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獼猴桃潰瘍病防治藥劑室內(nèi)篩選及田間防效

崔永亮，鄭曉琴*，袁 敏，吳 帆，鄭小華，李利軍，莊啟國，王麗華，鐘潤(rùn)昕，羅 丹

(四川省自然資源科學(xué)研究院/中國-新西蘭獼猴桃聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室，四川成都 610015)

[目的]篩選能有效防治獼猴桃潰瘍病的化學(xué)藥劑。[方法]通過室內(nèi)抑菌試驗(yàn)篩選出抑菌效果較好的藥劑，并進(jìn)行毒力測(cè)定；通過注干試驗(yàn)探究所篩選藥劑對(duì)獼猴桃潰瘍病的田間防治效果。[結(jié)果]從13種藥劑中篩選出4種抑菌效果較好的藥劑，其中鹽酸土霉素抑菌效果最好，EC50為1 956 μg/mL；田間防治效果最佳的配方是1.000%鹽酸土霉素+ 0.005%吲哚乙酸+ 0.500% NH3NO3+ 0.500% KNO3+ 0.200% KH2PO4，獼猴桃潰瘍病病斑愈合率達(dá)72.3%。[結(jié)論]樹干鉆孔注射1.000%鹽酸土霉素防治獼猴桃潰瘍病效果較好。

獼猴桃潰瘍病；化學(xué)藥劑；篩選；防治效果

獼猴桃香味濃郁，風(fēng)味獨(dú)特，營(yíng)養(yǎng)豐富。我國是獼猴桃原產(chǎn)國，具有豐富的獼猴桃種質(zhì)資源，產(chǎn)業(yè)發(fā)展前景廣闊。1980年，獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病首次在美國加利福尼亞州和日本靜岡縣發(fā)生[1]，隨后迅速在全球蔓延，目前意大利、新西蘭和智利等獼猴桃主產(chǎn)國以及中國陜西、四川等主產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，成為制約獼猴桃產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的重要因素[2]。國內(nèi)外學(xué)者對(duì)獼猴桃潰瘍病的發(fā)生流行規(guī)律[3-4]、病原菌鑒定檢測(cè)及侵染機(jī)制[5-7]、防治方法措施[8-10]等進(jìn)行了大量研究，以減輕獼猴桃潰瘍病的發(fā)病程度、減緩病害流行擴(kuò)散，最終解決獼猴桃潰瘍病問題。

近幾年四川省獼猴桃潰瘍病發(fā)生面積逐年擴(kuò)大，患病果園平均發(fā)病率達(dá)23.15%，嚴(yán)重的達(dá)30%～40%，甚至出現(xiàn)毀園現(xiàn)象[11]。筆者進(jìn)行了獼猴桃潰瘍病防治藥劑室內(nèi)篩選和田間防效試驗(yàn)，以期為獼猴桃潰瘍病的防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌種。獼猴桃潰瘍病病原菌(PSA，Pseudomonassyringaepv.actinidae)由四川省自然資源科學(xué)研究院提供。

1.1.2 供試培養(yǎng)基。牛肉膏蛋白胨(NA)培養(yǎng)基[12]：牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，瓊脂7 g，酵母膏1 g，蔗糖10 g，氯化鈉 5 g，加水1 000 mL溶解后煮沸，調(diào)節(jié)pH至7.0～7.2，121 ℃濕熱滅菌30 min。

1.1.3 供試藥劑。選擇主要用于細(xì)菌性病害防治的農(nóng)藥及抗生素制劑，部分已應(yīng)用于獼猴桃潰瘍病的防治[13]，使用濃度為作物上推薦濃度，藥劑名稱及劑型見表1。

1.1.4 施藥工具。大樹輸液袋由四川國光農(nóng)化股份有限公司生產(chǎn)；TSR 1080手持式充電電鉆。

表1 防治藥劑的品種、劑型及使用濃度Table 1 The types of chemicals，dosage form and its using concentration

1.2 試驗(yàn)地概況 田間防效試驗(yàn)在四川都江堰胥家鎮(zhèn)獼猴桃產(chǎn)業(yè)園進(jìn)行。試驗(yàn)地海拔690 m，氣候類型屬中亞熱帶濕潤(rùn)氣候，年均氣溫15.2 ℃，年均降水量1 225.4 mm，年日照時(shí)數(shù) 1 024.4 h，平均相對(duì)濕度81%，年均無霜期280 d。供試品種為紅陽獼猴桃，樹齡6年，潰瘍病發(fā)病較嚴(yán)重。

