趙蘊(yùn)偉 肖建 鮑文華 李樹民 李爽 張智勇

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·呼吸病研究·

支氣管哮喘患者血清脂氧素A4水平與肺功能相關(guān)性分析

趙蘊(yùn)偉 肖建 鮑文華 李樹民 李爽 張智勇

目的 通過檢測(cè)不同嚴(yán)重程度支氣管哮喘患者及正常對(duì)照組之間血清脂氧素A4(LXA4)和肺功能的水平，探討支氣管哮喘急性發(fā)作期患者血LXA4與肺功能之間的關(guān)系，以期進(jìn)一步闡明血清脂氧素在支氣管哮喘患者中診療的意義。方法 選擇酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)對(duì)45例不同程度支氣管哮喘患者組與正常對(duì)照組25例的血清LXA4水平進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)收集哮喘患者的肺功能指標(biāo)，分析血清LXA4與肺功能的相關(guān)性。結(jié)果 (1)不同嚴(yán)重程度的哮喘急性發(fā)作組血清LXA4水平高于對(duì)照組(P<0.01)；中、重度組血清LXA4水平亦高于輕度組(P<0.01)；而重度組血清LXA4水平[(271.22±26.99)]ng/L卻顯著低于中度組[(302.4±31.18)]ng/L(P<0.01)；(2)支氣管哮喘患者急性發(fā)作期各亞組血清LXA4水平隨FEV1占預(yù)計(jì)值的百分比(FEV1%pred)的降低而升高，呈負(fù)相關(guān)性(r=0.-314，P<0.01)。結(jié)論 支氣管哮喘急性發(fā)作期各亞組血清脂氧素A4水平均顯著高于對(duì)照組，且與肺功能呈負(fù)相關(guān) ，提示脂氧素作為天然的白三烯拮抗物質(zhì)可能參與支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制。

支氣管哮喘是一種涉及多個(gè)哮喘易感基因參與的具有遺傳傾向的慢性氣道炎癥性疾病，其發(fā)病存在家族聚集現(xiàn)象，發(fā)病過程涉及嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞等多種炎癥細(xì)胞及其細(xì)胞組分(多種炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子)，它們相互影響共同構(gòu)成復(fù)雜的炎癥網(wǎng)絡(luò)，并以氣道慢性炎癥(表現(xiàn)為血IgE增高、肺組織內(nèi)肥大細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞及肺泡巨噬細(xì)胞浸潤(rùn))、氣道高反應(yīng)性及氣道重構(gòu)為重要的病理特征[1-2]。支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，近年來越來越傾向于用氣道免疫-炎癥機(jī)制來闡述其發(fā)病機(jī)理，故哮喘亦可概述為一種變態(tài)反應(yīng)性疾病，其中，包括眾多炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子參與發(fā)病，而脂氧素在氣道慢性炎癥反應(yīng)中作為一種天然的生理抗炎介質(zhì)發(fā)揮著較強(qiáng)的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用[3]。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)LXA4與臨床上肺功能相關(guān)性進(jìn)行研究討論。

