李振姣+馬斯霜+部麗群+李耀棟+唐輝+張銀霞+田蕾+李培富

摘要：為了解和拓寬寧夏水稻種質(zhì)資源的遺傳基礎(chǔ)，利用18個(gè)表型性狀對(duì)從國(guó)外或外地引進(jìn)的269份水稻種質(zhì)資源進(jìn)行表型評(píng)價(jià)和遺傳多樣性分析，并進(jìn)行不同性狀間遺傳相關(guān)分析和聚類分析。表型評(píng)價(jià)結(jié)果表明，大多數(shù)種質(zhì)都表現(xiàn)為綠色葉片、葉枕、稈黃色穎尖、彎曲穗粒形狀和無芒特征；二次枝梗的變異系數(shù)最高，達(dá)35.82%，谷粒寬的變異系數(shù)最低，為7.66%，F(xiàn)測(cè)驗(yàn)結(jié)果表明各數(shù)量性狀差異都達(dá)到了極顯著水平。遺傳多樣性分析結(jié)果顯示，質(zhì)量性狀[JP3]的多樣性指數(shù)H′平均為0.34，數(shù)量性狀的多樣性指數(shù)平均為1.99。遺傳相關(guān)分析結(jié)果表明，各性狀間存在復(fù)雜的相互關(guān)系，其中二次枝梗與每穗總粒數(shù)的正相關(guān)系數(shù)最大，為0.946，谷粒寬與谷粒長(zhǎng)寬比的負(fù)相關(guān)系數(shù)最大，為 -0.771。根據(jù) UPGMA 聚類法，以歐式距離0.84為閾值，將參試材料分為四大類，第Ⅰ類為粒數(shù)型品種，第Ⅱ類早熟、結(jié)實(shí)率較高，第Ⅲ類是來自日本的矮稈品種，大部分聚在第Ⅳ類，為中間類型。對(duì)不同地理來源的種質(zhì)資源材料進(jìn)行聚類，結(jié)果顯示俄羅斯的水稻資源與其他地方的資源親緣關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn)，韓國(guó)、日本、遼寧和江蘇的種質(zhì)資源親緣關(guān)系相對(duì)較近。說明外引水稻種質(zhì)資源表型遺傳多樣性較豐富，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，可豐富和拓寬寧夏水稻種質(zhì)資源的遺傳多樣性。

關(guān)鍵詞：水稻；種質(zhì)資源；遺傳多樣性；表型性狀

中圖分類號(hào)： S511.03文獻(xiàn)標(biāo)志碼：

文章編號(hào)：1002-1302（2016）08-0117-05

種質(zhì)資源是作物優(yōu)良基因的載體，保護(hù)現(xiàn)有種質(zhì)資源的遺傳多樣性，改良與創(chuàng)新利用是當(dāng)前乃至長(zhǎng)遠(yuǎn)種質(zhì)資源研究的主要內(nèi)容，也是實(shí)施農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略的重要舉措[1]。歷史經(jīng)驗(yàn)不斷證明，水稻育種上取得的突破性進(jìn)展無不與種質(zhì)資源的利用密切相關(guān)。寧夏大米素以品質(zhì)優(yōu)良而著稱，這與銀川平原優(yōu)越的氣候條件密不可分[2]。前人研究表明，不同地區(qū)間的種質(zhì)資源遺傳多樣性高于同一地區(qū)內(nèi)的不同品種間[3-4]，因此，為了了解和拓寬寧夏水稻種質(zhì)資源的遺傳基礎(chǔ)，對(duì)從國(guó)外或外地引進(jìn)的水稻種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性研究顯得尤為必要[5-6]。近年來，有關(guān)水稻種質(zhì)資源遺傳多樣性的研究不勝枚舉，劉煒等利用SSR分子標(biāo)記對(duì)寧夏粳稻種質(zhì)資源進(jìn)行了初步研究，表明寧夏粳稻種質(zhì)資源之間的相似性較高，遺傳差異較小，遺傳背景比較單一[7-9]。賀治州等利用15個(gè)表型性狀比較分析了127份來源于9個(gè)熱帶國(guó)家和地區(qū)的熱帶水稻優(yōu)異種質(zhì)資源的遺傳多樣性，結(jié)果表明不同來源的熱帶水稻種質(zhì)各性狀變異范圍大，遺傳多樣性指數(shù)較高[10]。李自超等利用31個(gè)表型性狀研究了云南地方稻種資源的遺傳多樣性，發(fā)現(xiàn)其遺傳多樣性大，優(yōu)質(zhì)資源豐富，以滇西南和滇東南的遺傳多樣性最大，秈稻多樣性小于粳稻[11]。但是無論從表型性狀，還是從分子水平，有關(guān)寧夏外引水稻種質(zhì)資源的遺傳多樣性研究還未見報(bào)道。本研究利用18個(gè)表型性狀對(duì)在寧夏地區(qū)正常生長(zhǎng)的269份外引水稻種質(zhì)資源進(jìn)行表型遺傳多樣性分析，為今后本地區(qū)水稻育種提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1供試材料

