胡紅林，習(xí)小慶，唐偉偉，葉真逢，黃雅為，林雙泉，項(xiàng)明峰

（南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院泌尿外科，江西南昌330006）

論著

MicroRNA-21和microRNA-664減輕腎缺血再灌注損傷的研究*

胡紅林，習(xí)小慶，唐偉偉，葉真逢，黃雅為，林雙泉，項(xiàng)明峰

（南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院泌尿外科，江西南昌330006）

目的探討microRNA-21和microRNA-664對(duì)腎缺血再灌注損傷（IRI）的影響。方法應(yīng)用agomir-21和agomir-664預(yù)處理BALB/c小鼠，采用雙側(cè)腎蒂阻斷法復(fù)制小鼠腎IRI模型，小鼠腎缺血再灌注后24 h，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）法和Western blot檢測(cè)缺血后腎組織中microRNA-21和microRNA-664及其靶基因、靶蛋白的表達(dá)，觀察腎臟病理組織學(xué)的變化。結(jié)果agomir-21和agomir-664預(yù)處理BALB/c小鼠經(jīng)腎IRI后，腎臟損傷減輕，表現(xiàn)為腎小管上皮細(xì)胞壞死降低，進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)microRNA-21和microRNA-664的靶基因PTEN、PDCD4和MAPK表達(dá)降低，靶蛋白Caspase-3和ERK1/2表達(dá)受抑制。結(jié)論MicroRNA-21和microRNA-664可以通過調(diào)控其靶基因、靶蛋白的表達(dá)，從而減輕腎缺血再灌注損傷。

腎缺血再灌注損傷；microRNA-21；microRNA-664

筆者前期研究采用microRNA基因芯片技術(shù)檢測(cè)雌雄小鼠腎缺血再灌注損傷后腎組織中microRNA-21（miR-21）和microRNA-664（miR-664）的表達(dá)存在明顯性別差異表達(dá)[7]?；诖耍狙芯窟M(jìn)一步探討miR-21和miR-664對(duì)腎缺血再灌注損傷的調(diào)控作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與試劑

雄性BALB/c小鼠，年齡8～10周，體重20～25g，購自南昌大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)科部。agomir-21、agomir-664、miRNA引物、U6及miRNA相關(guān)調(diào)控基因購自廣東銳博有限公司，蛋白提純?cè)噭┖匈徸院蔽錆h博士德生物工程有限公司，兔抗鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）抗體、兔抗鼠細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（extracellular-signal-regulated kinase1/2，ERK1/2）抗體購自湖北武漢博士德生物工程有限公司，辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗購自美國TRANS公司，ECL免疫檢測(cè)試劑盒購自美國Pierce公司

1.2 實(shí)驗(yàn)分組

雄性BALB/c小鼠按以下方案分組。Ⅰ組：agomir-21+IRI 0 min組（n=10）；Ⅱ組：磷酸緩鹽沖溶液（phosphate buffer saline，PBS）+IRI 0 min組（n= 10）；Ⅲ組：agomir-664+IRI 0 min組（n=10）；Ⅳ組：agomir-21+IRI 45min組（n=10）；Ⅴ組：PBS+IRI 45 min組（n=10）；Ⅵ組：agomir-664+IRI 45 min組（n=10）。agomir-21和agomir-664，經(jīng)腹腔注射，5 nmol/次，隔天1次，持續(xù)1周。

1.3 腎缺血再灌注損傷模型復(fù)制

隨著社會(huì)的不斷發(fā)展以及信息技術(shù)的不斷普及，將信息技術(shù)應(yīng)用到教學(xué)中，已經(jīng)成為當(dāng)前教育界發(fā)展的必然趨勢(shì)。在開展小學(xué)語文教學(xué)的過程中，應(yīng)用信息技術(shù)開展教學(xué)，能夠幫助教師營造合適的教學(xué)環(huán)境，激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣。同時(shí)，通過信息技術(shù)，教師也能夠?yàn)閷W(xué)生提供充足的課外資源，豐富學(xué)生的知識(shí)儲(chǔ)備，在提升學(xué)生學(xué)習(xí)質(zhì)量的同時(shí)，推動(dòng)學(xué)生的綜合化發(fā)展。

