馬偉林

（銀川市金鳳區(qū)良田畜牧獸醫(yī)工作站，寧夏銀川 750019）

銀川市動物免疫抗體監(jiān)測工作幾點思考

馬偉林

（銀川市金鳳區(qū)良田畜牧獸醫(yī)工作站，寧夏銀川 750019）

動物免疫抗體水平檢測是對某一區(qū)域內(nèi)動物免疫效果進行檢驗的一項重要的技術(shù)手段，可以及時、準確地掌握該區(qū)域內(nèi)動物免疫抗體的整體水平，是動物疫病防控工作的重要基礎(chǔ)，也是動物疫情流行病學調(diào)查和疫情分析評判的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，可為制定科學的免疫程序、考核免疫質(zhì)量、綜合分析動物疫情發(fā)生的風險及應采取的防控措施提供理論依據(jù)。自2006年以來，全國所有省、市、自治區(qū)均采用此項技術(shù)考核動物免疫質(zhì)量，寧夏回族自治區(qū)也不例外，但由于抗體水平檢測工作程序多、過程長，其檢測結(jié)果會受到很多因素的影響，往往與真實水平還存在著一定的差異。筆者作為鄉(xiāng)鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站的負責人在工作中對各種影響因素進行了分析，并提出了相應的措施，供相關(guān)人員參考。

1 免疫因素

1.1 動物自身因素

動物的遺傳因素、營養(yǎng)狀況、母源抗體的干擾和免疫抑制疾病等因素將直接影響到動物免疫應答的強弱。機體對接種的免疫應答在一定程度上是受遺傳控制的，因此不同品種甚至同一品種不同個體的動物，對同一種抗原的免疫反應強弱也有差別。有的動物個體甚至有先天免疫缺陷，從而導致免疫失敗。動物維生素及氨基酸的缺乏都會使機體的免疫功能下降；種畜禽個體免疫應答的差異以及不同批次動物來自不同的種畜禽等原因，造成新生幼畜和雛禽母源抗體水平參差不齊，若母體抗原水平過高，反而干擾了后天免疫，不能產(chǎn)生應有的免疫應答；有些疾病嚴重影響疫苗的免疫效果，引起免疫抑制，從而影響疫苗的免疫效果。環(huán)境衛(wèi)生狀況不良，圈舍及周圍環(huán)境中存在大量的病原微生物，在使用疫苗期間動物已受到病原的感染，這些都會影響疫苗免疫的效果，從而影響到了動物免疫抗體的檢測結(jié)果。銀川市金鳳區(qū)南部主要是原郊區(qū)農(nóng)民和涇源縣移民，其飼養(yǎng)技術(shù)水平、圈舍環(huán)境衛(wèi)生都大不相同，這些因素都會影響監(jiān)測結(jié)果。

1.2 疫苗方面

疫苗質(zhì)量、疫苗的保存和運送、疫苗的使用是免疫成敗的關(guān)鍵因素。應從正規(guī)生產(chǎn)單位購買疫苗，保證疫苗效價和抗原含量以及疫苗的正常形狀等，正確保存和運輸疫苗，確保疫苗質(zhì)量和免疫效果。要嚴格按照疫苗的使用說明使用疫苗，嚴格遵守免疫操作規(guī)程，確保免疫效果，盡量避免疫苗聯(lián)合使用，以防止兩種疫苗間的互相干擾，影響抗體的產(chǎn)生，二者要間隔1周以上接種。同時根據(jù)當?shù)匾卟×餍星闆r和本場實際而制定合理免疫程序，以保證免疫效果。動物防疫員在工作中對疫苗的冷鏈保存也有差別，負責任的冷藏包里加些冰塊，不負責的則什么措施都沒有，轉(zhuǎn)一天下來，疫苗早已失去效價，那還有什么抗體水平。近幾年口蹄疫、禽流感疫苗都制成三價疫苗，即O型口蹄疫 、A型口蹄疫、亞洲1型口蹄疫疫苗制成三價聯(lián)苗，禽流感-6毒株、-7毒株、-8毒株制成三價聯(lián)苗。在免疫注射時一次注射，但監(jiān)測結(jié)果卻是三種結(jié)果，總有不合格的類型。去年11月自治區(qū)動物疫病控制中心監(jiān)測金鳳區(qū)的結(jié)果是O型口蹄疫和禽流感—8毒株抗體水平不合格，我們分析原因就是疫苗的因素，今年春季動物防疫我們建議規(guī)模養(yǎng)殖場對禽流感和口蹄疫三價聯(lián)苗采取間隔15d兩次免疫注射的方式，今年監(jiān)測的結(jié)果就是禽流感三種類型、牛羊O型口蹄疫全部合格，牛羊A型口蹄疫合格率是85%。

