陳 蓉 ， 李俊嫻 ， 周 薇 ， 陳 楠 ， 章小小 ， 鄧長林

(南京紅山森林動物園 ， 江蘇 南京 210028)

灰鶴真菌毒素中毒的診治

陳 蓉 ， 李俊嫻 ， 周 薇 ， 陳 楠 ， 章小小 ， 鄧長林

(南京紅山森林動物園 ， 江蘇 南京 210028)

真菌毒素是由產(chǎn)毒真菌在適宜條件下產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物，一直對人類、動物和植物具有巨大的潛在威脅，其毒性主要表現(xiàn)在免疫抑制、組織壞死、肝腎損傷、繁殖障礙、致癌、致畸等。2015年，南京某動物園3只灰鶴相繼死亡，剖檢均可見肝臟變性腫大、壞死，呈紅黃色；直腸段出血性壞死。檢查發(fā)現(xiàn)玉米飼料有霉變，經(jīng)臨床剖檢和實驗室診斷，初步診斷為真菌毒素中毒。

1 病情介紹

2016年，南京某動物園引進1群灰鶴亞成體，共8只，喂吃玉米。飼養(yǎng)1月后，1只灰鶴死亡，剖檢發(fā)現(xiàn)肝臟均出現(xiàn)不同程度的腫大、壞死，呈紅黃色，；直腸段出血性壞死；鏡檢發(fā)現(xiàn)球蟲。全群口服妥曲珠利和復方新諾明預防。4 d后，飼養(yǎng)員發(fā)現(xiàn)同群另1只灰鶴呼吸困難，經(jīng)搶救無效后死亡，剖檢癥狀與之前死亡的灰鶴相似，但鏡檢未見球蟲。此外，同群還有1只灰鶴精神萎靡。檢查玉米飼料時，發(fā)現(xiàn)超過20%的玉米存在胚芽處變黑的霉變現(xiàn)象。因此，全群停喂玉米飼料，并在顆粒料中添加霉美樂(生物性霉菌脫除劑)，飲水中添加腎腫解毒劑(碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碘化鉀、磷酸二氫鉀、亞硒酸鈉)，并抓捕喂藥5 d，每只每天口服1粒護肝片、100 mg維生素C、100 mg 維生素B1。籠舍用1∶3 000的硫酸銅進行消毒。對精神萎靡的灰鶴進行連續(xù)5 d 輸液治療，30 mL 5%葡萄糖+60萬IU青霉素鈉；40 mL 5%葡萄糖+2 mL維生素B1+2 mL維生素C+1支COA+2 mL ATP；30 mL 5%葡萄糖+3 mL甘草酸二銨注射液。治療中病情未見好轉(zhuǎn)，第5天出現(xiàn)呼吸困難后死亡，其剖檢癥狀相似。

2 剖檢癥狀

對3只灰鶴進行剖檢觀察，發(fā)現(xiàn)其癥狀基本相同。相同之處：肝臟均出現(xiàn)不同程度的腫大、壞死，呈紅黃色，質(zhì)地脆弱(見中插彩版圖1、2)； 脾臟腫大，腸道不同程度的增厚和腸黏膜出血。不同之處，僅第1只灰鶴腸道發(fā)現(xiàn)球蟲卵囊，其余兩只均未發(fā)現(xiàn)。

3 實驗室診斷

3.1 病理診斷 取肝臟于中性福爾馬林溶液中固定，進行常規(guī)脫水、透明、透蠟、石蠟包埋、切片、H.E.染色，光鏡觀察組織病理學變化。

病理觀察顯示：肝細胞發(fā)生輕度脂肪變性，竇狀隙和中央靜脈擴張，淤血伴炎性細胞浸潤，結(jié)締組織輕度增生，假小葉形成，小葉中心區(qū)肝細胞變性壞死(見中插彩版圖3、4)。

3.2 細菌和真菌培養(yǎng) 無菌取肝臟、脾臟、心臟，接種至血平板中，37 ℃培養(yǎng)24 h；并分別以點種法接種至沙堡弱葡萄糖瓊脂平板，26 ℃培養(yǎng)7 d，逐日觀察。結(jié)果均未見細菌和真菌生長。

