胡 雷,鐘 飛,張彩霞,徐德璐,葛 鵬,劉艷菊,蘭天龍,周博宇,申秀萍,張宗鵬

(1. 天津藥物研究院新藥評(píng)價(jià)有限公司，天津 300301；2.天津藥物研究院有限公司，天津 300193)

專題研究

現(xiàn)代化中藥安全性評(píng)價(jià)和關(guān)鍵技術(shù)研究體系的建立與應(yīng)用

胡 雷1,鐘 飛1,張彩霞2,徐德璐1,葛 鵬1,劉艷菊1,蘭天龍1,周博宇1,申秀萍1,張宗鵬1

(1. 天津藥物研究院新藥評(píng)價(jià)有限公司，天津 300301；2.天津藥物研究院有限公司，天津 300193)

中藥引起的不良反應(yīng)事件時(shí)有發(fā)生，但是目前缺乏科學(xué)、客觀、規(guī)范的中藥安全性評(píng)價(jià)方法。在中藥臨床前評(píng)價(jià)的過程中，形成一套科學(xué)的、規(guī)范的、可行的現(xiàn)代中藥評(píng)價(jià)體系標(biāo)準(zhǔn)勢(shì)在必行。本項(xiàng)目建立了包括臨床前安全性評(píng)價(jià)用供試品質(zhì)量控制體系、現(xiàn)代化中藥及其制劑毒性評(píng)價(jià)體系、評(píng)價(jià)管理體系在內(nèi)的現(xiàn)代化中藥臨床前安全性評(píng)價(jià)體系，規(guī)范了中藥臨床前安全性評(píng)價(jià)的每個(gè)研究環(huán)節(jié)。無(wú)論從保障患者身體健康、增加臨床用藥的安全性，還是從豐富完善中醫(yī)藥學(xué)術(shù)、發(fā)展中醫(yī)藥學(xué)、促進(jìn)中醫(yī)藥與國(guó)際藥學(xué)相互接軌方面，都具有重要的指導(dǎo)意義和應(yīng)用價(jià)值。

安全性；臨床前評(píng)價(jià)；現(xiàn)代中藥

1 研究背景

中藥是我國(guó)人民防病治病和強(qiáng)身健體的主要武器，數(shù)千年來(lái)它對(duì)保障國(guó)人的健康和中華民族的繁衍昌盛發(fā)揮了巨大的作用[1]。中藥的認(rèn)識(shí)和應(yīng)用充分反映了我國(guó)自然資源及歷史、文化等方面的若干特點(diǎn)，其品種繁多，僅古籍記載就有3000種以上，發(fā)展至今已達(dá)12800余種[2]。現(xiàn)代許多疑難病的治療都用到了中藥并取得了較好的療效，例如用中藥相思子毒素治療各種癌癥，砒霜治療白血病，蜈蚣治療各種結(jié)核，蜂毒治療風(fēng)濕性疾病，水蛭治療血栓性疾病等，而且隨著研究的深入中藥在疑難病的治療前景越來(lái)越廣闊[3]。正因?yàn)橹兴庍@種無(wú)可替代的資源優(yōu)勢(shì)和療效優(yōu)勢(shì)，國(guó)外對(duì)中藥的應(yīng)用也日益增多。但是，在中藥廣泛應(yīng)用的同時(shí)，不良反應(yīng)事件也在增多，如比利時(shí)的腎毒性事件[4]、新加坡的黃連素事件[5]、日本的柴胡事件[6]及國(guó)內(nèi)發(fā)生的魚腥草事件[7]、刺五加事件[8]等。這些不良反應(yīng)事件的發(fā)生使中藥的安全性評(píng)價(jià)受到廣泛關(guān)注。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，中藥中毒類型大體有心臟毒、肝臟毒、 腎臟毒、神經(jīng)毒、過敏反應(yīng)等。導(dǎo)致中藥不良反應(yīng)發(fā)生的原因是多方面的，根本原因是缺乏對(duì)中藥毒副作用、不良反應(yīng)的正確認(rèn)識(shí)，缺乏科學(xué)、客觀、規(guī)范的中藥安全性評(píng)價(jià)方法[3]。因此無(wú)論從臨床保障患者身體健康、增加臨床用藥的安全性，還是從豐富完善中醫(yī)藥學(xué)術(shù)、發(fā)展中醫(yī)藥學(xué)、促進(jìn)中醫(yī)藥與國(guó)際藥學(xué)相互接軌方面來(lái)講，都有必要建立一套針對(duì)中藥毒性特點(diǎn)的評(píng)價(jià)體系。

