JAPAN)、XF9080 動物血液細(xì)胞分析儀(南京普朗醫(yī)用設(shè)備有限公司)、L-3280 生化半自動分析儀(上海科學(xué)實驗儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.2 方 法

1.2.1 試驗動物分組

30只昆明系小鼠隨機(jī)分為實驗組和空白對照組，實驗組為皮下接種移植性腫瘤S180，分為對照組和腹腔注射松乳菇多糖(LDG-A)組，劑量為 28 mg/kg；空白對照組為正常小鼠。實驗周期為7 d，實驗期間動物自由采食、自由飲水。

1.2.2 血樣的采集

腹腔注射7天后, 分別采血, 采血前空腹12 h。尾靜脈采血用于血液常規(guī)指標(biāo)測定, 眼球動脈采血用于生化指標(biāo)測定[7]。

1.2.3 生理生化指標(biāo)測定

采用 L-3280 半自動生化分析儀按照試劑盒說明書進(jìn)行。參考值為空白對照組的正常小鼠，并由測試系統(tǒng)輸入為默認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)參考值。

1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法

所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,應(yīng)用 SPSS 13.0 軟件進(jìn)行方差分析,P<0.05 為差異顯著,P<0.01 為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 松乳菇多糖LDG-A對肝臟的影響

肌酐[8](creatinine，Cre) 是人體肌肉的代謝產(chǎn)物，主要通過腎小球排出體外，當(dāng)腎損傷后將導(dǎo)致肌酐在體內(nèi)蓄積損害機(jī)體健康。而血清肌酐濃度會受到腎小球的濾過能力(腎小球濾過率) 的影響。濾過能力下降，則肌酐濃度升高。通常腎小球濾過率下降到機(jī)體1/3時，血肌酐會明顯上升。實驗結(jié)果如表1顯示，皮下接種腫瘤S180后小鼠的肌酐值增加明顯，但腹腔注射LDG-A之后，小鼠的肌酐值相對于對照組下降極顯著(P<0.01)。提示松乳菇多糖LDG-A可以降低S180腫瘤導(dǎo)致的機(jī)體肌酐的聚集，減少腫瘤誘導(dǎo)的機(jī)體損害。

血清中的膽紅素[9]包括直接膽紅素和間接膽紅素，直接膽紅素會在肝內(nèi)經(jīng)過葡萄糖醛酸化，間接膽紅素不會在肝內(nèi)經(jīng)過葡萄糖醛酸化。結(jié)果顯示(表1)，松乳菇多糖LDG-A能減小總膽紅素的量，但值得注意的是直接膽紅素增加顯著，提示間接膽紅素大量的轉(zhuǎn)變成的直接膽紅素，可能與小鼠體內(nèi)糖代謝變化相關(guān)。

尿素[10]為含氨的化學(xué)物質(zhì)，產(chǎn)生于蛋白質(zhì)和氨基酸的分解代謝過程，尿素在肝臟中產(chǎn)生后融入血液，最后通過腎臟由尿排出。注射S180腫瘤之后的小鼠的尿素值相對于參考值增加極顯著(P<0.01)，提示肝臟損害，腹腔注射松乳菇多糖LDG-A后，尿素值下降顯著，提示肝臟損害情況有所好轉(zhuǎn)。

表1 LDG-A對小鼠肝臟影響的數(shù)據(jù)結(jié)果

注：*為與參考值比較P<0.05，#為與對照組比較P<0.05，**為與參考值比較P<0.01，##為與對照組比較P<0.01。

2.2 松乳菇多糖LDG-A對酶學(xué)指標(biāo)的影響

肝功能的酶學(xué)指標(biāo)[11-12]主要包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(γ-GT)。目前國內(nèi)外應(yīng)用最廣泛的反映肝細(xì)胞損害的指標(biāo)是ALT和AST，各種肝病均可引起ALT的升高；肝細(xì)胞合成分泌堿性磷酸酶ALP，膽管內(nèi)壓增高使肝臟合成增多，膽道排泄障礙也可使血液中ALP增高。血液中的γ-GT主要在肝細(xì)胞線粒體產(chǎn)生。