1.3 方法

1.3.1 室內(nèi)藥劑篩選試驗(yàn)。

1.3.1.1 菌懸液的制備。取獼猴桃潰瘍病發(fā)病枝條，洗凈，乙醇消毒，取適量患病褐色組織，于少量無菌水中搗碎，靜置5 min。蘸取菌液在NA培養(yǎng)基上劃線，28 ℃培養(yǎng)48 h，挑取小圓形、稍隆起、白色稀湯狀且有光澤菌落，于NA培養(yǎng)基上培養(yǎng)。純化3 次后，挑取單一菌落于3.0 mL無菌水中，制成獼猴桃潰瘍病病原菌懸液。

1.3.1.2 藥劑的篩選。采用牛津杯法[14]。取等量獼猴桃潰瘍病病原菌懸液制備一批帶菌NA培養(yǎng)基，在帶菌培養(yǎng)基中放入牛津杯，分別向牛津杯中加入0.2 mL配制成推薦使用濃度的各藥劑溶液(懸浮液)，以無菌水為對(duì)照。培養(yǎng)基于4 ℃保存15 min以便藥劑滲透，再轉(zhuǎn)入28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。測(cè)定各處理抑菌圈大小，并結(jié)合透明度選出效果較好的藥劑。透明度標(biāo)準(zhǔn)：“+”表示抑菌圈僅與周圍菌群有顏色差別，不透明，邊界不明顯；“++” 表示能明顯看出抑菌圈與菌群的邊界，抑菌圈內(nèi)菌色很淡；“+++”表示抑菌圈的顏色基本接近NA培養(yǎng)基的透明原色；“++++”表示抑菌圈完全透明，完全抑制了圈內(nèi)病菌的生長(zhǎng)。采用以下公式計(jì)算菌落生長(zhǎng)抑制率[14]：

式中，菌落直徑為培養(yǎng)皿直徑與抑菌圈直徑之差。

1.3.1.3 藥劑毒力的測(cè)定。根據(jù)抑菌圈大小測(cè)算藥劑毒力。以藥劑濃度(mg/kg)的對(duì)數(shù)值為自變量，抑菌生長(zhǎng)率的幾率值為因變量，建立毒力回歸方程，求出各藥劑的EC50，比較藥劑毒力。

1.3.2 田間防效試驗(yàn)。采用注干方法進(jìn)行獼猴桃潰瘍病田間防治試驗(yàn)。選取室內(nèi)抑菌效果最好的藥劑，配制不同處理濃度，設(shè)8個(gè)處理(表2)，3次重復(fù)，每小區(qū)6株獼猴桃潰瘍病病株，隨機(jī)區(qū)組排列。試驗(yàn)前調(diào)查并標(biāo)記每株樹上所有病斑，以病斑表皮下產(chǎn)生青色愈傷組織且病斑以上枝條不枯死作為愈合病斑[13]，注干結(jié)束3個(gè)月后調(diào)查病斑愈合率，計(jì)算田間防治效果。

表2 田間試驗(yàn)用的配方藥劑及其他組分的比例

2 結(jié)果與分析

2.1 獼猴桃潰瘍病防治藥劑初篩結(jié)果 由表3可知，所有供試藥劑中，鹽酸土霉素、中生菌素、阿莫西林、青霉素鈉的抑菌圈直徑均在40 mm以上，抑制效果明顯。綜合考慮抑菌圈直徑和透明度，初步篩選出鹽酸土霉素、中生菌素進(jìn)行毒力試驗(yàn)。硫酸鏈霉素是目前防治潰瘍病普遍使用的藥劑，所以以農(nóng)用硫酸鏈霉素作為毒力測(cè)定的對(duì)照藥劑。

表3 不同藥劑對(duì)獼猴桃潰瘍病病原菌的抑制作用

2.2 藥劑對(duì)獼猴桃潰瘍病病原菌的毒力 由表4可知，硫酸鏈霉素的EC50為3 952 μg/mL，試驗(yàn)初步篩選出的2種藥劑鹽酸土霉素和中生菌素對(duì)獼猴桃潰瘍病病原菌的毒力都高于硫酸鏈霉素，且鹽酸土霉素毒力遠(yuǎn)高于中生菌素，其EC50分別為1 956 和3 240 μg/mL。

通過室內(nèi)初篩，從13種藥劑中選出4種對(duì)獼猴桃潰瘍病病原菌具有較強(qiáng)抑制作用的藥劑，其中鹽酸土霉素毒力最強(qiáng)、抑菌效果最好。因此，選用鹽酸土霉素配合適當(dāng)?shù)闹参锷L(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行田間防效試驗(yàn)。