中藥傳統(tǒng)的安全性評(píng)價(jià)往往來(lái)自于歷代中醫(yī)藥學(xué)家對(duì)生活的觀察、親身嘗試及臨床應(yīng)用的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)[9]。某味中藥的毒性只有在使用固定的劑量和用法時(shí)才能被發(fā)現(xiàn)。在日常使用中，又經(jīng)常用炮制的方法降低中藥的毒性，從而使人們?cè)谟盟幍倪^程中發(fā)生毒性反應(yīng)的概率大大降低，因此造成了普遍認(rèn)為中藥毒性較小的誤解[10,11]。但是，現(xiàn)代化的中藥新藥在制備方法、劑型、劑量、服法等方面與傳統(tǒng)中藥有很多不同之處，所以其產(chǎn)生的毒性不一定與人們已知的毒性相同[12]。

現(xiàn)代中藥及天然藥物組方復(fù)雜、生產(chǎn)質(zhì)量控制較難把控，尤其是中藥一類、部分二類已經(jīng)很難用傳統(tǒng)的中醫(yī)理論闡述其功能主治，其從化學(xué)本質(zhì)、毒性潛力上有別于傳統(tǒng)的中藥[13]。因此我們對(duì)中藥不良反應(yīng)的認(rèn)識(shí)決不能局限于傳統(tǒng)中醫(yī)藥文獻(xiàn)記載的那些有毒中藥上，必須結(jié)合現(xiàn)代科學(xué)理論和實(shí)驗(yàn)技術(shù)建立一套標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的現(xiàn)代化中藥的臨床前安全性評(píng)價(jià)體系，應(yīng)用安全、有效、質(zhì)量可控的受試藥物，全面、客觀、定量或半定量對(duì)觀察指標(biāo)進(jìn)行研究，判斷藥物能否進(jìn)入臨床研究，是否具有開發(fā)價(jià)值，為臨床用藥提供參考。

本項(xiàng)目建立的現(xiàn)代化中藥臨床前安全性評(píng)價(jià)體系是在中藥安全性評(píng)價(jià)過程中將傳統(tǒng)中醫(yī)中藥的優(yōu)勢(shì)特色與現(xiàn)代科學(xué)理論、科學(xué)技術(shù)相結(jié)合，建立了具有現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵的中藥安全性評(píng)價(jià)體系，為臨床合理用藥提供參考資料，也對(duì)深入探討藥物作用機(jī)制具有重要的指導(dǎo)意義。該體系的建立規(guī)范了中藥臨床前安全性評(píng)價(jià)的每個(gè)研究環(huán)節(jié)，無(wú)論從保障患者身體健康，增加臨床用藥的安全性，還是從豐富完善中醫(yī)藥學(xué)術(shù)，發(fā)展中醫(yī)藥學(xué)，促進(jìn)中醫(yī)藥與國(guó)際藥學(xué)相互接軌方面，都具有重要的指導(dǎo)意義和應(yīng)用價(jià)值。

2 研究目的

藥物的臨床前安全性評(píng)價(jià)是藥物研發(fā)過程中不可或缺的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，是判斷藥物是否具有開發(fā)價(jià)值、能否進(jìn)入臨床研究的關(guān)鍵步驟。在祖國(guó)醫(yī)藥學(xué)急速發(fā)展的今天，必須具有中藥學(xué)、毒理學(xué)、藥理學(xué)、病理學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)等知識(shí)，才能對(duì)現(xiàn)在中藥誘發(fā)的毒性反應(yīng)進(jìn)行綜合分析判斷，作出科學(xué)的評(píng)價(jià)。

