楊旭紅

（農業(yè)部科技發(fā)展中心，北京 100122）

荷蘭馬蹄蓮品種DUS測試技術

楊旭紅

（農業(yè)部科技發(fā)展中心，北京 100122）

主要討論了荷蘭馬蹄蓮品種特異性、一致性和穩(wěn)定性（簡稱DUS）測試技術，提出學習和借鑒荷蘭測試技術和經驗是必要的，有助于提高我國DUS測試水平和能力，更好地為品種管理提供技術支撐。

馬蹄蓮品種；育種；DUS測試；品種管理

馬蹄蓮屬（Zantedeschia Spreng.）為農業(yè)部2016年4月發(fā)布的第十批保護名錄之一，在植物分類學上屬于天南星科，包括7個種2個亞種，依據(jù)其生活習性，可分為常綠白花馬蹄蓮和落葉彩色馬蹄蓮?；ㄆ趶耐矶酵泶?，因其佛焰苞大，色彩艷麗、富貴動人，葉形獨特并帶有白色斑點或條紋，作配葉的觀賞價值較高，是花卉市場上較為受歡迎的鮮花種類之一，被譽為“二十一世紀球根花卉之星”[1]。

荷蘭是全球花卉產業(yè)發(fā)達國家，也是國際植物新品種保護聯(lián)盟（以下簡稱UPOV）創(chuàng)始國之一，1968年加入UPOV，在蔬菜和觀賞植物品種特異性（Distinctness）、一致性（Uniformity）和穩(wěn)定性（Stability）（以下簡稱DUS）測試技術方面處于世界領先地位。荷蘭花卉檢測總署（Naktuinbouw）是荷蘭植物品種DUS測試機構，其觀賞植物和果樹DUS測試組負責馬蹄蓮品種DUS測試。從1990年開始，接受第一個馬蹄蓮品種的測試，截止到2015年7月，包括歐盟品種保護辦公室（簡稱CPVO）在內的測試品種達375個。有的測試人員從事品種DUS測試二三十年，具有豐富的馬蹄蓮品種測試經驗。因此，學習和借鑒荷蘭馬蹄蓮品種DUS測試技術，可以為我國馬蹄蓮品種權申請的授權和登記提供技術依據(jù)，有助于提高我國馬蹄蓮品種育種水平和花卉產業(yè)的國際競爭力。

1 馬蹄蓮品種國內外育種現(xiàn)狀

馬蹄蓮品種育種主要是通過雜交，選擇符合目標性狀的植株進行組織培養(yǎng)，組培苗一般經過2代及以上田間種植后，選擇優(yōu)良塊莖，再連續(xù)多次擴繁，形成可開花塊莖，才上市銷售或者生產盆花和鮮切花銷售，所以，培育一個馬蹄蓮新品種大約需要16年。馬蹄蓮已注冊的商業(yè)品種多達150多個，生產常用品種60個左右，主要由美國、新西蘭和荷蘭專業(yè)公司和專門研究機構培育與開發(fā)。

自20世紀80年代以來，我國彩色馬蹄蓮品種的引種與栽培面積呈逐年上升趨勢，但一直沒有形成規(guī)模，主要原因是由于種球全部依賴進口、價格昂貴、栽培技術沒有得到普及。此外，馬蹄蓮屬列入農業(yè)植物品種保護名錄較晚，國內多家單位多次想引種國外新培育的馬蹄蓮品種，如Red sox等花色鮮艷的品種，均未獲得成功；而國內生產品種數(shù)量不多，而且多是國際上淘汰或不流行的品種，制約了彩色馬蹄蓮產業(yè)的發(fā)展。近年來，江蘇省中國科學院植物研究所、上海市農業(yè)科學院和云南省農業(yè)科學院花卉研究所等科研單位開展彩色馬蹄蓮育種，并有新品種推出，云南省馬蹄蓮國產化種球生產已具備一定規(guī)模，所產種球已進入國際市場[2]。馬蹄蓮屬已列入品種保護名錄，將調動國內育種家的積極性，促進馬蹄蓮產業(yè)健康發(fā)展。

