●馬兆泉陳濤

頭孢吡肟對陰溝腸桿菌體外抗菌活性的分析

●馬兆泉1陳濤2

目的：了解頭孢吡肟對陰溝腸桿菌的體外抗菌活性，分析了陰溝腸桿菌對頭孢吡肟的耐藥情況．方法：使用5種底物的“雙紙片協(xié)同試驗(yàn)”對30株陰溝腸桿菌進(jìn)行超廣譜B-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)檢測。體外藥敏試驗(yàn)采用K-B法，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理使用WHONET-5.5軟件。結(jié)果：19株非ESBLs產(chǎn)酶細(xì)菌對頭孢吡肟的耐藥率為0%；由于ESBLs的作用，本組產(chǎn)ESBLs陰溝腸桿菌11例，對頭孢吡肟的耐藥率為36.6%．結(jié)論：ESBLs是造成陰溝腸桿菌對頭孢吡肟耐藥的主要原因，該藥在治療陰溝腸桿菌感染時應(yīng)以耐藥機(jī)制檢測結(jié)果為依據(jù)．

頭孢吡肟；陰溝腸桿菌；體外抗菌活性；AmpC酶

近年來隨著三代頭孢菌素的廣泛應(yīng)用，其誘導(dǎo)作用使得產(chǎn)B-內(nèi)酰胺酶如ESBL及AmpC酶的革蘭陰性桿菌日益增加，細(xì)菌的耐藥性也相應(yīng)增加，三代頭孢菌素臨床治療效果明顯降低。頭孢吡肟屬第四代頭孢菌素，它對革蘭陰性菌比大多數(shù)第三代頭孢菌素具有更廣的抗菌譜和更強(qiáng)的抗菌活性。陰溝腸桿菌是院內(nèi)感染常見的病原菌之一，耐藥機(jī)制復(fù)雜，對B內(nèi)酰胺類抗生素呈嚴(yán)重的交叉耐藥，給臨床治療該菌感染帶來極大的困難[1]。第四代頭孢菌素，頭孢吡肟在高耐藥性細(xì)菌感染中的治療效果受到了臨床的普遍關(guān)注。本研究運(yùn)用細(xì)菌耐藥機(jī)制檢測和抗生素體外藥敏分析的方法，對頭孢吡肟的體外抗菌活性進(jìn)行了分析比較。

1 材料和方法

1.1 菌株來源

菌株由本院檢驗(yàn)科細(xì)菌室2014年1月～2016年10月間臨床分離的30株陰溝腸桿菌。

1.2 抗生素紙片和培養(yǎng)基

藥敏紙片∶頭孢吡肟(FEP)、氨芐西林(AM)、慶大霉素(GM)、頭孢唑啉(CZ)、阿莫西林／克拉維酸(AMC/CLA)、頭孢噻肟(CTX)、頭孢曲松(CRO)、頭孢他啶(CAZ)、氨曲南(ATM)、阿米卡星(AK)和亞胺培南(IPM)等11種。

1.3 培養(yǎng)基

M-H瓊脂購自生物·梅里埃公司．在每只內(nèi)徑為8.5cm的平皿中定量傾注M-H瓊脂23ml，以確保平皿中瓊脂厚度為4 mm。

1.4 質(zhì)控菌株

大腸埃希苗ATCC 25922、ATCC 35218，肺炎克雷伯菌ATCC 700603購自中國藥品生物制品檢定所。質(zhì)控結(jié)果均符合NCCLS規(guī)定的要求。

2 方法

超廣譜B內(nèi)酰胺酶(ESBLs)檢測采用文獻(xiàn)報道的以AMC紙片為中心，CAZ、CTX、CRO、ATM和FEP為底物的雙紙片協(xié)同試驗(yàn)(DDST)。紙片中心距離采用20 mm，在因抗生素的協(xié)同作用．5種底物的抑菌環(huán)出現(xiàn)干擾而影響結(jié)果判斷時，調(diào)整距離為25 mm。本次實(shí)驗(yàn)以ATCC 25922大腸埃希菌、ATCC 700603肺炎克雷伯菌為ESBLs檢測的陰、陽性對照。

3 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理使用WHONET-5.5軟件。結(jié)果 19株非ESBLs產(chǎn)酶細(xì)菌對頭孢吡肟的耐藥率為0%；由于ESBLs的作用，本組產(chǎn)ESBLs陰溝腸桿菌11例，對頭孢吡肟的耐藥率為36.6%．

