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家禽專用抗病毒藥物“優(yōu)凈”臨床劑量的確定

2017-02-25 05:45:24王玉堃王尚明林明明山東迅達(dá)康獸藥有限公司山東濟(jì)南250036
山東畜牧獸醫(yī) 2017年2期
關(guān)鍵詞:雛雞日齡陰性

王玉堃 王尚明 林明明 谷 穎 (山東迅達(dá)康獸藥有限公司 山東 濟(jì)南 250036)

家禽專用抗病毒藥物“優(yōu)凈”臨床劑量的確定

王玉堃 王尚明 林明明 谷 穎 (山東迅達(dá)康獸藥有限公司 山東 濟(jì)南 250036)

為研究優(yōu)凈對(duì)雞傳染性支氣管炎的防治效果,確定臨床用藥劑量。選用SPF雞胚測(cè)定雞傳染性支氣管炎病毒標(biāo)準(zhǔn)株M41型的ELD50以確定攻毒劑量;選用19日齡健康雛雞隨機(jī)分為8組,分別為預(yù)防組、治療組、陽性對(duì)照組與陰性對(duì)照組,其中前2組各設(shè)高劑量、中劑量、低劑量小組。19日齡時(shí)預(yù)防組開始用優(yōu)凈,連續(xù)5、21d時(shí)攻毒,待癥狀出現(xiàn)24h后,治療組開始用優(yōu)凈連續(xù)5d。期間進(jìn)行臨床觀察,測(cè)定不同日齡患病雛雞血清中的IFN-γ與TNF-β質(zhì)量濃度。臨床試驗(yàn)表明,預(yù)防組隨優(yōu)凈劑量加大,雞群的發(fā)病率逐漸降低;治療組隨優(yōu)凈劑量加大,雞群的治愈率逐漸提高。對(duì)人工感染雛雞血清中細(xì)胞因子含量變化的測(cè)定表明,預(yù)防組21日齡雛雞未攻毒時(shí),不同劑量小組的IFN-γ和TNF-β質(zhì)量濃度與陰性對(duì)照組比較均差異顯著;在用優(yōu)凈后的25、28日齡,IFN-γ質(zhì)量濃度顯著高于陰性、陽性對(duì)照組,但組間差異不顯著。治療組用優(yōu)凈2d后,用藥組之間IFN-γ質(zhì)量濃度無顯著差異,但TNF-β質(zhì)量濃度差異顯著;28、30日齡時(shí),IFN-γ、TNF-β的質(zhì)量濃度均顯著升高,并且與陰性、陽性對(duì)照組比較差異顯著。試驗(yàn)說明優(yōu)凈可以持續(xù)誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN-γ與TNF-β,發(fā)揮了調(diào)節(jié)免疫機(jī)能的作用,從而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù),以達(dá)到防治雞傳染性支氣管炎的效果。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果,暫定臨床推薦劑量為2.0ml/只,2次/d。

雞傳染性支氣管炎 IFN-γ TNF-β 優(yōu)凈

雞傳染性支氣管炎(Infectious bronchitis, IB)是由雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)引起的急性、接觸性傳染病,在雞呼吸道具有高度傳染性,臨床表現(xiàn)癥狀為:喘氣、咳嗽、打噴嚏、氣管啰音、流鼻涕。IBV表現(xiàn)不同的組織嗜性,分為呼吸道型、腎型和腺胃型,尤其是腎型傳染性支氣管炎(腎傳支)表現(xiàn)普遍[1~2]。IBV-M41型(IBV-M41)主要引起腎臟以及免疫系統(tǒng)病變,導(dǎo)致腎傳支,使水、鹽、藥物不能正常代謝,從而并發(fā)、繼發(fā)其他疾??;腎傳支的病程發(fā)展中涉及細(xì)胞因子IFN-γ與TNF-β[3~4]。感染IBV-M41雞體中的大多數(shù)CD4細(xì)胞與CD細(xì)胞均分泌II型IFN(IFN-γ),而IFN-γ通過誘發(fā)Th1細(xì)胞的免疫反應(yīng),可以保護(hù)機(jī)體免受細(xì)菌感染及病毒感染[3]。腫瘤壞死因子(TNF-β)可以介導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)和抗病毒功能,因而TNF與INF協(xié)同作用能激活機(jī)體內(nèi)的抗病毒途徑。因此,在人工感染雛雞血清中IFN-γ與TNF-β的動(dòng)態(tài)變化反映了機(jī)體對(duì)病毒的作用狀態(tài)及其變化。本研究參考文獻(xiàn)[4],由IBV-M41造模(起腎傳支),用優(yōu)凈對(duì)其治療,再檢驗(yàn)血清中IFN-γ與TNF-β的含量,從免疫學(xué)角度探討優(yōu)凈的防治效果并初步確定臨床治療劑量。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物及病毒株 SPF雞為19日齡無IB抗體健康嶺南黃雛雞,購自山東農(nóng)業(yè)大學(xué);試驗(yàn)前喂食無抗全價(jià)配合飼料,自由采食及飲水;及時(shí)剔除弱雛。飼養(yǎng)至21日齡備用。病毒株:IBV-M41,由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)何誠教授提供。