2 荷蘭馬蹄蓮品種DUS測試

2.1 DUS測試指南和校正手冊 測試指南是進行植物品種DUS測試的技術準則和標準。UPOV和CPVO有關馬蹄蓮品種DUS測試指南、協(xié)定是荷蘭馬蹄蓮品種DUS測試的技術標準。UPOV于2001年就發(fā)布了《馬蹄蓮品種DUS測試指南（TG/177/3）》，CPVO在此基礎上于2003年發(fā)布了《馬蹄蓮品種 DUS測試協(xié)定（CPVO-TP/177/1）》，該協(xié)定將UPOV測試指南的適用范圍由無性繁殖品種擴大到有性繁殖品種，增加品種庫維護、栽培環(huán)境條件、DUS測試和測試報告編制等要求，詳細規(guī)定繁殖材料提交要求、歐盟測試性狀表和技術問卷模版。技術問卷由申請人填寫，以幫助測試機構選擇用于試驗的近似品種和進行DUS測試。除此之外，依據(jù)測試指南和測試經驗，荷蘭制訂了《馬蹄蓮品種DUS測試校正手冊》，相當于我國植物品種DUS測試操作手冊。由于測試條件、環(huán)境、氣候等差異，同一品種在不同測試年份間測試數(shù)據(jù)會出現(xiàn)變化，利用校正手冊，可以對一些測量的數(shù)據(jù)進行修正，使其對品種DUS的判定更加客觀和科學。

2.2 繁殖材料要求 繁殖材料是DUS測試的基礎。荷蘭要求申請人提交馬蹄蓮品種繁殖材料時間是每年3月1-31日，送達時間應當避開節(jié)假日。繁殖材料提交數(shù)量與UPOV測試指南略有不同，UPOV測試指南只要求提交無性繁殖品種的繁殖材料，每個品種20個塊莖或20株幼苗，每個塊莖圍徑15～18cm[3]；荷蘭對于無性繁殖品種要求提交30個塊莖，每個塊莖圍徑15～18cm，對于有性繁殖品種還需要提交一年生100個塊莖和500粒種子[4]。

對于按時提交繁殖材料且符合要求的品種，當年安排測試；不符合要求的品種，暫保存在冷庫中，通知申請人半個月內取回，不取回的就地銷毀；超過期限未提交繁殖材料的，只能等待下一年測試。

2.3 馬蹄蓮品種DUS測試方法 馬蹄蓮品種測試是以UPOV測試指南為基礎，根據(jù)測試指南規(guī)定，一般測試一個生長周期，如果不能確定特異性和一致性，還應當測試第2個生長周期。由于馬蹄蓮品種申請量逐年增加，現(xiàn)有溫室已經不能滿足測試需要。為能夠測試更多品種，荷蘭目前做法是將一個品種的繁殖材料一分為二，分別在溫室與露地種植，溫室種植的用于性狀觀測，露地種植的僅用于一致性觀測。

2.3.1 特異性判定 通過測量和計數(shù)的性狀觀測應當取10個植株或10個植株部分樣本。待測申請品種與已知的最近似品種相比，至少有一個性狀與近似品種具有明顯的差異時，判定待測品種具備特異性。為此，荷蘭建立了馬蹄蓮品種活體庫、品種描述庫和圖像數(shù)據(jù)庫，通過數(shù)據(jù)庫和專家研討等方式篩選合適的近似品種，進行比較試驗。建立專業(yè)攝影室，由專業(yè)攝影師負責拍攝測試品種性狀照片。測試人員主要根據(jù)校正手冊，將測試數(shù)據(jù)轉換成測試指南中性狀對應的代碼，并與圖像數(shù)據(jù)庫中篩出的最近似品種進行比較，確定測試品種是否具備特異性。

2.3.2 一致性判定 對于無性繁殖品種一致性判定，采用1%的群體標準和95%的接受概率，當樣本大小為20株時，最多允許的異型株數(shù)為1株。

對于有性繁殖品種一致性判定，測試指南未作規(guī)定，荷蘭要求申請人提交100個塊莖和500粒種子，再根據(jù)UPOV TGP10文件一致性審查規(guī)定的測試原則進行判定。

2.3.3 穩(wěn)定性判定 如果待測品種具備一致性，判定其具備穩(wěn)定性。

測試完成后，對測試結果進行整理與分析，編制完成DUS測試報告。如果是CPVO的測試任務，測試員應在規(guī)定時間內向CPVO提交測試報告，否則將受到CPVO罰款的處罰。

