張海橋 吳旭萍 林勝友

中醫(yī)以健脾法為基礎(chǔ)治療結(jié)直腸癌實驗研究進(jìn)展

張海橋1吳旭萍1林勝友2

結(jié)直腸癌；中醫(yī)藥療法；健脾法

結(jié)直腸癌的主要治療手段是手術(shù)、放射治療、化學(xué)治療及靶向治療[1-2]。西醫(yī)治療取得確切療效同時，往往帶來諸多毒副作用，常常使患者不可耐受，嚴(yán)重者中斷治療。中醫(yī)藥聯(lián)合西醫(yī)治療結(jié)直腸癌增效減毒、控制復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移、提高患者生活質(zhì)量等方面都發(fā)揮著重要作用。中醫(yī)認(rèn)為，結(jié)直腸癌屬“積聚”、“腸風(fēng)”等范疇，根本病機(jī)為脾氣虧虛、邪毒積聚，屬本虛標(biāo)實，病位在腸而病本在脾。林勝友等[3]通過臨床觀察研究發(fā)現(xiàn)，脾虛為結(jié)直腸癌的主要中醫(yī)癥候。臨床文獻(xiàn)回顧分析顯示結(jié)直腸癌的證型以脾虛證為主，藥物使用頻率中也以健脾類藥物占據(jù)明顯優(yōu)勢[4]。本文就健脾法為基礎(chǔ)治療結(jié)直腸癌實驗研究進(jìn)展總結(jié)如下。

1 調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞周期

調(diào)控腫瘤細(xì)胞周期主要表現(xiàn)在抑制腫瘤細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡兩方面，增殖失控是腫瘤組織的特征表現(xiàn)，由于腫瘤細(xì)胞不受機(jī)體的神經(jīng)及體液等調(diào)節(jié)，也不受周圍環(huán)境的調(diào)節(jié)，而出現(xiàn)無限制的惡性增殖，抑制腫瘤細(xì)胞的惡性增殖是目前治療腫瘤的重要手段之一；細(xì)胞凋亡是有核細(xì)胞在接收到生理或病理信號后啟動的誘導(dǎo)凋亡途徑，凋亡調(diào)控失常可導(dǎo)致細(xì)胞增殖異常，被認(rèn)為是腫瘤形成的重要機(jī)制之一[5]。許多健脾類中藥及方劑的抗癌作用是通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實現(xiàn)的。如中藥人參的重要功效為健脾補(bǔ)氣，李秋影等[6]通過實驗研究發(fā)現(xiàn)，中藥人參提取物20（S）-人參皂苷Rh2能阻滯結(jié)腸癌細(xì)胞周期于S期，從而達(dá)到抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的目的。韓博等[7]通過實驗研究發(fā)現(xiàn)，中藥人參提取物20（S）-人參皂苷Rg3能通過Caspase-9及Caspase3信號通路誘導(dǎo)結(jié)腸癌干細(xì)胞發(fā)生凋亡，從而達(dá)到抑制結(jié)腸癌干細(xì)胞增殖的目的。何運(yùn)元等[8]通過試驗研究發(fā)現(xiàn)，人參提取物人參皂苷Rg3能有效抑制腫瘤細(xì)胞HCT116和SW480的生長，其機(jī)制可能是通過下調(diào)β-catenin的磷酸化，從而發(fā)揮抗腫瘤的作用。張俊華等[9]研究發(fā)現(xiàn)，以健脾類中藥為基礎(chǔ)的，由中藥人參、黃芪、刺五加、斑蝥等提取物組成的艾迪注射液能抑制大腸癌細(xì)胞SW620的增殖，其作用機(jī)制可能是阻止巨噬細(xì)胞對SW620細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的促進(jìn)作用，從而達(dá)到抑制腫瘤組織生長的目的。凌博凡等[10]研究發(fā)現(xiàn)，由中藥黃芪15g，白術(shù) 10g，薏苡仁 30g，丹參 10g，半枝蓮 30g，重樓15g，白芍10g所組成的，以健脾法為基礎(chǔ)的健脾化瘀方，可能通過下調(diào)miRNA-31以及上調(diào)miRNA-143的表達(dá)，從而達(dá)到對結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤生長的顯著抑制作用。劉靜等[11]報道以圣愈湯為基礎(chǔ)裁化而成的，具有健脾益氣、化瘀散結(jié)功效的健脾復(fù)方，與5-Fu聯(lián)用作用于大腸癌原位移植瘤模型鼠后的瘤質(zhì)量、體積及轉(zhuǎn)移數(shù)量均低于其他的對照組（健脾復(fù)方組、塞來昔布組、5-Fu組和模型對照組），說明健脾復(fù)方與5-Fu聯(lián)用可抑制人大腸癌移植瘤的生長及轉(zhuǎn)移。唐廣義等[12]通過體外細(xì)胞培養(yǎng)的實驗發(fā)現(xiàn)，以健脾補(bǔ)氣為基礎(chǔ)的，由中藥人參、黃芪、沙參、麥冬、白術(shù)、茯苓、半枝蓮、莪術(shù)等組成的腸積寧方，可以通過抑制人大腸癌細(xì)胞株HT-29凋亡相關(guān)基因bcl-2及bax的表達(dá)，從而達(dá)到促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡的目的，并且這種促進(jìn)凋亡作用隨著藥物濃度的增加而增加。唐廣義等[13]還通過體外實驗研究發(fā)現(xiàn)，具有益氣健脾、扶正抗癌等作用的，由中藥白術(shù)、太子參、半夏、木香、甘草等組成的益氣健脾抗癌方，可以明顯增加人腸癌HT-29細(xì)胞移植鼠瘤體中的腫瘤細(xì)胞的凋亡率，從而達(dá)到抗腫瘤的目的。王國娟等[14]通過實驗研究發(fā)現(xiàn)以健脾法為基礎(chǔ)的中藥復(fù)方腸胃清能抑制結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞的增殖，改變細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，并可與化療藥物協(xié)同作用。張濤等[15]實驗研究發(fā)現(xiàn)，由救必應(yīng)、白術(shù)、白芍、水蛭、三七、炙甘草組成的以健脾法為基礎(chǔ)的健脾清熱活血方，能通過介導(dǎo)PI3K信號通路，調(diào)控磷酸化β-catenin核內(nèi)轉(zhuǎn)錄的機(jī)制使SW480細(xì)胞周期阻滯于G1期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，并且有一定的濃度依賴性，從而發(fā)揮防治結(jié)腸癌的作用。