實驗結(jié)果如表2顯示，接種S180腫瘤后的小鼠，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，堿性磷酸酶和谷氨酰轉(zhuǎn)移酶均顯著增加，提示S180荷瘤小鼠肝臟有所損害，但腹腔注射28 mg/kg松乳菇多糖LDG-A的小鼠，各項酶學(xué)指標(biāo)均顯著下降，提示肝臟損害有所緩解。

表2 LDG-A對小鼠酶學(xué)指標(biāo)的數(shù)據(jù)結(jié)果

注：*為與參考值比較P<0.05，#為與對照組比較P<0.05，**為與參考值比較P<0.01，##為與對照組比較P<0.01。

2.3 松乳菇多糖LDG-A對蛋白質(zhì)代謝的影響

總蛋白[13]TotalProtein(簡稱TP)由白蛋白和球蛋白組成，一般正常小鼠的總蛋白在60～80 g/L之間，若超出這個范圍，說明小鼠肝臟有一定的受損?？偟鞍灼邔?dǎo)致腹瀉、嘔吐、休克、高熱、大量出汗，嚴(yán)重的還會導(dǎo)致多發(fā)性骨髓瘤，巨球蛋白血癥等。實驗結(jié)果如表3顯示，荷瘤小鼠對照組的總蛋白含量與參考值相比具有極顯著差異(P<0.01)，注射LDG-A后，荷瘤小鼠實驗組的總蛋白含量與參考值相比無明顯差異，提示總蛋白含量回歸正常值。

白蛋白[14](又稱清蛋白，albumin,Alb)是血漿中含量最多的蛋白質(zhì)；白蛋白具有較強(qiáng)的親水作用，這使血漿中的白蛋白對球蛋白起到一種膠體保護(hù)的穩(wěn)定作用。荷瘤小鼠對照組的白蛋白含量與參考值相比增加極顯著(P<0.01)，注射LDG-A的實驗組小鼠的白蛋白值相對于對照組下降極顯著(P<0.01)。提示白蛋白代謝出現(xiàn)較大變化，具體分子機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

球蛋白[15](Globulin)是一種在機(jī)體中常見的具有免疫作用血清蛋白。荷瘤小鼠對照組的球蛋白含量相對于參考值無明顯變化，LDG-A組的球蛋白與對照組相比增加顯著(P<0.05)。提示腹腔注射松乳菇多糖LDG-A后，小鼠的免疫系統(tǒng)受到調(diào)控。這可能與松乳菇多糖LDG-A顯示出較強(qiáng)的抗腫瘤活性相關(guān)。

表3 LDG-A對小鼠蛋白質(zhì)代謝數(shù)據(jù)結(jié)果

注：*為與參考值比較P<0.05，#為與對照組比較P<0.05，**為與參考值比較P< 0.01，##為與對照組比較P<0.01。

2.4 松乳菇多糖LDG-A對血脂血糖的影響

肝臟是維持血糖平衡的重要器官。當(dāng)肝臟受損后，參與代謝的多種酶活性降低，肝糖原合成減少，肝及周圍組織攝取和氧化糖的能力下降，導(dǎo)致血液中的葡萄糖升高。我們的實驗結(jié)果如表4顯示，荷瘤小鼠對照組的葡萄糖含量相對于參考值增加極顯著(P<0.01)，而注射LDG-A后的實驗組葡萄糖含量相對于對照組下降極顯著(P<0.01)。該結(jié)果與前述直接膽紅素增加相關(guān)。

總膽固醇(total cholesterol,TCHO)，是血液中所有脂蛋白所含膽固醇之和?？偰懝檀贾饕筛闻K合成和儲存，包括游離膽固醇和膽固醇脂。膽固醇還能合成腎上腺皮質(zhì)激素、性激素、膽汁酸及維生素D等生理活性物質(zhì)。荷瘤小鼠對照組的總膽固醇含量與參考值相比增加不明顯，而注射LDG-A之后的實驗組的總膽固醇也在正常值范圍之內(nèi)。