取疑似霉變的玉米，將霉變部位以點種法分別接種沙堡弱葡萄糖瓊脂平板，26 ℃培養(yǎng)7 d，逐日觀察?？梢娕囵B(yǎng)基上出現(xiàn)兩種真菌，一種菌落中心呈赤紅色，氣生菌絲發(fā)達(見中插彩版圖5)，經(jīng)乳酸酚棉藍染色后，鏡檢可見大小分生孢子(見中插彩版圖7)，為串珠鐮刀菌(Fusarium.moniliform)；一種為灰白色菌落，呈放射狀生長(見中插彩版圖6)，菌絲分支分隔，分生孢子呈橢圓形(見中插彩版圖8)，鏈狀排列，為黃曲霉(Aspergillus.flavus)。

3.3 真菌毒素分析 將霉變玉米送至南京農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院中毒病實驗室用島津液相色譜儀進行黃曲霉毒素(Aflatoxin B1，AFTB1) 和嘔吐毒素(Vomitoxin)，又稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxyniralenol,DON)檢測。其檢測結(jié)果為AFTB1為42.4 μg/kg, DON為2.098 mg/kg。

3.4 動物試驗 取4只10日齡的雛鴨，分成2組，每組2只。雛鴨只喂玉米飼料，攻毒組每日每只喂500 g霉變玉米，對照組每日每只喂500 g正常玉米。兩組均為連喂15 d，未見雛鴨死亡。將4只雛鴨進行剖檢，發(fā)現(xiàn)攻毒組雛鴨肝臟均出現(xiàn)輕度的變性腫大，呈紅黃色，其余臟器未見異常。

4 討論

真菌毒素中毒是指動物采食被真菌(毒素)污染的飼料后，發(fā)生的一種急性或慢性中毒性疾病。1991年，肖讓等曾報道丹頂鶴霉玉米中毒，發(fā)病率達84%，死亡率為12.5%[1]。2010年，陳振輝等救護的3只灰鶴，因誤食霉變玉米發(fā)生黃曲霉毒素中毒，其中有2只發(fā)病，死亡1只[2]。鐮刀菌未定種其產(chǎn)生的真菌毒素曾造成圈養(yǎng)和野生鶴中毒死亡[3]。印度的蓑羽鶴和灰鶴也曾發(fā)生過花生有關(guān)的真菌毒素中毒(ICF,未發(fā)表數(shù)據(jù))[3]。1987年在Patuxent,顆粒料中出現(xiàn)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇，引起4%的鶴(15只)死亡和80%的鶴發(fā)病[3]。本文3只病死灰鶴，其中2只出現(xiàn)呼吸困難的臨床癥狀，1只未觀察到臨床癥狀。3只灰鶴的剖檢癥狀基本相似，肝臟病理切片均表現(xiàn)為變性、壞死，雖然臟器中未分離到真菌，但在其單一飼料中培養(yǎng)出兩種真菌，動物試驗結(jié)果與剖檢癥狀一致，可以確診為真菌毒素中毒。

黃曲霉可以產(chǎn)生12種毒素，其中AFTB1毒性最強，中毒癥狀主要是采食率下降、胃腸紊亂、貧血、黃疸，出現(xiàn)肝臟癌變甚至死亡[4]，病理變化主要為肝細胞變性壞死[5]。鐮刀菌屬產(chǎn)生的毒素種類很多，其中與動物和人類有關(guān)的主要是玉米赤霉烯酮、單端孢霉毒素、串珠鐮刀菌素和伏馬菌素等， DON為單端孢霉毒素B的一種[5]。DON可以導致多種臨床癥狀，如嘔吐、拒食及消化道黏膜潰瘍及發(fā)炎，出血性病變以及神經(jīng)癥狀[6]。真菌產(chǎn)生毒素的先決條件是真菌污染基質(zhì)并在其上生長繁殖[6]。在玉米飼料中分離到黃曲霉和串珠鐮刀菌，并根據(jù)臨床和剖檢癥狀對AFTB1和DON進行毒素分析。但是，真菌毒素中毒很難診斷，其重要原因是飼料及飼料原料中真菌毒素污染的一個顯著特點是多種真菌毒素共同存在，真菌毒素之間有協(xié)同作用、加性效應(yīng)和拮抗作用，真菌毒素間復雜的互作改變了臨床表現(xiàn)，產(chǎn)生不同于單一真菌毒素所引起的臨床癥狀[7]。因此，仍很難通過灰鶴的病史調(diào)查、臨床癥狀、病理變化和動物試驗等很難確定是哪一種或哪幾種真菌毒素引起。