以269份寧夏外引水稻種質(zhì)資源為試驗(yàn)材料，其中來自澳大利亞5份，意大利10份，法國(guó)3份，俄羅斯1份，葡萄牙2份，日本43份，韓國(guó)4份，朝鮮1份，中國(guó)臺(tái)灣2份，中國(guó)云南6份，中國(guó)北京20份，中國(guó)黑龍江44份，中國(guó)吉林89份，中國(guó)遼寧27份，中國(guó)江蘇12份，參試材料名稱、編號(hào)及來源略。

1.2試驗(yàn)方法

參試材料于2014年4月16日在寧夏大學(xué)水稻育種基地[LM]

育秧，5月17號(hào)插秧。每個(gè)材料栽3行，每行10株，行長(zhǎng) 1.0 m，行距0.3 m，株距0.1 m，單株插秧，田間管理與大田相同。

按照《稻種資源形態(tài)農(nóng)藝性狀鑒定方法》的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，主要考察水稻葉色、葉枕色、穎尖色、穗粒形狀、芒色等5個(gè)質(zhì)量性狀以及株高、穗長(zhǎng)、每穗總粒數(shù)、每穗實(shí)粒數(shù)、結(jié)實(shí)率、著粒密度、一次枝梗數(shù)、二次枝梗數(shù)、谷粒長(zhǎng)、谷粒寬、谷粒長(zhǎng)寬比、單株穗數(shù)、千粒質(zhì)量等13個(gè)數(shù)量性狀。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

將所調(diào)查的表型質(zhì)量性狀進(jìn)行頻次分布統(tǒng)計(jì)，數(shù)量性狀的基本數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)在Excel中進(jìn)行，包括均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)等，各性狀的方差分析在SAS 8.2軟件中進(jìn)行。對(duì)數(shù)量性狀進(jìn)行質(zhì)量化處理，參照王述民的方法，進(jìn)行10個(gè)等級(jí)的劃分，每0.5σ為1級(jí)，σ為標(biāo)準(zhǔn)差，計(jì)算Shannon-Wiener多樣性指數(shù)（H′），其計(jì)算公式為：H′=-∑PilnPi（i=1，2，3，…），其中Pi是某性狀第i個(gè)級(jí)別的材料數(shù)占總材料數(shù)的比例。通過SPSS Statistics 17.0對(duì)13個(gè)數(shù)量性狀進(jìn)行相關(guān)性分析。利用SAS 91軟件采用UPGMA法進(jìn)行聚類分析，繪制樹狀聚類圖。