資料與方法

一、 研究對(duì)象

45例不同嚴(yán)重程度的支氣管哮喘患者均來自2015年11月-2016年06月佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科門診及住院患者，男24例，女21例，年齡19-75歲，平均年齡43.91±14.78歲。其中有過敏性鼻炎者4人，所有入組患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘組2008年制定的哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，除外伴隨咳嗽、喘息癥狀的疾病，如鼻后滴流綜合征、聲帶功能障礙、睡眠呼吸暫停綜合征、胃食管返流疾病等，以及繼發(fā)于其他疾病引起的咳嗽、喘息癥狀，如藥源性哮喘、氣管支氣管肺曲霉病等，另外，還要除外肺炎、間質(zhì)性肺疾病、結(jié)締組織病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等、是否合并慢性阻塞性肺疾病、心內(nèi)膜炎及其他部位炎癥。所有入組患者48h內(nèi)未使用吸入性糖皮質(zhì)激素且支氣管舒張?jiān)囼?yàn)均為陽性，根據(jù)患者急性發(fā)作期的臨床癥狀及肺功能檢查，參照中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘組制定的支氣管哮喘防治指南中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，將病情嚴(yán)重程度進(jìn)行分級(jí)，將支氣管哮喘急性發(fā)作期患者按順序分為輕度組12例，中度組13例，重度組11例。同期設(shè)置正常對(duì)照組25例,男10例,女15例，年齡23-71歲之間，平均年齡為48.6±13.46歲，均簽署知情同意書。檢測(cè)前4周均無感染史，短期內(nèi)未使用全身或吸入性糖皮質(zhì)激素，均無個(gè)人及家族變態(tài)反應(yīng)性疾病史，哮喘各亞組與正常對(duì)照組比較，年齡和性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有可比性(P>0.05)。

二、 測(cè)定方法

① 標(biāo)本提?。河谇宄靠崭钩槿∈茉囌?哮喘組及正常對(duì)照組)靜脈血5mL，于離心機(jī)中以5000r/min轉(zhuǎn)速，離心10min，離心后收集上清液，裝入2mL的Eppendorf管中，標(biāo)記后于-80℃冰箱凍存待測(cè)。② 血脂氧素A4測(cè)定：將待測(cè)樣本解凍，離心，5000r/min，5min，輕取上清液，嚴(yán)格按照說明書指導(dǎo)采用固相夾心法酶聯(lián)免疫試驗(yàn)( ELISA)對(duì)哮喘急性發(fā)作期各亞組及正常對(duì)照組受試者體內(nèi)的血液LXA4水平進(jìn)行檢測(cè)，血液LXA4試劑盒購(gòu)自上海信帆生物科技有限公司。③ 肺功能檢查：受試者在靜息狀態(tài)下應(yīng)用肺功能儀測(cè)定1秒鐘用力肺呼氣容積(FEV1)、用力肺活量(FVC)以及1秒率(FEV1/FVC%)、FEV1占預(yù)計(jì)值的百分比(FEV1%pred)，所有指標(biāo)重復(fù)測(cè)定3次后取最佳值，觀察數(shù)據(jù)變化并用于結(jié)果分析。

三、 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、不同嚴(yán)重程度的哮喘急性發(fā)作組血LXA4水平高于對(duì)照組(P<0.01)；中、重度組血LXA4水平亦高于輕度組(P<0.01)；而重度組血LXA4水平[(271.22±26.99)]ng/L卻顯著低于中度組[(302.4±31.18)]ng/L(P<0.01)，(見表1)。

二、支氣管哮喘患者急性發(fā)作期各亞組血LXA4水平隨FEV1占預(yù)計(jì)值的百分比(FEV1%pred)的降低而升高，(見圖1)所示：LXA4與FEV1%pred呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.314，P<0.01)。

表1 各組哮喘患者血液LXA4水平的比較±s)