本項(xiàng)目主要建立了國(guó)際先進(jìn)的完整、科學(xué)、規(guī)范的中藥及其不同劑型藥物臨床前安全性評(píng)價(jià)體系。(1)臨床前安全性評(píng)價(jià)用供試品質(zhì)量控制體系：對(duì)不同劑型的中藥供試品進(jìn)行規(guī)范化管理，嚴(yán)格控制毒理學(xué)研究用樣品的質(zhì)量，確保試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。(2)現(xiàn)代化中藥及其制劑毒性評(píng)價(jià)體系：針對(duì)中藥常見的不良反應(yīng)，該項(xiàng)目建立了心臟毒性評(píng)價(jià)體系、肝毒性評(píng)價(jià)體系、腎毒性評(píng)價(jià)體系、制劑安全性評(píng)價(jià)體系、行為學(xué)毒性評(píng)價(jià)體系，并對(duì)中藥的毒性成分在血漿和毒性靶器官內(nèi)的暴露情況進(jìn)行追蹤。(3)研究項(xiàng)目管理體系：本項(xiàng)目建立的GLP管理體系和AAALAC管理體系，通過規(guī)范化管理在保證動(dòng)物福利的同時(shí)提高了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)質(zhì)量，避免數(shù)據(jù)的偶發(fā)變動(dòng)，保證原始數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。

3 創(chuàng)新點(diǎn)

(1)首次建立了完整、科學(xué)的、基于 GLP 規(guī)范的現(xiàn)代中藥的臨床前安全性評(píng)價(jià)體系，包括：中藥供試品質(zhì)量控制體系、現(xiàn)代化中藥及其制劑毒性評(píng)價(jià)體系、評(píng)價(jià)管理體系。目前該體系已應(yīng)用于百余項(xiàng)藥物臨床前研究，為我國(guó)新藥研制做出了突出貢獻(xiàn)。

(2)該項(xiàng)目建立了完整、科學(xué)、國(guó)內(nèi)領(lǐng)先的臨床前安全性評(píng)價(jià)用供試品質(zhì)量控制體系。在新藥評(píng)價(jià)中對(duì)保證試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性方面發(fā)揮著重要作用。

(3)建立VAP(Vascular Access Port)模型犬[14-19]，實(shí)現(xiàn)清醒犬大動(dòng)脈血壓的建立。創(chuàng)新性將傳統(tǒng)的頸動(dòng)脈插管術(shù)與新興的生理遙測(cè)技術(shù)相結(jié)合[20]，在犬頸總動(dòng)脈植入動(dòng)脈壓力檢測(cè)器以及給動(dòng)物佩戴馬甲系統(tǒng)，使用無(wú)線生理遙測(cè)技術(shù)檢測(cè)動(dòng)物血壓、心電，將其應(yīng)用于中藥一類新藥的心血管安全性評(píng)價(jià)研究中。

(4)建立了行為學(xué)毒性評(píng)價(jià)體系。對(duì)非嚙齒類動(dòng)物(比格犬、食蟹猴)行為學(xué)觀察指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)一，對(duì)嚙齒類動(dòng)物(ICR小鼠)行為學(xué)評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行量化，建立了行為學(xué)毒性評(píng)價(jià)體系。應(yīng)用全自動(dòng)視頻追蹤分析技術(shù)研究小鼠運(yùn)動(dòng)路徑(移動(dòng)的距離和速度等)、路徑形狀(轉(zhuǎn)動(dòng)角度，頭部朝向)、個(gè)體行為(活動(dòng)度，伸展程度)、社會(huì)行為(相對(duì)距離，相對(duì)運(yùn)動(dòng)參數(shù))等行為學(xué)指標(biāo)[21-26]。

(5)確定以藥物代謝產(chǎn)物中的杠柳次苷為毒性標(biāo)記物，應(yīng)用LC-MS技術(shù)建立方法學(xué)，檢測(cè)杠柳次苷在比格犬不同臟器內(nèi)的暴露情況，通過檢測(cè)各臟器中的杠柳次苷暴露量，研究毒性標(biāo)記物杠柳次苷與毒性靶器官之間的關(guān)聯(lián)性，首次以此方法用于評(píng)價(jià)這類藥物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物主要臟器的毒性作用。

(6)建立了基于細(xì)胞、分子生物學(xué)技術(shù)水平的藥物早期心臟毒性預(yù)測(cè)模型。用胰蛋白酶和Ⅱ型膠原酶分步消化乳鼠心肌組織，改良大鼠原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)方法，采用RT-PCR、Western-Blot等技術(shù)建立藥物早期心臟毒性預(yù)測(cè)模型[27]。