2結(jié)果與分析

2.1不同質(zhì)量性狀的表型頻次分布

通過對(duì)269份外引水稻種質(zhì)資源5個(gè)質(zhì)量性狀的調(diào)查分析，各性狀的頻次分布見圖1。不同水稻種質(zhì)資源的葉枕色以綠色為主，占96.66%，其次為紫色，占12.6%，而紅色的極少，只占0.74%；穎尖色以稈黃為主，占86.25%，其次是紅色，占7.43%，紫色占6.32%；葉片以綠色為主，占97.8%，個(gè)別品種為紫色，占0.34%，而葉緣色為紫色的占1.86%；穗粒形狀以彎曲為主，占81.04%，直立或半直立穗分別占 10.04% 和8.92%；無芒水稻品種占94.4%，有芒品種只占5.6%，且芒色以白色為主，占3.46%，而紅芒或紫芒品種分別占1.73%和0.35%（圖1）。從不同性狀的頻次分布可以看出，大部分水稻品種呈現(xiàn)綠色的葉片，綠色葉枕，稈黃色的穎尖，無芒和彎曲的穗粒形狀。

2.2不同數(shù)量性狀的表型變異分析

根據(jù)形態(tài)和農(nóng)藝性狀考察結(jié)果，計(jì)算每個(gè)表型性狀的均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異范圍、變異系數(shù)和F值（表1）。由表1可知，不同水稻種質(zhì)資源材料間每穗總粒數(shù)、每穗實(shí)粒數(shù)、結(jié)實(shí)率、著粒密度、二次枝梗的變異范圍大，變異系數(shù)高，均達(dá)到23%以上，其中二次枝梗的變異系數(shù)最大，為35.82%，說明二次枝梗的變異程度較高。谷粒長(zhǎng)與谷粒寬的變異系數(shù)較小，分別為8.08%和7.66%，說明這2個(gè)性狀的變異程度較小。13個(gè)表型性狀的F值都達(dá)到了極顯著的水平，說明寧夏外引的種質(zhì)資源材料各表型性狀間都存在著非常大的遺傳差異。

2.3水稻種質(zhì)資源的遺傳多樣性分析

根據(jù)形態(tài)和農(nóng)藝性狀考察結(jié)果，計(jì)算每個(gè)表型性狀的Shannon-Weiner多樣性指數(shù)（Hs=-∑pi·lnpi），結(jié)果如表2所示。從表3可知，5個(gè)質(zhì)量性狀中，穗粒形狀的遺傳多樣性指數(shù)最高，H′為0.62，穎尖色為0.50，葉片色最低，H′為012，平均為0.34，總體上質(zhì)量性狀的遺傳多樣性指數(shù)H′較低。13個(gè)數(shù)量性狀中，各個(gè)性狀的多樣性指數(shù)基本都在2.0左右，谷粒長(zhǎng)寬比的最小，H′為1.77，最大的是一次枝梗數(shù)，H′為2.09，平均值為1.99。所以，數(shù)量性狀的遺傳多樣性指數(shù)H′明顯高于質(zhì)量性狀的多樣性指數(shù)H′，表明數(shù)量性狀的遺傳多樣性較大。

2.4不同數(shù)量性狀表型性狀間的相關(guān)性分析

對(duì)寧夏外引269份種質(zhì)資源的13個(gè)數(shù)量性狀進(jìn)行遺傳相關(guān)分析，相關(guān)系數(shù)見表3。由表3可見，不同表型性狀間存在顯著、極顯著相關(guān)關(guān)系，有些性狀間為正相關(guān)關(guān)系，而有些性狀間則為負(fù)相關(guān)關(guān)系，表明性狀間復(fù)雜的相互關(guān)系。在極顯著正相關(guān)中，每穗總粒數(shù)與二次枝梗數(shù)相關(guān)系數(shù)最大，為0.946，表明每穗總粒數(shù)與二次枝梗的遺傳相關(guān)性較大，每穗實(shí)粒數(shù)與谷粒長(zhǎng)寬比的相關(guān)系數(shù)最小，為0.167；在極顯著負(fù)相關(guān)中，谷粒寬與谷粒長(zhǎng)寬比的相關(guān)系數(shù)最大，為-0.771，每穗總粒數(shù)與結(jié)實(shí)率的遺傳相關(guān)性最小，相關(guān)系數(shù)為 -0.159。