2.3 藥劑對(duì)獼猴桃潰瘍病的田間防治效果 田間試驗(yàn)中，不同藥劑配方注干施用后，對(duì)獼猴桃潰瘍病均有一定的防治效果(表5)。不同濃度鹽酸土霉素對(duì)于獼猴桃潰瘍病的防效均高于硫酸鏈霉素，其中T4處理(2%鹽酸土霉素)防治效果最高，平均防效為79.66%，但2%以上的鹽酸土霉素處理會(huì)造成獼猴桃葉片萎蔫，新葉展開不足，這可能是由于藥劑濃度過高造成的藥害反應(yīng)。綜上所述，1%的鹽酸土霉素配合植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和營(yíng)養(yǎng)元素制成的注干劑對(duì)獼猴桃潰瘍病的防治效果最好，優(yōu)于目前普遍使用的藥劑硫酸鏈霉素。

表4 藥劑對(duì)獼猴桃潰瘍病病原菌的毒力

表5 不同藥劑配方對(duì)獼猴桃潰瘍病的防治效果

Table 5 The control effect of different chemicals formula against PSA in the field

處理編號(hào)TreatNo.病斑愈合率Spothealingrate∥%平均防效Averagecontroleffect∥%植株生長(zhǎng)情況GrowthsituationCK3.33——T159.0058.97正常 T263.7765.76正常 T372.3372.10正常 T478.0079.66葉片萎縮T574.3375.10葉片萎縮T676.6776.21葉片萎縮T740.0037.93正常

3 結(jié)論與討論

藥劑防治是目前防治獼猴桃潰瘍病的重要手段[9]。該研究結(jié)合室內(nèi)篩選和田間防治試驗(yàn)，篩選出1種對(duì)獼猴桃潰瘍病具有一定防效的藥劑——鹽酸土霉素。室內(nèi)篩選試驗(yàn)結(jié)果表明，鹽酸土霉素對(duì)獼猴桃潰瘍病病原菌的抑制效果較強(qiáng)，龍友華等[13]研究發(fā)現(xiàn)中生菌素在獼猴桃潰瘍病防治上具有一定效果，而鹽酸土霉素的抑菌效果和毒力均強(qiáng)于中生菌素。田間防治試驗(yàn)探究了適用于獼猴桃潰瘍病防治的鹽酸土霉素濃度，在不影響獼猴桃植株正常生長(zhǎng)的情況下，1%鹽酸土霉素的防效最強(qiáng)，達(dá)72.10%。

注干給藥的優(yōu)勢(shì)在于藥物活性成分能夠迅速、充分地與植株內(nèi)部的病菌接觸，不產(chǎn)生藥劑飄移，操作簡(jiǎn)易，生效快、效果好。目前，該施藥方法主要用于林業(yè)害蟲的防治，如唐光輝等[15]使用14%吡蟲啉·敵敵畏注干劑殺除柳樹上的光肩星天牛幼蟲及成蟲。該研究將注干給藥應(yīng)用于獼猴桃潰瘍病的防治，有效解決了藥物活性成分與獼猴桃潰瘍病病原接觸面小、接觸時(shí)間短、接觸濃度低的問題，為獼猴桃潰瘍病的防治提供了新途徑。

該研究由于條件限制，未能進(jìn)行全面的藥劑篩選，具有一定的局限性，需要進(jìn)一步加大藥劑篩選范圍，對(duì)配方進(jìn)行改良，為獼猴桃潰瘍病的防治提供更合理適宜的藥劑和方法。

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Indoor Screening and Filed Control Effect of Bactericides against Kiwifruit Canker

CUI Yong-liang , ZHENG Xiao-qin*, YUAN Min et al

(Sichuan Academy of Natural Resource and Sciences, China-New Zealand Kiwifruit Joint Laboratory, Chengdu, Sichuan 610015)

[Objective] The aim was to screen the chemical bactericides which control PSA (Pseudomonassyringaepv.actinidae) effectively. [Method] Indoor inhibition test was used in chemical bactericides screening, and the toxicity of bactericides screened were tested. The control efficacy in field was tested by injecting trunks trials. [Result] Four bactericides with better inhibitory effect were screened out from 13 chemicals, oxytetracycline hydrochloride soluble power was the best, EC50of which was 1 956 μg/mL. The formula with 1.000% oxytetracycline hydrochloride soluble power + 0.005% heteroauxin + 0.500% NH3NO3+ 0.500% KNO3+ 0.200% KH2PO4against PSA was the best, and the spot healing rate against kiwifruit canker was 72.3%. [Conclusion] The kiwifruit canker could be controlled effectively by trunk injecting 1.000% Oxytetracycline hydrochloride soluble power.

Kiwifruit canker; Chemical bactericides; Screen; Control effect

四川省省級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(2012年)；科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2013JZ0003)。

崔永亮(1981- )，男，河南獲嘉人，副研究員，從事園藝植物的病原鑒定、病害流行及防控研究。*通訊作者，副研究員，從事園藝植物的育種、栽培及病蟲害防控研究。

2016-11-08

S 436.634.1

A

0517-6611(2016)36-0177-02