與正常對(duì)照組比較,#P<0.01;與輕度組比較,▲P<0.01;與中度組比較,★P<0.01

討 論

支氣管哮喘是一種以氣道慢性炎癥，氣道高反應(yīng)性及氣道重構(gòu)為主要臨床特征的慢性非特異性氣道炎癥疾病。其中，眾多炎癥細(xì)胞參與及其細(xì)胞組分在哮喘的發(fā)病中起著越來越大的作用。脂氧素在氣道慢性炎癥反應(yīng)中作為一種天然的以拮抗白三烯為主的生理抗炎癥介質(zhì)發(fā)揮著較強(qiáng)的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用[3]，另外，脂氧素對(duì)于氣道高反應(yīng)性及炎癥細(xì)胞增殖方面也有重要的調(diào)節(jié)作用[5]，因此，它很可能參與哮喘急性發(fā)作期的發(fā)病機(jī)制，并在其中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定45例不同嚴(yán)重程度哮喘患者的血LXA4,發(fā)現(xiàn)其體內(nèi)的血LXA4水平與臨床分級(jí)并非完全呈正相關(guān)，首先，在輕、中度組中,血清LXA4隨著哮喘發(fā)作期加重程度而升高；已有研究發(fā)現(xiàn),它作為一種內(nèi)源性的炎癥介質(zhì)拮抗劑，在成人哮喘患者肺泡巨噬細(xì)胞、外周血巨噬細(xì)胞及活化的中性粒細(xì)胞中均可產(chǎn)生,在支氣管肺泡灌洗液中亦可檢測(cè)出LXA4，其中未治療的哮喘患者上述三種細(xì)胞合成LX增多,糖皮質(zhì)激素治療后的哮喘患者活化的中性粒細(xì)胞合成LX的能力下降,巨噬細(xì)胞仍能合成LX[5]，進(jìn)一步驗(yàn)證脂氧素是哮喘重要的內(nèi)源性抗炎物質(zhì)。而重度哮喘患者外周血脂氧素水平低于輕中度哮喘患者[6]，與國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)基本一致。Cindy B等[7]發(fā)現(xiàn)LXA4是通過促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞的死亡來激活自然殺傷細(xì)胞(NK cells)，從而降低免疫反應(yīng)，并通過抑制IL-13的分泌來阻止2-型先天性淋巴樣細(xì)胞(ILC2)促炎癥反應(yīng)，可以推測(cè)重度哮喘組LXA4水平低于中度組，可能與NK細(xì)胞高度激活及ILC2的大量活化有關(guān)，同時(shí)提示脂

圖1 急性發(fā)作組哮喘患者外周血LXA4水平與FEV1%pred的相關(guān)性

氧素在哮喘急性發(fā)作期中可能通過雙重作用來發(fā)揮其抗炎作用，因此，臨床上動(dòng)態(tài)觀察血LXA4的變化有助于評(píng)估哮喘發(fā)作期患者的氣道炎癥程度。

本實(shí)驗(yàn)研究還發(fā)現(xiàn)，哮喘患者急性發(fā)作期時(shí)肺功能FEV1%pred水平明顯下降,而在正常健康對(duì)照組中未出現(xiàn)特異性改變，肺功能相關(guān)指標(biāo)正常,與馬宏景等[10]研究一致，哮喘發(fā)作期肺功能呈阻塞性改變，正常成人氣道炎癥仍可存在，說明肺功能不能用作評(píng)價(jià)氣道炎癥程度，但臨床上它可用來輔助診斷支氣管哮喘及評(píng)估治療效果。另外，不同嚴(yán)重程度的支氣管哮喘患者血清LXA4的水平與肺功能呈負(fù)相關(guān)，推測(cè)人體天然抗炎癥物質(zhì)脂氧素的升高可能預(yù)示哮喘患者肺功能的加重，而脂氧素低水平則指示其氣道高反應(yīng)程度有所改善。但是，脂氧素通過何種機(jī)制影響肺功能的具體途徑有待進(jìn)一步研究，通過此實(shí)驗(yàn)可知，脂氧素作為炎癥反應(yīng)的“終止信號(hào)”，具有強(qiáng)大的抗炎癥、抗增殖的免疫調(diào)節(jié)作用[8]，因此，它有良好的應(yīng)用前景,尤其在臨床上有望應(yīng)用脂氧素治療哮喘[9]，亦可作為哮喘急性發(fā)作期程度加重或減輕的病情評(píng)估指標(biāo)輔助診斷或作為哮喘的生物標(biāo)記物應(yīng)用于其表型分型。

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10.3969/j.issn.1009-6663.2017.02.045

154002 黑龍江 佳木斯，佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科

鮑文華，E-mail：baowenhua3@sina.com

2016-06-15]