劉瑜

摘 要：酶免分析儀廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、生物、衛(wèi)生等領(lǐng)域的實驗、檢測和分析過程，但目前并沒有相應(yīng)的規(guī)程或規(guī)范作為酶免分析儀的校準依據(jù)。本文對酶免分析儀的組成部分和工作原理進行了歸納和分析，依據(jù)現(xiàn)有的量值溯源方法和體系對酶免分析儀的校準和量值溯源進行了探討。

關(guān)鍵詞：酶免分析儀；校準方法；量值溯源

中圖分類號：R446 文獻標識碼：A

1.酶免分析儀組成結(jié)構(gòu)和工作原理

全自動酶免分析儀又稱全自動酶免分析系統(tǒng)和全自動酶免工作站，可以全自動完成酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試驗，包括稀釋、樣本分配、試劑分配、溫育、洗板、酶標判讀、結(jié)果打印等全步驟。該儀器廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、生物、衛(wèi)生等領(lǐng)域的實驗、檢測和分析過程，尤其是在醫(yī)療衛(wèi)生檢測行業(yè)中酶免分析儀更是必不可少的檢測儀器，在各種傳染病檢測、優(yōu)生優(yōu)育初篩檢測、糖尿病、腫瘤檢測等都有著廣泛的應(yīng)用。

酶免分析儀主要由酶標系統(tǒng)、溫育系統(tǒng)、移液系統(tǒng)和洗板系統(tǒng)組成。其中：移液系統(tǒng)負責(zé)定量向酶標板樣品杯中加入樣品、酶結(jié)合物或反應(yīng)底物；溫育系統(tǒng)負責(zé)控制反應(yīng)溫度，使抗原與抗體有效結(jié)合；酶標系統(tǒng)是酶免分析儀的核心部分，其原理是依據(jù)酶標記的免疫復(fù)合物與酶的相應(yīng)底物能夠產(chǎn)生顯色反應(yīng)，顯色程度與被檢測樣品中待測抗體或抗原的含量相關(guān)，根據(jù)顯色物吸光度值確定待測物質(zhì)含量，不同待測顯色物質(zhì)有其各自的特征吸收譜線，并遵守朗伯-比爾定律；洗板系統(tǒng)是酶免分析儀中的一個重要部件，用以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)及雜質(zhì)，樣品杯是否清洗干凈，是決定酶免分析儀檢定結(jié)果是否正確的關(guān)鍵因素之一。

2.酶免分析儀主要校準項目

根據(jù)酶免分析儀的工作原理和組成結(jié)構(gòu)，可以分別對酶標系統(tǒng)、溫育系統(tǒng)、移液系統(tǒng)和洗板系統(tǒng)進行校準和量值溯源以達到對整機校準的目的。因此本規(guī)范參考了JJG 861-2007《酶標分析儀檢定規(guī)程》的技術(shù)指標來作為酶免分析儀酶標系統(tǒng)部分的技術(shù)指標。酶免分析儀的孵育系統(tǒng)與培養(yǎng)箱的功能相似，且酶免分析儀廣泛地應(yīng)用于各種傳染病檢測、優(yōu)生優(yōu)育初篩檢測、糖尿病、腫瘤檢測等方面，因此本規(guī)范選取了比較常用的行業(yè)標準WS/T 223-2002《乙型肝炎表面抗原酶免分析儀檢驗方法》和JJF 1101-2003《環(huán)境試驗設(shè)備溫度、濕度校準規(guī)范》作為孵育系統(tǒng)技術(shù)指標的參考。酶免分析儀移液系統(tǒng)無論在使用的量程范圍上還是使用的精度上都符合JJG 646-2006《移液器檢定規(guī)程》的適用范圍，所以本規(guī)范參考JJG 646-2006《移液器檢定規(guī)程》來制定移液系統(tǒng)的技術(shù)指標。因此酶免分析儀的計量特性和技術(shù)指標見表1。

3.酶免分析儀的主要校準設(shè)備

分光光度計（波長示值誤差優(yōu)于1nm）；光譜中性濾光片：吸光度標稱值分別：0.2Abs、0.5Abs、1.0Abs、1.5Abs（不確定度≤0.01Abs）；分析天平（精度十萬分之一）；數(shù)字溫度計（最小分度不低于0.1℃）；蒸餾水。

4.酶免分析儀校準方法

4.1 波長示值誤差和波長重復(fù)性

將儀器特征波長濾光片放在分光光度計的樣品槽里，利用分光光度計的掃描功能，測出峰值，測量3次取平均值與理論值之差為儀器波長示值誤差△λ，取3次測量的極差為波長重復(fù)性δλ。

4.2 吸光度示值誤差

依次選用405nm、450nm、490nm、630nm或儀器特有的波長，對吸光度分別為0.2、0.5、1.0、1.5的標準濾光片以空氣為參比進行測量，連續(xù)測量3次，記錄儀器示值并計算其平均值。吸光度示值誤差△A按公式（3）計算：

4.3 吸光度通道差異

在450nm波長下，將吸光度為1.0的標準濾光片放在不同通道下以空氣為參比進行測量，并記錄吸光度示值。通道差異δA 按公式（4）計算：

4.5 孵育系統(tǒng)溫度波動和溫場均勻性

對中部測溫點連續(xù)測量30分鐘，記錄溫度示值最大值T中部max和最小值T中部min，孵育系統(tǒng)溫度波動σT按公式（6）進行計算：

4.6 移液容量相對誤差和重復(fù)性

保證室內(nèi)環(huán)境有良好的控溫條件，將酶免分析儀和純水在恒溫條件下放置一段時間，使其溫度與室溫相同。取干凈的樣品杯放在電子天平上，待天平示值穩(wěn)定后，按下歸零鍵使天平復(fù)零。設(shè)定好移液器移液的體積，用酶免分析儀的移液器將純水移入樣品杯中。記錄純水的溫度，將樣品杯放在電子天平上，記錄此時天平顯示的數(shù)值，重復(fù)測量6次，記錄每一次的重量值mi。按照公式（8）算出20度時的實際移液容量V20：

4.7 洗板系統(tǒng)最大殘留量

將洗滌液全部換為純水，將溫度計插入純水中，待溫度計示值穩(wěn)定5min后測定純水的溫度。選1個干凈的樣品杯放入天平中稱量，得到空杯質(zhì)量M0。把該樣品杯放入空的酶標板中，開啟洗板系統(tǒng)用純水對樣品杯進行清洗。清洗完后，將樣品杯放入電子天平中進行稱量，得到清洗后的樣品杯質(zhì)量M1，則清洗后每杯的殘留量△M按

結(jié)語

本文所述的校準方法通過對酶免分析儀各個組成部分分別進行校準和量值溯源，能夠比較全面地對儀器的整體性能進行評估和分析，更能比較好地完成酶免分析儀量值的溯源，使酶免分析儀測得的數(shù)據(jù)更加準確可靠。

參考文獻

[1] JJG 861-2007，酶標分析儀檢定規(guī)程[S].