張歲，郭力紅，賈蓓，王海舫，柳立平，馬文波，佟立新，李保欣

(河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院，石家莊050031)

臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與臍血干細(xì)胞移植治療慢性肝功能衰竭對(duì)比觀察

張歲，郭力紅，賈蓓，王海舫，柳立平，馬文波，佟立新，李保欣

(河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院，石家莊050031)

目的 對(duì)比觀察臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與臍血干細(xì)胞移植治療慢性肝功能衰竭(后簡(jiǎn)稱(chēng)肝衰竭)的療效。方法 慢性肝衰竭患者(乙型肝炎病毒感染進(jìn)展而來(lái))47例，分為A組25例、B組22例。A、B組在內(nèi)科綜合治療的基礎(chǔ)上分別采用臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、臍血干細(xì)胞經(jīng)外周靜脈輸注治療。分別于移植前及移植后2、4、12、24周檢測(cè)兩組血清谷丙氨酸轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、白蛋白(ALB)、凝血酶原活動(dòng)度(PTA)并進(jìn)行MELD評(píng)分。觀察患者臨床癥狀改善情況、干細(xì)胞移植后不良反應(yīng)、肝癌發(fā)生情況、患者生存情況。結(jié)果 兩組移植后2、4、12、24周血清ALT、TBIL和MELD評(píng)分均較移植前明顯降低，ALB和PTA均較移植前明顯升高(P均<0.05)。干細(xì)胞移植4周后，兩組乏力、食欲、腹脹及腹水情況均較移植前改善，兩組癥狀改善情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨訪(fǎng)至移植后24周，A組生存20例，死亡5例，生存率為80.00%；B組生存18例，死亡4例，生存率81.82%。兩組生存率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組在移植及隨訪(fǎng)過(guò)程中均未發(fā)現(xiàn)與干細(xì)胞治療相關(guān)的不良反應(yīng)，無(wú)肝癌發(fā)生。結(jié)論 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與臍血干細(xì)胞移植治療慢性肝衰竭均可改善患者的肝功能、減輕臨床癥狀且應(yīng)用較為安全，兩種方法療效相當(dāng)。

肝功能衰竭；臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞；臍血干細(xì)胞；干細(xì)胞移植；乙型肝炎病毒

肝功能衰竭(后簡(jiǎn)稱(chēng)肝衰竭)是多種因素引起的嚴(yán)重肝臟損害，導(dǎo)致肝臟合成、解毒、排泄和生物轉(zhuǎn)化等功能發(fā)生嚴(yán)重障礙或失代償，出現(xiàn)以凝血功能障礙、黃疸、肝性腦病、腹水等為主要表現(xiàn)的一組臨床癥候群[1]，病死率極高。內(nèi)科保守治療效果不理想，肝移植是惟一有效的治療方式，但限于供肝源缺乏、手術(shù)費(fèi)用高及移植后免疫排斥反應(yīng)等未得到廣泛應(yīng)用。近年來(lái)，干細(xì)胞移植技術(shù)的研究為肝衰竭的治療開(kāi)辟了新途徑。臨床試驗(yàn)證實(shí)干細(xì)胞移植治療肝衰竭安全有效，可提高患者的生存率[2～6]，其中臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和臍血干細(xì)胞來(lái)源豐富、繁殖能力強(qiáng)、繁殖速度快，具有強(qiáng)大的免疫調(diào)節(jié)能力、組織器官修復(fù)能力和多向分化潛能，已成為臨床應(yīng)用的重要選擇。本研究對(duì)比觀察了臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與臍血干細(xì)胞移植治療慢性肝衰竭的效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2012年9月～2015年9月我科收治的慢性肝衰竭患者47例，符合2006年《肝衰竭診治指南》中慢性肝衰竭的診斷標(biāo)準(zhǔn)。入選患者肝衰竭均為乙型肝炎病毒感染進(jìn)展而來(lái)。排除標(biāo)準(zhǔn):合并甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、EB病毒、巨細(xì)胞病毒、HIV感染者，自身免疫性肝炎、酒精性肝炎、藥物性肝炎患者，嚴(yán)重心肺腦疾病及衰竭狀態(tài)患者，肝癌或其他臟器腫瘤患者，高度過(guò)敏體質(zhì)者，有精神疾病者，懷孕及哺乳期患者。采用單盲、平行對(duì)照分組，分為A組25例、B組22例。A組男18例、女7例，年齡35～67(52.3±8.4)歲，MELD評(píng)分(27.01±4.16)分，HBV DNA>104IU/mL 14例、102～104IU/mL 6例、<102IU/mL 5例；B組男16例、女6例，年齡33～63(51.8±8.9)歲，MELD評(píng)分(26.45±2.44)分，HBV DNA>104IU/mL 12例、102～104IU/mL 6例、<102IU/mL 4例。兩組性別、年齡、MELD評(píng)分及HBV DNA水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究獲醫(yī)院倫理委員會(huì)許可，所有患者簽署知情同意書(shū)。