3 結論

3.1 有性繁殖馬蹄蓮品種一致性判定方法提供了可借鑒的經驗 目前，我國石竹屬品種DUS測試農業(yè)行業(yè)標準和國家標準僅適用于無性繁殖品種，在沒有有性繁殖品種測試標準情況下，如何對有性繁殖石竹屬品種的一致性進行判定是個問題。荷蘭根據(jù)UPOV一致性審查原則對有性繁殖馬蹄蓮品種進行一致性判定的做法，為我國有性繁殖石竹屬品種DUS測試提供了借鑒。

3.2 形態(tài)特征仍是判定品種DUS的主要方法 與田間種植試驗相比，DNA分子鑒定技術具有快速、不受空間限制、費用低的特點，但是由于其還處于研究階段，不能完全取代DUS田間試驗。荷蘭在觀賞植物測試中只是采用形態(tài)特征進行品種特異性判定，也沒有觀賞植物品種DNA鑒定標準，但在馬鈴薯測試中綜合應用DUS和DNA的方法測試，將DNA用于近似品種篩選、品種侵權鑒定、派生品種鑒定等方面。所以，形態(tài)特征仍是當前判定品種DUS的主要方法。

3.3 荷蘭DUS測試設施設備先進 荷蘭許多觀賞植物品種是在現(xiàn)代化智能溫室可控條件下進行DUS測試的。與之相比，我國農業(yè)植物新品種測試分中心由于條件限制，本應在可控條件下測試的花卉、蔬菜等品種，卻只能在塑料大棚或露地栽培，一是滿足不了有的植物品種的生長條件，測試數(shù)據(jù)的可靠性受影響;二是易遭受自然災害，完成不了測試。因此，對于我國新建農業(yè)DUS測試分中心應當做好規(guī)劃，提前做好功能定位，高標準配置設施設備，建成國際一流的DUS測試分中心，滿足植物品種DUS測試的需要。

3.4 荷蘭育種家品種保護意識強，花卉產業(yè)規(guī)模大 荷蘭育種家十分重視植物品種保護，而且熟悉UPOV等國際規(guī)則，能夠獨立進行DUS測試。由于培育一個馬蹄蓮新品種周期比較長，因此，在新品種上市之前，育種家首先要申請品種保護，而且只銷售到可以提供品種保護的國家。例如，荷蘭桑德公司（Sande B.V.）是一家專門從事馬蹄蓮育種的公司，所培育的馬蹄蓮品種大多申請了美國和歐盟的品種權。在申請品種保護前，首先按照測試指南對候選品種進行性狀觀測和描述，對其DUS進行評價；在提交用于DUS測試的繁殖材料時，十分注重挑選大小一致的塊莖，避免不具備DUS申請被駁回。

荷蘭是全球園藝作物生產和出口大國，植物品種保護制度發(fā)揮了巨大作用，其品種權申請與授權量在歐盟和全球范圍內均居第1位，也是在我國品種權申請量最多的國家[5]。我國2016年實施的《中華人民共和國種子法》將DUS作為植物品種保護、品種審定和品種登記的必備條件，DUS測試植物屬種和品種的數(shù)量將迅速增加，因此，我國加強與UPOV及其成員如荷蘭、德國、法國和日本等國在DUS測試技術領域的合作與交流，吸收和借鑒國外的先進經驗，提高我國植物品種DUS測試技術水平和能力，更好發(fā)揮DUS測試在植物品種管理中的技術支撐作用。

[1] 楊柳燕．馬蹄蓮屬（Zantedeschia）品種指紋圖譜及生殖生物學研究[D]．南京：南京林業(yè)大學，2013：1-5

[2] 周滌，吳麗芳．馬蹄蓮研究進展 [J]．中國農學通報，2006，22（9）：284-290

[3] UPOV．Guidelines for the conduct of tests for distinctness，uniformity and stability，Zantedeschia（Zantedeschia Spreng．）[EB/OL]．（2001-04-04）．http ：//www．upov．int/edocs/tgdocs/en/tg177．pdf

[4] European Union Community Plant Variety Office．Protocol for distinctness，uniformity and stability tests Zantedeschia Spreng．Zantedeschia[EB/OL]．（2003-03-27）．http ：//www．cpvo．europa．eu/documents/TP/ornementales/TP_177_ZANTEDESCHIA．pdf

[5] 張新明，楊坤，周云龍．荷蘭植物新品種保護制度的成功經驗及對中國的啟示 [J]．世界農業(yè)，2011（5）：51-54

2017-10-09）