4 討論

隨著三代頭孢菌素的廣泛使用以及三代頭孢菌素對革蘭陰性桿菌產(chǎn)AmpC酶及ESBLs具有強(qiáng)烈的誘導(dǎo)和篩選作用，使其治療效果明顯降低。陰溝腸桿菌是院內(nèi)感染的重要病原菌之一，其復(fù)雜的耐藥機(jī)制及其對B內(nèi)酰胺類抗生素嚴(yán)重的交叉耐藥給臨床感染的治療帶來很大的困難。目前認(rèn)為,革蘭陰性桿菌對第三代頭孢菌素耐藥的原因主要是細(xì)菌產(chǎn)生質(zhì)粒介導(dǎo)的超廣譜酶(ESBL),如陰溝腸桿菌,弗勞地枸櫞酸桿菌等產(chǎn)生染色體介導(dǎo)的AmpC酶,滅活第三代頭孢菌素而引起耐藥,陰溝腸桿菌在β內(nèi)酰胺抗生素誘導(dǎo)劑不存在時,只產(chǎn)少量的AmpC酶,而在β內(nèi)酰胺抗生素誘導(dǎo)劑存在時,則產(chǎn)生高水平的AmpC酶。近年研究表明,革蘭陰性桿菌不僅產(chǎn)生染色體介導(dǎo)的AmpC酶,而且還產(chǎn)生質(zhì)粒介導(dǎo)的AmpC酶.ESBLs的產(chǎn)生在很大程度上加劇了陰溝腸桿菌的嚴(yán)重耐藥性，實(shí)驗(yàn)研究提示FEP仍有被ESBLs水解的可能；在本次實(shí)驗(yàn)調(diào)查中，陰溝腸桿菌ESBLs產(chǎn)酶株也表現(xiàn)出對FEP的水解能力。參照NCCLS的有關(guān)規(guī)定，本研究中11株產(chǎn)ESBLs陰溝腸桿菌對FEP的耐藥率為36.6%。ESBLs是影響本地區(qū)頭孢吡肟對陰溝腸桿菌抗菌活性的主要原因。細(xì)茵的耐藥性問題是可以得到控制的，控制的關(guān)鍵在于合理、有效地使用抗菌藥物。而臨床微生物學(xué)監(jiān)測資料在抗菌藥物的合理運(yùn)用中有非常重要的參考價值。盡管與本地區(qū)常用的其他頭孢菌素及氮曲南相比，F(xiàn)EP表現(xiàn)出更好的抗菌活性和對酶的穩(wěn)定性，但其臨床治療效果同樣會受到細(xì)菌耐藥性的影響。因此同所有的抗菌藥物一樣，F(xiàn)EP的使用，特別是在難治性感染中的運(yùn)用應(yīng)以實(shí)驗(yàn)室檢查資料為依據(jù)，對于陰溝腸桿菌ESBLs產(chǎn)酶株還應(yīng)參照產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌治療原則。

頭孢吡肟在頭孢烯的3位上有一個季銨化的N-甲基吡咯啶基，可形成兩性離子，容易通過革蘭陰性細(xì)菌外層膜孔而起抗菌作用。它分子較小能夠很快穿過革蘭陰性桿菌的細(xì)胞膜，在細(xì)胞膜和壁之間短時間達(dá)到一定濃度發(fā)揮藥效；它與青霉素結(jié)合蛋白的親和力較高而與B-內(nèi)酰胺酶的親和力降低，特別是對染色體介導(dǎo)的或質(zhì)粒介導(dǎo)的Bush -J型B-內(nèi)酰胺酶，即AmpC酶具有較高的穩(wěn)定性.[2].FEP為第四代注射用頭孢菌素。與常用的三代頭孢菌素相比，具有與B內(nèi)酰胺酶的親和力更低，對某些染色體介導(dǎo)B內(nèi)酰胺酶更穩(wěn)定，對細(xì)菌細(xì)胞膜的穿透力更強(qiáng)等特點(diǎn)。由于具有諸多的優(yōu)點(diǎn)，從本文結(jié)果可知，頭孢吡肟對革蘭陰性桿菌的抗菌活性高于三代頭孢菌素，特別是對產(chǎn)AmpC酶的細(xì)菌，在排除ESBLs菌嚴(yán)重感染的情況下對臨床治療和控制醫(yī)院感染方面具有良好的效果。

（作者單位：1甘肅省嘉峪關(guān)市中醫(yī)醫(yī)院；2甘肅省康復(fù)中心醫(yī)院）

[1]摩梅，陰溝腸桿菌對B-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的機(jī)制．國外醫(yī)學(xué)微生物學(xué)分冊．1997，20(3):21-23

[2]熊薇，張文池，陳如，等．頭孢類抗生素對臨床常見革蘭陰性桿菌體外抗菌活性的比較研究[J]．中華醫(yī)院感染雜志，2001；11(4):251-253

陳濤