2 樣品因素

2.1 樣品的采集時機

動物在進行免疫接種后，要經(jīng)過一定的時間才能在體內(nèi)產(chǎn)生免疫抗體，并逐漸到達峰值，體內(nèi)產(chǎn)生抗體時間因所使用疫苗的種類不同而異，一般活疫苗產(chǎn)生抗體的時間早，而滅活疫苗產(chǎn)生抗體的時間較晚。所以一定要選擇好檢測樣品的采集時間，通常進行免疫抗體檢測的采樣時間為疫苗接種后28d至90d最合適，所檢測出的結(jié)果能夠判定動物的免疫效果。 今年銀川市金鳳區(qū)進行春季重大動物疫病抗體集中監(jiān)測行動，我站對轄區(qū)兩個奶牛場各采集20份血樣，當時一個奶牛場注射三價口蹄疫才19d，另一個才8d，監(jiān)測結(jié)果O型口蹄疫免疫抗體合格率分別是95%和90%，A型口蹄疫合格率分別是85%和60%。過了10d，自治區(qū)動物疫病控制中心在其中的一個奶牛場（免疫時間較長的）采集20份血樣，監(jiān)測結(jié)果O型、A型、亞洲1型合格率全部100%。另一種情況就是免疫時間較長，監(jiān)測結(jié)果合格率也較低，轄區(qū)有一個養(yǎng)殖6000只羊的規(guī)模場，去年自治區(qū)監(jiān)測時小反芻獸疫免疫抗體合格率是45%，羊三價口蹄疫中的O型合格率才是60%，A型和亞洲1型合格率是85%，反饋的結(jié)果是七月份注射的疫苗，采樣監(jiān)測時已經(jīng)11月份，今年春季金鳳區(qū)監(jiān)測該場時是4月28日采樣20份，監(jiān)測結(jié)果是小反芻免疫抗體合格率是100%，口蹄疫O型是55%、A型是60%，反饋結(jié)果是該場1月份間隔15天注射兩次口蹄疫三價疫苗，3月份間隔15d注射小反芻獸疫疫苗。所有我建議規(guī)模養(yǎng)殖場的免疫時間和我們集中免疫的時間要一致，最多不超過1個月，監(jiān)測時間應和免疫時間相互協(xié)調(diào)，最好在免疫抗體水平最高時。

2.2 樣品的采集方法

用于免疫抗體水平檢測的是樣品血清，因此血清的質(zhì)量直接影響到抗體水平的檢測結(jié)果，血液的采集方法、時間、血清的析出、血清的分離過程都是關(guān)系血清質(zhì)量的因素。因此，在采集血樣時，要注意時間特別是羊和雞，要空腹采樣，否則血清就成膠凍狀，導致采樣失敗，另外，一定要遵守操作規(guī)程，采血部位要嚴格消毒，防止污染，采血量要適當（一般為2～3 ml），要一次性采夠量，采血完成后，將采血器拉桿拉到底，留出血清析出空間，否則，影響血清的析出和質(zhì)量。

2.3 樣品的處置和保管

血液采集后處置不當會影響血清的析出和質(zhì)量，血清的處置和保管直接影響到抗體檢測的結(jié)果，所以必須做好樣品的保管和處置。一般用于抗體檢測的血液不加任何抗凝劑，用于保存血液和血清的塑料離心管一定要清潔、干燥、無污染，血清析出后要及時進行分裝，用吸管或注射器緩緩吸出，裝入準備好的離心管中保存。一般情況下，在5 d內(nèi)進行檢測試驗的血清可放置于4 ℃的冰箱內(nèi)保存，待檢超過5 d的，要置-20 ℃下冷凍保存，并盡量避免反復凍融。