2.5寧夏外引水稻種質(zhì)資源表型性狀的聚類分析

以收集到的269份寧夏外引水稻種質(zhì)資源13個(gè)數(shù)量性狀的均值為基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，以類平均法進(jìn)行聚類分析，結(jié)果如圖2所示，根據(jù)聚類分析結(jié)果，以歐式距離0.84為閾值，可將269份水稻種質(zhì)資源材料劃分為四大類，第Ⅰ類包含8份材料，包括牡12-1822、牡12-815、超級(jí)稻-2、超級(jí)稻-3、E1、S2-4、K60、馬引3號(hào)，此類種質(zhì)資源的特點(diǎn)是每穗總粒數(shù)較多，平均200粒左右；第Ⅱ類共66份材料， 包括羅薩馬啟蒂、羅瑪、羅卡等5份意大利材料和龍粳43、豐優(yōu)5110等61份東北材料，這類材料平均每穗實(shí)粒數(shù)多，結(jié)實(shí)率較高；第Ⅲ類包含3份材料，分別為Hitomehore、京引114、Kirara397，主要是日本引進(jìn)材料，此類種質(zhì)資源材料的株高相對(duì)較矮，平均 60 cm 以下，每穗總粒數(shù)較少，平均60粒左右，為矮稈小穗類型；第Ⅳ類包含192份材料，占到總數(shù)的71.38%，包括中國(guó)東北、日本、韓國(guó)、澳大利亞和歐洲等地區(qū)，為中間類型。這些表型遺傳差異大的水稻資源是豐富寧夏水稻種質(zhì)資源的良好材料，可拓寬寧夏種質(zhì)資源的遺傳基礎(chǔ)。

2.6不同地理來源水稻種質(zhì)資源表型性狀的聚類分析

通過對(duì)不同來源的水稻資源進(jìn)行歸類后，以13個(gè)數(shù)量性狀的均值為基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，利用SAS 9.1軟件類平均法進(jìn)行聚類分析，結(jié)果如圖3，發(fā)現(xiàn)在歐式距離0.88為閾值，可將不同地理來源的水稻分為五大類，其中第Ⅰ類只有1個(gè)品種，為俄羅斯水稻品種，表明俄羅斯水稻資源與其他各個(gè)地方的水稻資源親緣關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn)；第Ⅱ類包括中國(guó)（云南、臺(tái)灣）、意大利和葡萄牙的水稻資源；第Ⅲ類有中國(guó)（遼寧、江蘇）、日本、韓國(guó)、朝鮮和法國(guó)的水稻資源；第Ⅳ類僅包括中國(guó)黑龍江的水稻種質(zhì)資源；第Ⅴ類有澳大利亞、中國(guó)（北京、吉林）的水稻資源，聚在同一類的材料表明其親緣關(guān)系較近，有可能來自同一個(gè)祖先，不同類別間種質(zhì)資源的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，遺傳差異較大，多樣性豐富，可豐富和拓寬寧夏水稻種質(zhì)資源的遺傳多樣性，為水稻育種提供良好的資源材料。

3結(jié)論與討論

本研究通過對(duì)269份寧夏外引水稻種質(zhì)資源的表型性狀進(jìn)行遺傳多樣性分析，在質(zhì)量性狀上，大部分水稻資源表現(xiàn)為綠色的葉枕，桿黃色的穎尖，彎曲的穗立形狀，無芒的水稻類型，且有芒品種大多數(shù)以白色為主。在數(shù)量性狀上，每穗總粒數(shù)、每穗實(shí)粒數(shù)、結(jié)實(shí)率、著粒密度、二次枝梗，結(jié)實(shí)率的變異系數(shù)較大，都達(dá)到了23%以上，其中二次枝梗的相對(duì)最高，為35.82%，說明此性狀的變異程度相對(duì)較大，而谷粒長(zhǎng)與谷粒寬則相對(duì)較小，分別為8.08%和7.06%，變異程度較小。通過方差分析表明，各性狀間均達(dá)到了極顯著的水平，說明269份材料各性狀間都有很大的遺傳差異。遺傳相關(guān)性分析結(jié)果