動(dòng)物術(shù)前禁食12 h后，10％水合氯醛溶液麻醉（9 ml/kg，腹腔注射）。取腹正中切口約2 cm，逐層分離進(jìn)入腹腔，找到腎蒂，無損傷微型動(dòng)脈夾阻斷雙側(cè)腎蒂，阻斷腎蒂45 min后去除動(dòng)脈夾，恢復(fù)血流灌注（前期實(shí)驗(yàn)表明：腎臟由鮮紅變紫黑色，表示腎缺血成功，恢復(fù)血供后，腎臟迅速由紫黑色變?yōu)轷r紅，恢復(fù)原來顏色[3]），術(shù)畢分層縫合關(guān)閉腹腔。假手術(shù)組找到腎蒂后不阻斷腎蒂血流，等待45 min后分層縫合關(guān)閉腹腔。術(shù)中應(yīng)用生理鹽水使小鼠保持充分的水化。術(shù)后小鼠于24～29℃的環(huán)境保暖，補(bǔ)充水與飼料，術(shù)后小鼠存活24 h表示建模成功。

1.4 腎臟組織病理學(xué)檢查

手術(shù)后24 h，采用引頸法處死小鼠，取出腎臟，其中1個(gè)腎臟置于10％福爾馬林溶液中固定，石蠟包埋，制作4μm切片，常規(guī)蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）染色，進(jìn)行Rabb半定量病理評(píng)估法評(píng)分（最高4分）[8]：正常腎臟形態(tài)為0分；最少壞死（＜5％的腎小管壞死）為1分；輕度壞死（5％～25％的腎小管壞死）為2分；中度壞死（25％～75％的腎小管壞死）為3分；重度壞死（＞75％的腎小管壞死）為4分。另一腎臟迅速冷凍保存于液氮，再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱冷凍保存做后續(xù)相關(guān)檢測(cè)。

1.5 總RNA提取和質(zhì)量檢測(cè)

腎組織約100 mg放入勻漿器中，并加入1 ml Trizol液，充分勻漿，進(jìn)行樣品量及質(zhì)量檢測(cè)，包含OD260、OD280、OD230、AgaroseElectrophoresis及Agilent Bioanalyzer等測(cè)試，檢驗(yàn)RNA樣品的濃度、純度及完整性。

1.6 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)

取一定量的腎組織，依據(jù)TRANS公司產(chǎn)品說明書用Trizol液裂解，氯仿抽提總RNA，miRNA、內(nèi)參U6及miRNA相關(guān)調(diào)控基因逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成模板cDNA，置入-20℃冰箱冷凍保存。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）循環(huán)次數(shù)為40次，提供的數(shù)據(jù)采用2-△△CT法分析。以20μl反應(yīng)體系進(jìn)行PCR，取2μl逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)產(chǎn)物分別與miR-21引物、miR-664引物、內(nèi)參照U6引物、第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN）引物、程序性細(xì)胞凋亡因子4（programmed cell death protein 4，PDCD4）引物、絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）引物、β-肌動(dòng)蛋白引物進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)條件按miRNA qRT-PCR使用說明書在ABI PRISM 7300 Real time PCR System上操作。

1.7 Western blot檢測(cè)Caspase-3及ERK1/2蛋白表達(dá)水平

按蛋白提純?cè)噭┖姓f明書進(jìn)行細(xì)胞裂解液中的蛋白提純，應(yīng)用考馬斯亮蘭法測(cè)定蛋白濃度。蛋白質(zhì)孔上樣后，經(jīng)10％SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜。硝酸纖維素膜經(jīng)5％脫脂牛奶封閉過夜，分別用兔抗鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）抗體、兔抗鼠細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（ERK1/2）抗體（1∶400），4℃孵育過夜。加入相應(yīng)的辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗。按照ECL免疫檢測(cè)試劑盒操作說明書進(jìn)行顯色、曝光、X光片沖洗，掃描后采用Image Pro Plus測(cè)量條帶灰度值。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Graph Pad 5.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，計(jì)量資料組間比較用t檢驗(yàn)或Mann-WhitneyU非參數(shù)檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 注射agomir試劑后各組腎臟病理組織學(xué)評(píng)估

各組腎臟經(jīng)HE染色后在顯微鏡下病理組織學(xué)評(píng)估，隨機(jī)選取10個(gè)視野采用Rabb病理評(píng)估方法顯示：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組腎組織基本正常，僅見部分腎小管上皮細(xì)胞水腫。Ⅴ組腎小管上皮細(xì)胞壞死、崩解脫落以及細(xì)胞核濃縮、碎裂、核溶解，部分腎小管管腔擴(kuò)張、管腔輪廓模糊，病理損傷范圍＞75％；而Ⅳ組和Ⅵ組可見腎小管上皮壞死明顯減輕。見圖1A。