甘油三酯(Triglyceride,TG)是三分子長鏈脂肪酸和甘油形成的可提供能量的脂肪分子。甘油三酯是機(jī)體內(nèi)含量最多的脂類，甘油三酯也可在肝臟和脂肪等組織合成。荷瘤小鼠對照組與注射LDG-A的實驗組無明顯變化。綜上結(jié)果提示松乳菇多糖LDG-A并不影響小鼠的脂肪代謝途徑。

表4 LDG-A對小鼠血脂血糖的數(shù)據(jù)結(jié)果

注：*為與參考值比較P<0.05，#為與對照組比較P<0.05，**為與參考值比較P<0.01，##為與對照組比較P<0.01。

3 討 論

目前治療惡性腫瘤的方式主要是手術(shù)，放療和化療。放射治療[16]指通過射線消除病灶的一種局部治療方法，會損害白細(xì)胞導(dǎo)致全身功能紊亂和失調(diào)；化學(xué)藥物治療是一種全身治療的手段，到組織免疫功能下降。近年來，從天然產(chǎn)物中尋找抗腫瘤的活性成分成為主要的研究熱點(diǎn)。真菌多糖對腫瘤細(xì)胞有直接的細(xì)胞毒活性[17-18]，在體外可以殺死癌細(xì)胞，而對正常細(xì)胞無殺傷作用，這是真菌多糖與其他細(xì)胞毒性抗腫瘤藥物相比具有優(yōu)勢的地方之一。肝臟是人體最大腺體，是構(gòu)成網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的重要組成部分，也是免疫的重要器官，它雖然不直接產(chǎn)生抗體，但有大量巨噬細(xì)胞能在免疫調(diào)節(jié)發(fā)揮重要作用。本實驗通過對荷瘤小鼠注射LDG-A后測定生理生化指標(biāo)，表明松乳菇多糖LDG-A對小鼠的肝臟無毒副作用，且能緩解S180荷瘤小鼠的肝臟損害，同時松乳菇多糖LDG-A不影響小鼠的脂肪代謝途徑。

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Effect of Polysaccharides (LDG-A) from Lactarius deliciosus (L.ex Fr.) Gray on Physiological and Biochemical Indexes of Mice Bearing S180 Tumor

LIU Lu,SONG Bo,ZHAO Daqun,XU Ting,DING Xiang,HOU Yiling

(a.College of Life Science,b. Key Laboratory of Southwest China Wildlife Resources Conservation (China West Normal University)，Ministry of Education，Nanchong Sichuan 637009,China)

This study was mainly to observe the effect of LDG-A on the physiological and biochemical indexes of mice bearing S180 tumor,so as to further study whether the polysaccharide (LDG-A) is toxic and has side effects.The ocular artery blood of mice bearing S180 tumor was selected for biochemical indicators analysis,and the biological function of these indexes was analyzed.The results showed that the physiological and biochemical indexes in all the experimental groups were changed in different degrees.The biological function analysis suggested that the polysaccharide of LDG-A was not toxic to the livers of the mice and could alleviate the liver damage of mice bearing S180 tumor, and at the same time,the fat metabolism of the mice was not affected.The above results provide a scientific basis for the screening of antitumor drugs.

Lactariusdeliciosus(L.exFr.) Gray;polysaccharide;S180 tumor bearing mice;physiological and biochemical index

1673-5072(2016)04-0380-05

2016-05-20

劉 露(1992—)，女，四川平武人，碩士研究生，主要從事微生物學(xué)研究。

侯怡鈴(1983—)，女，四川南充人，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究。 E-mail：starthlh@126.com

Q539；Q594

A

10.16246/j.issn.1673-5072.2016.04.004