劉向陽(yáng)++許洪勇

摘 要：使用氣相色譜法同時(shí)測(cè)定了糕點(diǎn)中的富馬酸二甲酯和甜蜜素，采用甲醇作為提取液，提取后用甲醇和乙酸銨溶液制作流動(dòng)相后發(fā)現(xiàn)，甜蜜素與富馬酸二甲酯明顯分離。甜蜜素與富馬酸二甲酯標(biāo)定時(shí)線性關(guān)系擬合良好，加標(biāo)回收率較高，且比較穩(wěn)定，處于國(guó)家要求的范圍內(nèi)。因此，使用該方法同時(shí)測(cè)定甜蜜素與富馬酸二甲酯的準(zhǔn)確性較高。

關(guān)鍵詞：氣相法；甜蜜素；富馬酸二甲酯；提取劑

中圖分類(lèi)號(hào)：TS207.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.15913/j.cnki.kjycx.2017.01.115

糕點(diǎn)是人們常用的食品之一，甜蜜素和富馬酸二甲酯是糕點(diǎn)中常見(jiàn)的2種物質(zhì)，也是國(guó)家食品安全重點(diǎn)監(jiān)測(cè)的物質(zhì)。在對(duì)食品中的富馬酸二甲酯和甜蜜素進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，常使用氣相色譜法。在檢測(cè)過(guò)程中，糕點(diǎn)的脂肪會(huì)對(duì)檢測(cè)精度產(chǎn)生影響，具體表現(xiàn)為脂肪較多會(huì)使糕點(diǎn)難以溶解和粉碎，增加了提取難度，且脂肪等生物大分子會(huì)使峰中出現(xiàn)雜峰，進(jìn)而影響檢測(cè)精度。此外，甜蜜素的檢測(cè)還要事先排出糕點(diǎn)中的水分。本文經(jīng)過(guò)預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)后采用甲醇作為提取劑，先過(guò)濾掉脂肪，再進(jìn)行檢測(cè)，以提高檢測(cè)準(zhǔn)確度。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與試劑

實(shí)驗(yàn)材料包括甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)樣品（純度為98%）、富馬酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)樣品（純度99%）、甲醇、乙酸銨溶液。

1.2 儀器與設(shè)備

實(shí)驗(yàn)采用美國(guó)Agilent的氣相色譜儀、振蕩器、電子天平、超聲波機(jī)、渦旋器。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品制備

分別稱量0.10 g的標(biāo)準(zhǔn)富馬酸二甲酯樣品、甜蜜素樣品放入容積為100 mL的容量瓶中，用甲醇進(jìn)行溶解；加水至100mL，使用振蕩器振蕩混勻，得到質(zhì)量濃度為1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)樣液；稀釋溶液得到質(zhì)量濃度為50 μg/mL、100 μg/mL、150 μg/mL、200 μg/mL、250 μg/mL、300 μg/mL的一系列梯度標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用于后續(xù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.2 樣品制備及處理

實(shí)驗(yàn)前，先稱取樣品質(zhì)量，后將樣品放置在通風(fēng)處自然干燥；將樣品放入真空干燥箱烘干，除去樣品中的水分，以防水分對(duì)甜蜜素的檢測(cè)精度造成影響，烘干后再次稱取樣品質(zhì)量，計(jì)算出樣品的含水量；將樣品均勻粉碎，稱取烘干后的樣品10.0 g放置于25 mL的比色管內(nèi)，滴加少量蒸餾水對(duì)樣品進(jìn)行溶解，完全溶解后加入甲醇對(duì)樣品中的富馬酸二甲酯和甜蜜素進(jìn)行提取；使用渦旋器使溶液完全混勻，使用超聲波機(jī)進(jìn)行超聲提取，加水定容到刻度線，定容后混合搖勻；將溶液倒入50 mL的離心管中，離心5～10 min，用0.25 μm的濾膜過(guò)濾，并對(duì)濾液進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用Agilent HP-5柱操作時(shí)，甜蜜素和富馬酸二甲酯二者會(huì)明顯分離，且峰形清晰，便于觀察和分析。此外，在進(jìn)行升溫時(shí)，先以20 ℃/min的速度升至80 ℃保溫1 min后，再以20 ℃/min的速度升溫到155 ℃保持3 min，從而得到比較尖銳的峰形。出峰時(shí)為了避免其他物質(zhì)對(duì)峰形的影響，可以延遲出峰時(shí)間。且使用較大口徑的毛細(xì)管柱能使甜蜜度檢測(cè)得到較高的檢出限，使之更加耐受。