Ⅰ組與Ⅱ組、Ⅱ組與Ⅲ組，腎小管病理損傷評(píng)分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.591和0.557）；但Ⅳ組（3.112±0.151）與Ⅴ組（3.860±0.131）比較，腎小管病理損傷評(píng)分降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P= 0.010）；同樣，Ⅵ組（3.230±0.163）與Ⅴ組（3.860± 0.131）比較，腎小管病理損傷評(píng)分也降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.013）。見圖1B。

2.2 注射agomir試劑后各組腎臟組織中miR-664及miR-21相對(duì)表達(dá)量

為了檢測(cè)注射藥物干預(yù)前后miR-21、miR-664的表達(dá)，采用qRT-PCR檢測(cè)腎臟中miR-664及miR-21表達(dá)，結(jié)果顯示，miR-664的表達(dá)量Ⅲ組（1.63±0.123）與Ⅱ組（1.0）相比上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.012）；Ⅵ組（2.53±0.066）與Ⅴ組（2.07± 0.159）miR-664的表達(dá)量相比上調(diào)，其表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.035）。見圖2A。miR-21的表達(dá)量Ⅰ組（1.63±0.087）與Ⅱ（1.0）相比上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.011）；Ⅳ組（2.09±0.100）與Ⅴ組（1.56±0.122）miR-21的表達(dá)量相比上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.021）。見圖2B。

2.3 注射agomir試劑后各組腎臟組織中PTEN、PDCD-4以及MAPK mRNA的表達(dá)

為了檢測(cè)miR-21的靶基因PTEN、PDCD-4和miR-664的靶基因MAPK的表達(dá)量，采用RT-qPCR檢測(cè)各組腎臟中PTEN、PDCD-4以及MAPK的mRNA表達(dá)。結(jié)果顯示，PTEN、PDCD-4的表達(dá)量Ⅰ組[（0.91±0.067）、（0.93±0.051）]與Ⅱ組（1.0）比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.136和0.251），見圖3A、B；MAPK的表達(dá)量Ⅲ組（0.92±0.079）與Ⅱ組（1.0）比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.223），見圖3C。PTEN、PDCD-4的表達(dá)量Ⅳ組[（0.33±0.075）、（0.30± 0.051）]與Ⅴ組[（0.53±0.066）、（0.50±0.061）]比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.036和0.034），見圖3A、B；MAPK的表達(dá)量Ⅵ組（0.28±0.066）與Ⅴ組（0.50±0.060）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.032），見圖3C。

圖1 BALB/c小鼠雙側(cè)腎蒂阻斷45 min，恢復(fù)血流灌注后24 h腎臟病理組織學(xué)評(píng)估

圖2 BALB/c小鼠雙側(cè)腎蒂阻斷45 min，恢復(fù)血流灌注后24 h

圖3 BALB/c小鼠雙側(cè)腎蒂阻斷45 min，恢復(fù)血流灌注后24 h

圖4 BALB/c小鼠雙側(cè)腎蒂阻斷45 min，恢復(fù)血流灌注后24 h腎臟中Caspase-3、ERK1/2蛋白的表達(dá)

2.4 注射agomir試劑后各組腎臟組織中Caspase-3以及ERK1/2蛋白的表達(dá)

采用Western blot法檢測(cè)各組腎臟組織中Caspase-3以及ERK1/2蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示，各組腎組織中pro-Caspase-3蛋白的表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而與Ⅴ組比較，Caspase-3剪切片段P17的表達(dá)量在Ⅳ組受抑制（P=0.039），ERK1/2蛋白的剪切片段P42、P44的表達(dá)量在Ⅵ組也降低（P=0.031和0.026）。見圖4。

3 討論

心、腦、肺等多種器官IRI研究中均存在性別差異，大量的臨床案例及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也證實(shí)腎IRI存在明顯性別差異，雌性對(duì)IRI的耐受性明顯強(qiáng)于雄性；而且筆者前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)雌性和雄性小鼠腎缺血45 min是復(fù)制動(dòng)物模型理想的腎缺血時(shí)間[3]。