2 抑制結(jié)直腸癌血管內(nèi)皮生長因子的形成

腫瘤生長及轉(zhuǎn)移離不開血管的生成，腫瘤繼續(xù)生長有賴于新血管的生成以提供足夠的營養(yǎng)和氧氣，帶走代謝產(chǎn)物。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）能誘導(dǎo)腫瘤新生血管的形成，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，增加新生血管管壁的通透性，而利于腫瘤細(xì)胞脫落、進(jìn)入血管或侵犯臨近組織，為腫瘤的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件[16-17]。抑制腫瘤組織血管內(nèi)皮因子形成是目前治療結(jié)直腸癌治療的手段之一。劉宣等[18-19]研究表明，由黃芪、黨參、白術(shù)、薏苡仁、豬苓、石見穿、野葡萄藤等藥性組成，以健脾法為基礎(chǔ)的健脾解毒方能通過COX-2-Wnt/βcatenin信號通路下調(diào)VEGF的表達(dá)，從而抑制人結(jié)腸癌皮下移植瘤的生長和血管新生。蔣益蘭等[20]通過實驗研究發(fā)現(xiàn)，以中醫(yī)健脾為基礎(chǔ)的，由中藥黨參、薏苡仁、莪術(shù)、石見穿、七葉一枝花等組成的健脾消癌方，能降低血清中VEGF的表達(dá)以顯著降低大腸癌術(shù)后模型鼠的肝轉(zhuǎn)移數(shù)目。李勇敢等[21]擬健脾消癌方能通過調(diào)節(jié)相關(guān)mRNA表達(dá)水平的方法降低結(jié)直腸轉(zhuǎn)移裸鼠腸、肝、肺組織中VEGF表達(dá)，增高ES表達(dá)，從而達(dá)到延長生存期降低復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率的目的。郭剛等[22]通過體外實驗研究發(fā)現(xiàn)，具有健脾益氣補(bǔ)血等功效，由四君子湯和四物湯加上黃芪、肉桂組成的十全大補(bǔ)湯，能通過尚不明確的直接或間接機(jī)制來抑制小鼠結(jié)腸癌原發(fā)瘤切除后轉(zhuǎn)移瘤的生長，并能降低原發(fā)瘤切除后小鼠外周血VEGF水平，上調(diào)ES水平，從而減少血管的生成，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移。

3 調(diào)控免疫

研究[23-24]表明，腫瘤的發(fā)生發(fā)展與機(jī)體的免疫功能密切相關(guān)，腫瘤的侵襲及放化療后的副反應(yīng)均會導(dǎo)致大腸癌患者的免疫功能顯著低于正常人，且患者免疫功能的降低往往與大腸癌的分期呈正相關(guān)，因此提高患者的免疫功能是提高大腸癌治療效果的一個非常重要的方面。崔澂等[25]和崔桯等[26]通過實驗研究發(fā)現(xiàn)，歸肺、脾、肝、腎經(jīng)的，具有補(bǔ)脾益氣固表等功效的黃芪制劑AMB作用于結(jié)直腸癌細(xì)胞株Colon26后能明顯下調(diào)NK免疫功能的殺傷效果以及直腸癌細(xì)胞分泌TGF-β1等免疫抑制分子，從而發(fā)揮抗腫瘤的效應(yīng)，而這種下調(diào)作用明顯優(yōu)于同期對照的攻毒類、清熱解毒類、活血化瘀類、軟堅散結(jié)類、化痰祛濕類中藥。周留勇等[27]通過實驗研究發(fā)現(xiàn)，主要由黨參、豬苓、炒白術(shù)、薏苡仁、法半夏、陳皮、枇杷葉等組成的以健脾法為基礎(chǔ)的具有健脾養(yǎng)胃益氣、滲濕化痰降氣功效的趙氏微調(diào)三號方（WD-3合劑），能顯著提高細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的水平，激發(fā)機(jī)體免疫功能，從而達(dá)到抗腫瘤生長及轉(zhuǎn)移的目的，并且WD-3合劑能引起HT-29/LOVO大腸癌細(xì)胞凋亡，并且有一定的濃度依賴性，從而進(jìn)一步的殺傷腫瘤細(xì)胞。