2.4 樣品的分裝

樣品的分裝過程中，器械的污染、交叉使用均可影響到抗體檢測結(jié)果，所以，在樣品分裝過程中，所使用的吸管、注射器、離心管等器械一定要干燥、清潔，不能交叉重復使用，特別不能將不同的樣品混合成一份，也不能一式多樣。

3 實驗室因素

3.1 檢測器械

在實驗室進行抗體檢測的過程中，所使用檢測器械的質(zhì)量，器械的清洗、保管方法，儀器的準確性、靈敏性等都將影響到檢測結(jié)果的準確性，特別是不按照有關(guān)規(guī)定對各種儀器設(shè)備進行維護和校準，認為只要所用儀器不出故障就可正常使用，忽略了由于儀器出現(xiàn)偏差嚴重影響了實驗結(jié)果的準確性。所以，一定要保證檢測器械的質(zhì)量，每次試驗后要對所使用過的器械進行徹底清洗、消毒，嚴格按照規(guī)定的方法保管器械，定期對試驗儀器進行校準和測試，確保其準確性和靈敏度，從而保證檢測結(jié)果的準確性。

3.2 檢測試劑

做抗體檢測時所用的試劑雖然都是經(jīng)有關(guān)部門審核批準的生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)，但不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的試劑，其特異性和靈敏性存在差異，同一廠家不同批次的產(chǎn)品也有差別，試劑在運輸和保管中出現(xiàn)包裝損壞、泄漏、污染等均會影響到檢測結(jié)果。因此，應選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，并嚴格按照試劑的說明書進行保管和使用，堅決不能使用過期試劑。

3.3 檢測人員

實驗室所有檢測試驗都是通過檢驗人員的具體操作而完成的，檢驗人員的理論和技術(shù)操作水平是關(guān)系到檢測結(jié)果的最關(guān)鍵因素，個別檢驗員對試驗原理理解不透，在試驗過程中不能嚴格遵守操作規(guī)程，不能熟練掌握試驗器械和儀器的使用，出現(xiàn)加樣誤差、加樣器與吸頭不配套、重復使用吸頭等，導致加樣不準確，造成檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差、檢驗員對試驗結(jié)果判定不準確等現(xiàn)象，均可導致抗體水平的檢測結(jié)果不準確。所以，實驗室配備的人員要有相當?shù)膹氖卵鍖W檢測的工作資歷并經(jīng)過嚴格的培訓，每個工作人員都要認識到此項工作的特殊性、嚴肅性，樹立高度的責任感和高度負責的精神，要熟練掌握相關(guān)的技術(shù)原理和操作方法，特別是檢測的程序和規(guī)范，熟練掌握與實驗有關(guān)的儀器設(shè)備，要讓實驗人員認識到儀器的維護和校正的重要性，對所用儀器設(shè)備定期檢定校準和維護以保證每次試驗的準確性。

3.4 實驗室溫度

抗體檢測試驗的原理就是抗原抗體反應，而抗原抗體反應需要一定的時間和特定的反應溫度，在一些試驗中，由于抗原被包被在固相表面，抗原抗體反應只能在固相表面進行，遠離固相表面的物質(zhì)要依靠濃度差的改變緩慢地加入反應，而且這個反應要在特定的溫度下進行。一些實驗人員為求快出結(jié)果而使反應時間不夠和溫度不合適導致試驗出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。因此，在進行抗體檢測試驗時，實驗室溫度一般要保持在20℃～25 ℃，在操作時一定要使各步反應達到足夠的時間并保證其溫度條件，確保試驗結(jié)果的準確性。

4 小結(jié)

經(jīng)分析，影響動物免疫抗體水平檢測結(jié)果的因素主要有樣品的采集、處理、保存，檢測試劑的質(zhì)量，試驗儀器和器械的維護和保養(yǎng)，檢驗人員的素質(zhì)等因素。所以，在做動物免疫抗體水平檢測時，一定要做好樣品的采集處理和保存工作，保證樣品質(zhì)量；選擇優(yōu)良的試劑，并嚴格按照說明書進行操作；加強對實驗室設(shè)備和儀器的維護和保養(yǎng)；嚴格遵守試驗操作規(guī)程和要求，確保檢測結(jié)果的準確性。