4 討論

隨著中藥學(xué)的發(fā)展，越來(lái)越多的人認(rèn)識(shí)到在中藥臨床前評(píng)價(jià)的過程中，形成一套科學(xué)的、規(guī)范的、可行的現(xiàn)代中藥評(píng)價(jià)體系標(biāo)準(zhǔn)，可以有效減少系統(tǒng)誤差，提高毒性評(píng)價(jià)準(zhǔn)確性和一致性，成為判斷受試物是否安全的可靠依據(jù)。本項(xiàng)目建立的體系規(guī)范了中藥臨床前安全性評(píng)價(jià)的每個(gè)研究環(huán)節(jié)，為判斷藥物是否具有開發(fā)價(jià)值、能否進(jìn)行臨床研究提供依據(jù)，指導(dǎo)臨床合理用藥，保障患者人身安危，增加臨床用藥的安全性。

在本項(xiàng)目建立的體系中，對(duì)小鼠自主活動(dòng)的評(píng)價(jià)應(yīng)用了先進(jìn)的全自動(dòng)視頻追蹤分析技術(shù)，豐富了自主活動(dòng)的檢測(cè)指標(biāo)，為更加全面、深入研究藥物神經(jīng)毒性做出了突出貢獻(xiàn)；建立的早期心臟毒性預(yù)測(cè)模型在細(xì)胞和分子水平上揭示了藥物心臟毒性的作用機(jī)制；建立的VAP模型犬，能直接檢測(cè)清醒犬大動(dòng)脈的血壓，提高了數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，并將其用于心臟安全性的評(píng)價(jià)，填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)外研究的空白；建立了早期肝臟毒性預(yù)測(cè)模型和體內(nèi)肝毒性評(píng)價(jià)體系，豐富了肝毒性評(píng)價(jià)方法；腎毒性評(píng)價(jià)體系中檢測(cè)指標(biāo)全面、客觀，實(shí)現(xiàn)指標(biāo)定量或半定量；制劑安全性評(píng)價(jià)體系適用于多種劑型中藥的安全性評(píng)價(jià)。

利用所建立的評(píng)價(jià)體系，為全國(guó)部分科研院所、大專院校和國(guó)內(nèi)知名的制藥企業(yè)等多家機(jī)構(gòu)進(jìn)行了百余個(gè)中藥的臨床前評(píng)價(jià)，其中10余個(gè)中藥已經(jīng)上市，20余個(gè)中藥已經(jīng)獲得臨床批件，其余新藥正在申請(qǐng)臨床研究中。期間公開發(fā)表相關(guān)論文、會(huì)議摘要近20篇，非公開發(fā)表研究報(bào)告百余篇。該評(píng)價(jià)體系的應(yīng)用獲得的直接經(jīng)濟(jì)效益超過億元。

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The establishment and application of safety evaluation and key technology research system for modem Chinese herbal drug

HU Lei1, ZHONG Fei1, ZHANG Cai-xia2, XU De-lu1, GE Peng1, LIU Yan-ju1, LAN Tian-long1, ZHOU Bo-yu1, SHEN Xiu-ping1, ZHANG Zong-peng1

(1. Tianjin Institute of Pharmaceutical Research New Drug Evaluation Co.Ltd, Tianjin 300301,China;2. Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Co.Ltd, Tianjin 300193)

The adverse reactions caused by traditional Chinese medicine have occurred frequently, but there is a lack of scientific, objective and standardized methods for safety evaluation of traditional Chinese medicine. In the process of preclinical evaluation of traditional Chinese medicine, it is imperative to form a set of scientific, standardized and feasible evaluation system of modem Chinese herbal drug. We established the preclinical safety evaluation system of modem Chinese herbal drug including the quality control system of samples for the preclinical safety evaluation, the toxicity evaluation system of modem Chinese herbal drug and its preparation and the evaluation management system, and standardized each research link of preclinical evaluation of traditional Chinese medicine. Whether from protecting patients’ health and increasing the safety of clinical medication, or from enriching and improving traditional Chinese medicine science, developing traditional Chinese medicine and promoting mutual connection of traditional Chinese medicine and international medicine, it has important instructional significance and application value.

Safety;Preclinical evaluation;Modem Chinese herbal drug

胡雷，碩士生，副研究員，研究方向：臨床前藥物安全性評(píng)價(jià)。E-mail: hul@tjipr.com

R-33

A

1671-7856(2017) 05-0012-04

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.05.005

2017-01-04