顯示，各數(shù)量性狀間大部分存在極顯著或顯著的關(guān)系，其中每穗總粒數(shù)與二次枝梗的正相關(guān)系數(shù)最大，谷粒寬與谷粒長(zhǎng)寬比負(fù)相關(guān)系數(shù)最大。陳小龍等對(duì)寧夏的60份種質(zhì)資源的16個(gè)表型性狀進(jìn)行遺傳相關(guān)分析，結(jié)果表明各性狀間也呈現(xiàn)出復(fù)雜的相互關(guān)系[12]。遺傳多樣性指數(shù)表明，質(zhì)量性狀的遺傳多樣性指數(shù)（H′）平均在0.5以下，數(shù)量性狀的遺傳多樣性指數(shù)（H′）平均在2.0左右，明顯高于質(zhì)量性狀的多樣性指數(shù)（H′），這與賀治州等研究的熱帶水稻優(yōu)異種質(zhì)資源表型遺傳多樣性的結(jié)果[10]一致，說明數(shù)量性狀的遺傳多樣性大，而數(shù)量性狀中以一次枝梗（2.09）的最高，質(zhì)量性狀中以穗立性狀（0.62）最高。聚類結(jié)果顯示，以歐式距離0.84為閾值，可將269份水稻分成四大類，每一類在一些性狀上較為獨(dú)特，大部分聚在了第Ⅳ類，占到了總數(shù)的71.38%，不同地理來源水稻的聚類結(jié)果表明，俄羅斯與其他不同地方種質(zhì)資源的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，日本、韓國(guó)、中國(guó)（遼寧和江蘇）的水稻種質(zhì)資源親緣關(guān)系較近，寧夏外引水稻的表型遺傳差異較大，親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，為育種家在選擇親本上提供理論依據(jù)，可作為拓寬寧夏水稻遺傳基礎(chǔ)的良好資源。利用表型性狀來檢測(cè)遺傳變異是最比較簡(jiǎn)便易行的方法[13-15]，能夠在短期內(nèi)對(duì)所研究材料的遺傳變異水平有個(gè)基本的認(rèn)識(shí)，但是表型性狀易受環(huán)境和基因顯隱性的影響，若要更準(zhǔn)確，深入地了解，今后還得結(jié)合SSR分子標(biāo)記[16-25]進(jìn)行進(jìn)一步地檢測(cè)。

[HS2*1][HT8.5H]參考文獻(xiàn)：

[1]李睿，譚學(xué)林. 水稻種質(zhì)資源遺傳多樣性保護(hù)和利用研究進(jìn)展[J]. 福建稻麥科技，2005，23（1）：33-35.

[2]王興盛. 寧夏水稻[J]. 北方水稻，2007（1）：19-22，31.

[3]陳英華，李紅宇，侯昱銘，等. 東北地區(qū)水稻種質(zhì)資源遺傳多樣性分析[J]. 華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2009，24（3）：165-173.

[4]Xinghua Wei，Xiaoping Yuan，Hanyong Yu，et al. Temporal changes in SSR allelic diversity of major rice cultivars in China[J]. Journal of Genetics and Genomics，2009，36（6）：363-370.

[5]Zhao K Y，Tung C W，Eizenga G C，et al. Genome-wide association mapping reveals a rich genetic architecture of complex traits in Oryza sativa[J]. Nature Communication，2011，2（467）：1-10.

[6]Glaszmann J C，Kilian B，Upadhyaya H D，et al. Accessing genetic diversity for crop improvement[J]. Current Opinion Plant Biology，2010，13（2）：167-173.