何種機(jī)制導(dǎo)致腎IRI存在性別差異呢？文獻(xiàn)報(bào)道等[9]通過構(gòu)建雌雄小鼠腎缺血55 min再灌注2 h和16 h模型發(fā)現(xiàn)，雌雄鼠腎臟組織中Na+K+ATP酶（以下簡稱NKA）的mRNA存在差異，但在腎缺血再灌注后該差異更加明顯，而NKAα1蛋白在腎缺血再灌注前表達(dá)相似，但在缺血再灌注損傷后雌性表達(dá)明顯升高，這說明NKAα1蛋白和mRNA的更高表達(dá)有助于改善雌鼠腎缺血后腎功能。另一方面，雌激素可能通過維持Na+Ca2+交換器從而對(duì)腎缺血再灌注損傷起保護(hù)作用[10-11]。KANG等[12]研究表明，去勢(shì)的雄性大鼠可以減輕大鼠腎缺血后的炎癥反應(yīng)和腎小管損傷，補(bǔ)充睪酮可以逆轉(zhuǎn)此保護(hù)作用；而切除卵巢后的雌性大鼠腎缺血后炎癥反應(yīng)和腎小管損傷均明顯加重，同樣補(bǔ)充雌激素可以逆轉(zhuǎn)此損傷，他們認(rèn)為雄性大鼠對(duì)腎缺血更敏感是由于缺血后腎臟增強(qiáng)了炎癥反應(yīng)。PARK等[1]通過研究認(rèn)為，體內(nèi)睪酮出現(xiàn)而不是雌激素缺乏使小鼠對(duì)腎缺血再灌注損傷更敏感，睪酮可以通過非雄激素受體介導(dǎo)的機(jī)制減少腎缺血誘導(dǎo)的一氧化氮合酶、磷酸化蛋白激酶（protein kinase B，Akt）激活和缺血后ERK/JNK磷酸化比率的上升引起的炎癥反應(yīng)而增加腎臟缺血損傷。所以，腎缺血再灌注損傷性別差異的具體機(jī)制仍有待于進(jìn)一步闡明。

miRNA的研究已經(jīng)成為近年來生命科學(xué)領(lǐng)域中的一個(gè)重要方向，miRNA廣泛存在于動(dòng)物、植物、病毒等多種有機(jī)體中[13-14]。miRNA參與維持機(jī)體多種器官功能、細(xì)胞分化、增殖以及免疫系統(tǒng)的發(fā)展[15-16]。為進(jìn)一步研究腎缺血再灌注損傷性別差異的機(jī)制，筆者前期研究從miRNA著手，對(duì)不同性別的小鼠腎組織中miRNA表達(dá)譜進(jìn)行對(duì)比研究，在閾值為1.5時(shí)，發(fā)現(xiàn)miR-21和miR-664在各組腎臟組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中雄性假手術(shù)組與雌性假手術(shù)組相比miR-21和miR-664表達(dá)相近，雄性IRI 45 min組與雄性假手術(shù)組相比上調(diào)約1.5倍和1.3倍，而雌性IRI 45 min組與雄性假手術(shù)組相比miR-21和miR-664表達(dá)倍數(shù)約2和2.2倍，進(jìn)一步采用定量PCR驗(yàn)證結(jié)果跟基因芯片結(jié)果基本一致[7]。所以本實(shí)驗(yàn)將進(jìn)一步著重研究miR-21和miR-664對(duì)腎缺血再灌注損傷的影響。

miR-21及miR-664在腎缺血再灌注損傷中如何發(fā)揮其作用機(jī)制呢？目前，文獻(xiàn)資料表明miR-21是一個(gè)強(qiáng)大的抗凋亡因子[17-18]，可以通過負(fù)向調(diào)控其靶基因PTEN和PDCD4。最近研究表明，miR-21在小鼠腎小管上皮細(xì)胞[17]和小鼠腎組織[19]中主要通過下調(diào)PDCD4表達(dá)而抑制細(xì)胞凋亡。PTEN主要是負(fù)向調(diào)控磷脂酰肌醇3-激酶PI3K/AKT信號(hào)通路抑制細(xì)胞凋亡[20]。SAYED等[21]研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因小鼠心肌組織中miR-21過表達(dá)可以抑制缺血誘導(dǎo)的PTEN和Fas配體（FasL）上調(diào)以及Akt磷酸化，從而起到抑制細(xì)胞凋亡的作用。JIA等[22]應(yīng)用anti-miR-21敲除小鼠腎臟中miR-21，發(fā)現(xiàn)缺血腎組織中PDCD4和PTEN表達(dá)明顯下調(diào)，而使腎臟中腎小管細(xì)胞凋亡加重。隨著PDCD4及PTEN的下調(diào)，程序性凋亡因子Caspase-3表達(dá)會(huì)明顯降低，而另一方面Caspase-3處于凋亡有序級(jí)聯(lián)反應(yīng)的下游，是最重要的效應(yīng)型Caspase，是Caspase家族中細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵執(zhí)行者，是細(xì)胞凋亡過程中的主要效應(yīng)因子[23]。WANG等[24]研究表明，miR-664可以通過負(fù)向調(diào)控其靶基因MAPK從而調(diào)控葡萄糖的代謝，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)MAPK基因通過調(diào)控ERK蛋白可進(jìn)一步調(diào)控腎臟對(duì)缺血再灌注損傷的敏感性及耐受性，然而miR-664在腎缺血再灌注損傷中的作用的相關(guān)報(bào)道甚少。