1.2 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞及臍血干細(xì)胞的的制備 選擇健康產(chǎn)婦，排除艾滋病、梅毒、乙型肝炎、丙型肝炎及其他傳染性疾病，無(wú)病理妊娠者，獲產(chǎn)婦知情同意。采用貼壁培養(yǎng)法分離臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞傳代到第3代，鏡下觀察見(jiàn)細(xì)胞貼壁良好、融合密度達(dá)85%，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表型鑒定，收集培養(yǎng)至第4代的干細(xì)胞；產(chǎn)婦胎兒娩出斷臍后，采用封閉式采血法采臍血，每袋采臍血60～140 mL，采用細(xì)胞處理試劑盒分離臍血干細(xì)胞，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)細(xì)胞表型進(jìn)行鑒定，細(xì)胞活性大于95%，細(xì)胞內(nèi)毒素檢測(cè)陰性。

1.3 干細(xì)胞移植方法 兩組均在內(nèi)科常規(guī)治療的基礎(chǔ)上采用干細(xì)胞移植治療。A、B組分別經(jīng)外周靜脈輸注臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和臍血干細(xì)胞，輸注前20 min均給予苯海拉明注射液20 mg肌肉注射，每次回輸?shù)母杉?xì)胞數(shù)量為(1.4～2.3)×106/kg，用0.9%氯化鈉注射液稀釋至100 mL，靜滴。每半月輸注1次，共輸注3次。

1.4 觀察方法 分別于移植前和移植后2、4、12、24周檢測(cè)患者血清谷丙氨酸轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、白蛋白(ALB)、血漿凝血酶原活動(dòng)度(PTA)并進(jìn)行MELD評(píng)分。觀察患者臨床癥狀改善情況、干細(xì)胞移植后不良反應(yīng)、肝癌發(fā)生情況、患者生存情況。

2 結(jié)果

2.1 兩組干細(xì)胞移植前后生化指標(biāo)和MELD評(píng)分比較 兩組移植后2、4、12、24周血清ALT、TBIL和MELD評(píng)分均較移植前明顯降低，ALB和PTA均較移植前明顯升高(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組干細(xì)胞移植前后ALT、TBIL、ALB、PTA和MELD評(píng)分比較

注：與本組移植前相比，**P<0.05，*P<0.01。

2.2 患者臨床癥狀改善情況 干細(xì)胞移植4周后，兩組乏力、食欲、腹脹及腹水情況均較移植前改善，其中A組分別為19、20、19、18例，B組分別為18、18、17、16例，兩組癥狀改善情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3 患者生存情況 隨訪(fǎng)至移植后24周，A組生存20例，死亡5例(上消化道出血2例、肝性腦病2例、肝腎綜合征1例)，生存率為80.00%；B組生存18例，死亡4例(消化道出血2例、肝性腦病1例、肝腎綜合征1例)，生存率81.82%。兩組生存率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.4 不良反應(yīng) 兩組在干細(xì)胞移植及隨訪(fǎng)過(guò)程中均未發(fā)現(xiàn)與干細(xì)胞治療相關(guān)的不良反應(yīng)，無(wú)肝癌發(fā)生。