[7]劉煒，李自超，史延麗，等. 利用SSR標(biāo)記進(jìn)行粳稻品種的遺傳多樣性研究[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2005，18（5）：7-11.

[8]甘曉燕，李苗，關(guān)雅靜，等. 寧夏89份粳稻種質(zhì)資源遺傳多樣性的SSR分析[J]. 西北植物學(xué)報(bào)，2009，29（9）：1772-1778.

[9]馬靜，孫建昌，王興盛，等. 寧夏水稻選育品種遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析[J]. 西北植物學(xué)報(bào)，2011，31（5）：929-934.[ZK）]

[10]賀治州，尹民，謝振宇，等. 熱帶水稻優(yōu)異種質(zhì)資源的表型遺傳多樣性分析[J]. 熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，34（9）：37-42.

[11]李自超，張洪亮，曾亞文，等. 云南稻種資源表型遺傳多樣性的研究[J]. 作物學(xué)報(bào)，2001，27（6）：832-837.

[12]陳小龍，馬利奮，李培富，等. 寧夏粳稻種質(zhì)資源表型性狀遺傳多樣性分析[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2013，29（33）：43-49.

[13]馬琳，余顯權(quán)，趙福勝. 貴州地方水稻品種的SSR遺傳多樣性分析[J]. 中國(guó)水稻科學(xué)，2010，24（3）：237-243.

[14]楊靜，劉海英，錢春榮，等. 黑龍江省水稻品種SSR標(biāo)記遺傳多樣性分析[J]. 華北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，39（6）：1-10.

[15][JP3]趙慶勇，張亞東，朱鎮(zhèn)，等. 采用SSR標(biāo)記和表型性狀聚類對(duì)雜交粳稻親本的遺傳多樣性研究[J]. 雜交水稻，2010，25（4）：68-74.

[16]張麗娜，曹桂蘭，韓龍植. 利用SSR標(biāo)記揭示中國(guó)粳稻地方品種遺傳多樣性[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，45（3）：405-413.

[17]李紅宇，侯昱銘，陳英華，等. 用SSR標(biāo)記評(píng)估東北三省水稻推廣品種的遺傳多樣性[J]. 中國(guó)水稻科學(xué)，2009，23（4）：383-390.

[18]楊學(xué)輝，袁潔，陳小均，等. 貴州旱稻種質(zhì)資源的SSR遺傳多樣性分析[J]. 分子植物育種，2009，7（5）：890-896.

[19]楊致榮，李潤(rùn)植，魏興華. 利用SSR標(biāo)記進(jìn)行粳稻品種的遺傳多樣性研究[J]. 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2008，28（4）：405-408.

[20]劉傳光，張桂權(quán). 用SSR標(biāo)記分析1949-2005年華南地區(qū)常規(guī)秈稻主栽品種遺傳多樣性及變化趨勢(shì)[J]. 作物學(xué)報(bào)，2010，36（11）：1843-1852.

[21]楊進(jìn). SSR標(biāo)記術(shù)在植物遺傳多樣性研究上的應(yīng)用[J]. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)科學(xué)，2006，22（7）：90-94.

[22][JP3]倪先林，趙甘霖，劉天朋，等. SSR分子標(biāo)記在糯高粱種質(zhì)資源遺傳多樣性分析中的應(yīng)用[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2015，31（1）：16-22.

[23]馮英娜，柳李旺，劉衛(wèi)東，等. 茄子SSR遺傳多樣性及其農(nóng)藝性狀的關(guān)聯(lián)分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2014，30（4）：839-847.

[24]高翔，龐紅喜，裴阿衛(wèi). 分子標(biāo)記技術(shù)在植物遺傳多樣性研究中的應(yīng)用[J]. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，36（4）：356-359.

[25]程本義，吳偉，夏俊輝，等. 利用微衛(wèi)星標(biāo)記分析浙江省今年來主要水稻品種的遺傳多樣性[J]. 中國(guó)水稻科學(xué)，2009，23（5）：551-554.