在本研究中，筆者通過注射agomir分子誘導(dǎo)雄性BALB/c小鼠腎組織中缺血前過表達(dá)miR-21及miR-664。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與相應(yīng)對(duì)照組比較，應(yīng)用agomir-21或agomir-664后腎組織中miR-21或miR-664表達(dá)量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明agomir分子的作用是明確有效的。各組腎組織病理組織學(xué)評(píng)分表明，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組腎組織基本正常，僅見部分腎小管上皮細(xì)胞水腫，Ⅳ組和Ⅵ組可見腎小管上皮細(xì)胞壞死、空泡變性以及細(xì)胞核濃縮、碎裂、核溶解，病理損傷范圍在25％～75％；Ⅴ組腎小管上皮細(xì)胞壞死、崩解脫落以及細(xì)胞核濃縮、碎裂、核溶解，部分腎小管管腔擴(kuò)張、管腔輪廓模糊，病理損傷范圍＞75％，進(jìn)一步證明使用agomir-21及agomir-664能有效上調(diào)腎組織中miR-21、miR-664的表達(dá)，而且上調(diào)miR-21及miR-664后，小鼠腎對(duì)缺血再灌注損傷的耐受性明顯提高。同時(shí)Ⅰ組PTEN、PDCD4和Ⅲ組MAPK的表達(dá)量與Ⅱ組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ⅳ組PTEN、PDCD4的表達(dá)量低于Ⅴ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ⅵ組MAPK的表達(dá)量低于Ⅴ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Westren blot結(jié)果顯示，Ⅳ組Pro-Caspase-3的表達(dá)量與Ⅴ組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而cleaved Caspase-3 P17的表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ⅵ組cleaved ERK1/2 P42、P44的表達(dá)量與Ⅴ組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此筆者推斷：①miR-21通過負(fù)向調(diào)控其靶基因PDCD4及PTEN，從而影響Caspase-3的表達(dá)，進(jìn)一步影響腎缺血再灌注損傷的程度；②miR-664通過負(fù)向調(diào)控其靶基因MAPK，進(jìn)一步調(diào)控凋亡蛋白ERK蛋白表達(dá)，進(jìn)而影響腎缺血再灌注損傷的程度。

綜上所述，miR-21及miR-664可能在腎缺血再灌注損傷過程中扮演著重要角色?？梢酝ㄟ^調(diào)控miR-21或miR-664，從而逆向調(diào)控其靶基因和靶蛋白，進(jìn)而改變腎臟對(duì)缺血再灌注損傷的敏感性，其有望為腎缺血再灌注損傷的防治提供新的靶標(biāo)。

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（張蕾 編輯）

MicroRNA-21 and microRNA-664 relieve renal ischemia-reperfusion injury*

Hong-lin Hu,Xiao-qing Xi,Wei-wei Tang,Zhen-feng Ye, Ya-wei Huang,Shuang-quan Lin,Ming-feng Xiang
(Department of Urology,the Second Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang,Jiangxi 330006,China)

ObjectiveTo explore the effect of microRNA-21 and microRNA-664 on renal ischemia-reperfusion injury(IRI).MethodsAgomir-21 and agomir-664 were used to pretreat BALB/c mice.The method of bilateral renal pedicle occlusion was adopted to establish the renal IRI model in mice.At the 24th h after renal IRI,the expressions of microRNA-21 and microRNA-664,and their target genes and proteins in the kidneys were detected by real-time fluorescent quantitative PCR and Western blot.The histopathological changes of the kidneys were observed.ResultsRenal damage was significantly reduced in mice pretreated with agomir-21 and agomir-664,characterized by reduced necrosis of renal tubular epithelial cells.Further study showed that the expressions of microRNA-21 and microRNA-664 and their target genesPTEN,PDCD4andMAPKwere decreased,the expressions of their target proteins Caspase-3 and ERK1/2 were suppressed.ConclusionsMicroRNA-21 and microRNA-664 can reduce renal ischemia-reperfusion injury through regulation of the expressions of their target genes and proteins.

renal ischemia-reperfusion injury;microRNA-21;microRNA-664

R-332

：A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.02.003

1005-8982（2017）02-0019-07

2016-08-18

江西省自然科學(xué)基金（No：20132BAB205009）

習(xí)小慶，E-mail：xixiaoqing500@sina.com