3 討論

慢性肝衰竭是在肝硬化的基礎(chǔ)上，出現(xiàn)以腹水或肝性腦病等為主的慢性肝功能失代償?shù)呐R床表現(xiàn)[1]，是終末期肝病患者的主要死亡原因，內(nèi)科綜合治療效果不理想。干細(xì)胞是一類(lèi)具有不斷自我繁殖和分化能力的原始細(xì)胞，具有免疫調(diào)節(jié)和靶向治療的功能，為肝衰竭的治療提供了新的方向。目前臨床上用以治療肝衰竭的干細(xì)胞主要是骨髓干細(xì)胞、外周血干細(xì)胞、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和臍血干細(xì)胞。骨髓干細(xì)胞取材相對(duì)不易，對(duì)于體弱和老年患者不適用；外周血干細(xì)胞移植在骨髓干細(xì)胞動(dòng)員期間，白細(xì)胞明顯增加，存在心腦血管血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)[7]，臨床應(yīng)用受到一定限制；臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與臍血干細(xì)胞以其取材方便、來(lái)源廣泛、干細(xì)胞含量豐富、自身繁殖能力強(qiáng)、繁殖速度快、表面抗原性弱、無(wú)需配型等優(yōu)點(diǎn)受到廣泛關(guān)注。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源于臍帶，主要是間充質(zhì)干細(xì)胞；臍血干細(xì)胞來(lái)源于臍血，有造血干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞。臨床試驗(yàn)證實(shí)這兩種干細(xì)胞移植治療肝衰竭均可改善患者肝功能，降低死亡率，安全可靠[4,5]，但對(duì)于兩種干細(xì)胞移植的療效是否存在差異，尚需進(jìn)一步探討。

本研究發(fā)現(xiàn)，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞和臍血干細(xì)胞移植治療慢性肝衰竭的療效無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩組患者移植后ALB、PTA均較移植前升高，ALT、TBIL、MELD評(píng)分均較移植前降低，表明臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與臍血干細(xì)胞移植均可改善患者的肝功能。推測(cè)機(jī)制為：①干細(xì)胞通過(guò)歸巢能力到達(dá)受損的肝臟[8]，在肝臟微環(huán)境中分化為功能性肝細(xì)胞[9～12]發(fā)揮作用，促進(jìn)肝功能恢復(fù)；②干細(xì)胞通過(guò)分泌營(yíng)養(yǎng)因子，抑制肝細(xì)胞凋亡，促進(jìn)肝細(xì)胞再生，延緩肝纖維化進(jìn)展[13～15]；③干細(xì)胞具有抗氧化活性，能夠起到減輕肝損傷的作用[16,17]；④干細(xì)胞可減少CD4+T細(xì)胞的浸潤(rùn)和激活、抑制Th1功能、誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞生成、調(diào)控樹(shù)突細(xì)胞功能等[18，19]，減輕肝臟免疫損傷和炎癥反應(yīng)。

乙型肝炎病毒相關(guān)肝衰竭病情嚴(yán)重、并發(fā)癥多、病死率高[20]。本研究對(duì)患者進(jìn)行24周的隨訪(fǎng)，結(jié)果顯示干細(xì)胞移植后兩組患者生存率均在80%以上，說(shuō)明臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植與臍血干細(xì)胞移植均可有效提高患者生存率。既往有研究[21]報(bào)道干細(xì)胞可通過(guò)直接轉(zhuǎn)化、抑制抗腫瘤免疫反應(yīng)和對(duì)腫瘤細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)作用等導(dǎo)致腫瘤發(fā)生；但也有學(xué)者[3]認(rèn)為干細(xì)胞移植可能對(duì)肝硬化患者有更好的保護(hù)作用，防止肝癌發(fā)生。我們?cè)谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)，兩組患者不僅臨床癥狀明顯改善，且未發(fā)生與干細(xì)胞治療相關(guān)的不良反應(yīng)，無(wú)肝癌發(fā)生，說(shuō)明干細(xì)胞移植治療的有效性和安全性均較好。

綜上所述，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與臍血干細(xì)胞經(jīng)外周靜脈移植治療慢性肝衰竭均可改善患者的肝功能、減輕臨床癥狀且應(yīng)用安全有效，兩種方法療效相當(dāng)。但本研究隨訪(fǎng)時(shí)間短、納入病例數(shù)量較少，后續(xù)仍需加大樣本量、進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪(fǎng)以驗(yàn)證上述結(jié)果。

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河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題(20150636)。

李保欣(E-mail: libaoxin111@126.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.03.030

R575.3

B

1002-266X(2017)03-0092-03

2016-09-23)