4 逆轉(zhuǎn)結(jié)直腸癌治療相關(guān)耐藥

化療是結(jié)直腸癌重要的治療手段，但耐藥的發(fā)生即腫瘤細(xì)胞對化療藥物不敏感，大大地限制了化療的療效?；煹哪退幧鏅C(jī)制涉及多方面，主要有P-糖蛋白（P-gp）、多種耐藥相關(guān)蛋白（MDR1）、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶活性、DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶含量減少或性質(zhì)改變等。中藥復(fù)方腸胃清（健脾解毒方）主要由黃芪、黨參、生白術(shù)、豬苓、薏苡仁、野葡萄藤等藥組成，具有益氣健脾，燥濕解毒的功效。關(guān)于腸胃清逆轉(zhuǎn)耐藥的機(jī)制已進(jìn)行諸多研究：（1）腸胃清可逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞株HCT8/V的多藥耐藥，對順鉑耐藥的逆轉(zhuǎn)指數(shù)達(dá)到13.02[28]；（2）復(fù)方腸胃清能通過影響耐藥細(xì)胞YB-1的核移位、降低MDR1/P-gp的表達(dá)，從而達(dá)到逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細(xì)胞耐藥的發(fā)生[29]；（3）復(fù)方腸胃清能通過上調(diào)肝轉(zhuǎn)移瘤組織hCTR1的表達(dá)，下調(diào)ATP7A和ATP7B蛋白的表達(dá)，降低GST-π和MRP2的表達(dá),增加腫瘤細(xì)胞內(nèi)鉑類藥物的含藥量，從而控制耐藥的發(fā)生達(dá)到化療增敏的作用[30]；（4）腸胃清還可以通過增加結(jié)腸癌細(xì)胞內(nèi)的Pt-DNA加合物的水平等方式，從而達(dá)到逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌HCT116/L-OHP細(xì)胞對鉑類的耐藥[31-32]；（5）健脾解毒方可以通過抑制COX-2 的活性，降低 p-c-Jun（Ser63，73）的表達(dá)，從而達(dá)到降低MDR1/P-gp介導(dǎo)的多藥耐藥[33-34]。

5 結(jié)語

近年來，中醫(yī)以健脾法為基礎(chǔ)對結(jié)直腸癌防治研究日漸深入，已經(jīng)達(dá)到分子、基因水平，這些研究對于揭示健脾基礎(chǔ)中醫(yī)藥防治結(jié)直腸癌的作用靶點和研發(fā)有效抗癌新藥有重要意義。再取得理想效果的同時，中醫(yī)以健脾法為基礎(chǔ)治療結(jié)直腸癌仍然面對著諸多挑戰(zhàn)：（1）中醫(yī)健脾法常常以輔助增效的角色出現(xiàn)在臨床治療中，但需臨床醫(yī)生對患者的癥狀及體征進(jìn)行分型，受主觀因素的影響，對健脾法的運(yùn)用有一定的影響；（2）目前的研究設(shè)計及研究過程中仍缺乏嚴(yán)謹(jǐn)性及客觀性；（3）大多數(shù)研究的的中藥方劑都是經(jīng)驗方或中成藥，研究經(jīng)方者較少，不能體現(xiàn)出中醫(yī)傳統(tǒng)經(jīng)典的優(yōu)勢治則。

中藥復(fù)方或中藥制劑的相關(guān)實驗室研究從多個機(jī)制顯示出了一定的對結(jié)直腸癌的治療效果，但總體的數(shù)量仍較少，尚未系統(tǒng)并深入的分析其規(guī)律性分子學(xué)機(jī)制。希望以后能采用科學(xué)的研究方法開展更多的更為廣泛的實驗室研究，以充分證實中醫(yī)健脾法在防治結(jié)直腸癌方面的作用，同時希望加強(qiáng)實驗室研究及臨床研究之間的聯(lián)系，為以健脾法為基礎(chǔ)的中醫(yī)藥防治結(jié)直腸腫瘤臨床應(yīng)用提供更多更可靠的理論依據(jù)。

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作者信息：1浙江中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院（杭州 310053）；2杭州市腫瘤醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科（杭州 310000）；

林勝友，Tel：135095715111；E-mail：linsy@163.com