我國的配合飼料中DON的允許量(GB13078.3-2007)規(guī)定家禽不超過5 mg/kg飼料[8]。而2001年修訂的《飼料衛(wèi)生標準》(GB13078-2001)則對飼料黃曲霉毒素有較為詳細的規(guī)定,如玉米、菜籽粕等飼料原料中AFTB1允許量不得超過50 μg/kg,肉用仔雞后期、生長雞、產(chǎn)蛋雞、肉用仔鴨前期、雛鴨配合飼料及濃縮飼料的AFTB1允許量不得超過10 μg/kg[9]。在真菌毒素中毒的病例中，毒素測定是較為準確的診斷方法。雖然該玉米飼料的兩項毒素指標均未超過國家飼料標準，但AFTB1的含量非常接近國家規(guī)定飼料原料的最大值，并超過肉用仔鴨前期、雛鴨配合飼料及濃縮飼料的標準。此外，灰鶴亞成體對AFTB1和DON的敏感度和致死量均是未知的，所以真菌毒素測定只能對輔助診斷的作用。各種真菌毒素對灰鶴的敏感性、致死量，還需進一步研究。

診斷野生動物的真菌毒素中毒具有一定難度。在懷疑真菌毒素中毒時，可以及時留取肝臟、胃內(nèi)容物等主要病變臟器置于-20 ℃，以便進行毒物分析。同時，預防其發(fā)生是最為有效的措施之一，尤其是對圈養(yǎng)野生動物。在飼養(yǎng)過程中，一定要嚴格把控飼料引進和儲藏，防止飼料發(fā)霉；定期監(jiān)測飼料中真菌毒素含量，對霉變飼料和真菌毒素含量接近國家最高標準的飼料及時剔除或去毒處理(考慮到為珍稀動物，建議直接棄之)。在治療該類疾病時，應(yīng)盡早發(fā)現(xiàn)及治療。在未確診時，對癥治療。在明確方向時，盡早更換發(fā)霉的飼料，在飼料中添加脫霉制劑，同時采用保肝護腎、止血等藥物，并注意體液的補充，必要時投服瀉劑，加速胃腸道毒物的排除。

志謝：感謝南京農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院中毒病實驗室張海彬老師和吳文達老師對本研究的幫助。

[1] 肖讓，許寬.丹頂鶴雛霉玉米中毒病例報告[J].野生動物，1994,6:36.

[2] 陳振輝,劉艷美,王麗,等.灰鶴曲霉菌中毒的診治[J].河南畜牧獸醫(yī)，2016,37(4)：49.

[3] 張金國.鶴類生物學及飼養(yǎng)管理與保護[M].北京：中國林業(yè)出版社，2003：169.

[4] 莊振宏，張峰，李燕云，等.黃曲霉毒素致癌機理的研究進展[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學，2011,50(8)：1 522-1 525.

[5] 陸承平.獸醫(yī)微生物學[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001：401-406.

[7] 王建華.家畜內(nèi)科學[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002：283-290.

[8] GB13078.3-2007,配合飼料中脫氧學府鐮刀菌烯醇的允許量[S].

[9] GB13078-2001,飼料衛(wèi)生標準[S].

S852.662

B

0529-6005(2017)10-0066-02

2017-03-22

國家自然科學基金項目(31160499)

陳蓉(1986-)，女，獸醫(yī)師，碩士，主要從事獸醫(yī)傳染病學研究和野生動物保護工作，E-mail：haze876@163.com