2.2 樣品前處理

對(duì)于富馬酸二甲酯而言，脂肪等大分子會(huì)對(duì)最后的峰形有影響，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)雜峰，不利于分析結(jié)果；甜蜜素、脂肪會(huì)使糕點(diǎn)難于溶解和粉碎，為提取增加了難度，且糕點(diǎn)中的水分也會(huì)產(chǎn)生誤差，因此，樣品檢測(cè)前應(yīng)置于真空烘箱中烘干去除水分。同時(shí)，用甲醇提取后要用有機(jī)濾膜進(jìn)行過(guò)濾，濾掉脂肪等生物大分子，且在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，過(guò)濾對(duì)提取效果沒(méi)有明顯的影響，且過(guò)濾能使峰形明顯無(wú)雜峰，因此，可以使用過(guò)濾的方法提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

2.3 提取溶劑的選擇

大量文獻(xiàn)表明，甲醇、乙腈等多種溶劑都對(duì)甜蜜素和富馬酸二甲酯有提取作用，而具體的提取差異并未說(shuō)明。因此，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)先對(duì)四類(lèi)常用的提取劑對(duì)富馬酸二甲酯和甜蜜素的提取效果進(jìn)行研究和對(duì)比，從而為本次實(shí)驗(yàn)中提取劑的選擇提供參考。四類(lèi)提取劑對(duì)甜蜜素和富馬酸二甲酯的提取效果如圖1所示（實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，控制樣品的質(zhì)量、加入的提取劑的量等保持不變）。

通過(guò)圖1可以明顯看出，在四類(lèi)常用的提取劑中，甲醇對(duì)富馬酸二甲酯和甜蜜素的提取率大幅度高于其他幾種提取劑。綜合考慮提取的效率和成本后決定，本次檢測(cè)試驗(yàn)中選用甲醇來(lái)提取糕點(diǎn)中的富馬酸二甲酯和甜蜜素。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)樣品曲線

對(duì)標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行色譜檢測(cè)，將得到的富馬酸二甲酯及甜蜜素的色譜進(jìn)行分離，二者的色譜圖分離完好，具體色譜圖如圖2和圖3所示。

由表1可以看出，得到的甜蜜素和富馬酸二甲酯線性擬合中相關(guān)系數(shù)都達(dá)到了0.999，擬合度較高，基本能滿足本次檢測(cè)的要求。

2.5 回收率試驗(yàn)

在糕點(diǎn)中分別添加10 mg/kg、25 mg/kg和50 mg/kg三個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)梯度的富馬酸二甲酯及8 mg/kg、16 mg/kg、24 mg/kg的甜蜜素進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，分別計(jì)算富馬酸二甲酯和甜蜜素的加標(biāo)回收率得到的結(jié)果如表2所示。

由表2中的結(jié)果可以看出，甜蜜素的回收率在99.231%～102%，富馬酸二甲酯的回收率在95.676%～99.610%，二者的回收率都滿足國(guó)家要求。由此可見(jiàn)，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度較高，可以作為糕點(diǎn)中富馬酸二甲酯和甜蜜素同時(shí)檢測(cè)的參考。

3 結(jié)束語(yǔ)

本次實(shí)驗(yàn)主要對(duì)用氣相法同時(shí)檢測(cè)糕點(diǎn)中富馬酸二甲酯和甜蜜素進(jìn)行了探討。實(shí)驗(yàn)前，為了減少雜峰，對(duì)糕點(diǎn)進(jìn)行了預(yù)處理，比如在烘箱中烘干水分、使用過(guò)濾膜濾去生物大分子雜質(zhì)。此外，對(duì)常用的四類(lèi)提取劑提取富馬酸二甲酯和甜蜜素的效果進(jìn)行了比較，出于對(duì)成本和效率的考慮，最終選擇甲醇為提取劑；對(duì)已配制好的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行了色譜檢測(cè)和回歸曲線的繪制，得到的相關(guān)系數(shù)都達(dá)到了0.999，擬合度較高，能滿足檢測(cè)要求；加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)得到的回收率均大于90%，滿足國(guó)家規(guī)定，這種方法可以用在糕點(diǎn)中富馬酸二甲酯和甜蜜素的同時(shí)檢測(cè)中，檢測(cè)結(jié)果有一定的準(zhǔn)確性。但本實(shí)驗(yàn)方法還有一些不足，比如還未確定大口徑毛細(xì)管對(duì)富馬酸二甲酯的檢測(cè)精度是否有影響，這些還需要進(jìn)一步探討。

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〔編輯：張思楠〕