1.1.2 藥品 優(yōu)凈為4味藥材(板藍(lán)根9g、大青葉9g、黃連3g、淫羊藿6g)制成的口服液,其含生藥量為1g/ml。

1.1.3 主要試劑與儀器 紫外可見分光光度計(jì)(日本島津),離心機(jī)(長沙湘儀離心機(jī)有限公司,TDZ-WS型),雞IFN-γ試劑盒與TNF-β試劑盒(美國R&D公司)。

1.1.4 病毒的雞胚半數(shù)致死量(ELD50)測(cè)定 將復(fù)壯雞胚病毒液用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的生理鹽水進(jìn)行10倍系列稀釋,每個(gè)稀釋度接種6枚10日齡雞胚,每胚接種病毒液0.2ml。同時(shí)設(shè)生理鹽水對(duì)照組。石蠟封孔,在37℃培養(yǎng)1周,每8h照蛋1次,記錄雞胚生死情況:若血管萎縮、胚體卷曲不動(dòng),判定為死亡胚;若雞胚自然增大、血管自然增粗,判定為存活胚。根據(jù)文獻(xiàn)[5]計(jì)算ELD50為10-6.3/0.1ml,本研究以100ELD50/0.2ml的劑量人工感染21日齡雛雞。

1.2 方法

1.2.1 分組、造模及給藥 (1)選擇400只備用雞雛隨機(jī)分組,分為預(yù)防組、治療組、陰性對(duì)照組與陽性對(duì)照組;其中,預(yù)防組和治療組各設(shè)高、中與低3個(gè)不同劑量的藥品組(優(yōu)凈組)每組雞雛50只,共8組。(2)雞腎型傳染性支氣管炎的易感日齡是20~40日齡[6],本試驗(yàn)選擇在21日齡時(shí)攻毒(造模)。(3)預(yù)防組在攻毒前2d(第19日)開始按高(2.0ml/次)、中(1.0ml/次)與低(0.5ml/次)3個(gè)不同劑量分別給供試雞雛灌服優(yōu)凈,2次/d,連續(xù)用藥5d,于21、25和28日齡時(shí)采血備用;治療組在攻毒后24h雞群開始出現(xiàn)癥狀時(shí),按高(4.0ml/次)、中(2.0ml/次)與低(1.0ml/次)3個(gè)不同劑量,分別給供試雞雛灌服優(yōu)凈,2次/d,連續(xù)用藥5d,于25、28和30日齡時(shí)采血備用;陽性對(duì)照組在攻毒后不給任何藥物并隔離飼養(yǎng);陰性對(duì)照組則不攻毒、不給藥并隔離飼養(yǎng);對(duì)照組的采血時(shí)間均為21、25、28和30日齡。

1.2.2 測(cè)定IFN-γ和TNF-β質(zhì)量濃度 每只雞的采血量均為10mL,血樣4℃放置12h后,離心分離血清(2500r/min,15min)。IFN-γ和TNF-β試劑盒操作說明,測(cè)定血清中的細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-β的吸光度,以此計(jì)算該2種細(xì)胞因子的質(zhì)量濃度(ng/ml)。

1.2.3 優(yōu)凈治療效果判定指標(biāo)與判定 (1)發(fā)病率:在試驗(yàn)期間出現(xiàn)咳嗽、打噴嚏、流鼻涕、呼吸困難、張口喘息等IB典型癥狀者,判定為發(fā)病。發(fā)病率 = 發(fā)病雞只數(shù)/該組試驗(yàn)雞總只數(shù)×100%。(2)死亡率:在試驗(yàn)期間出現(xiàn)上述IB典型癥狀并死亡,且尸體剖檢可見氣管、鼻道內(nèi)有漿液性、卡他性和干酪樣的分泌物,出現(xiàn)氣管黏膜增厚、水腫等IB典型病理變化者,判定為感染死亡。死亡率 = 死亡雞只數(shù)/該組試驗(yàn)雞總只數(shù)×100%。(3)保護(hù)率:在試驗(yàn)期間,預(yù)防組未死亡雞均判定為保護(hù)。保護(hù)率 = 未死亡雞只數(shù)/該組試驗(yàn)雞總只數(shù)×100%。(4)治愈率:在試驗(yàn)期間,治療組病雞經(jīng)給藥后精神狀態(tài)、食欲恢復(fù)正常,不再出現(xiàn)臨床癥狀者,判定為治愈。治愈率=治愈病雞只數(shù)/該組試驗(yàn)雞總只數(shù)×100%。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)方法 用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Means±SD)表示。P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P<0.05表示差異顯著,P<0.0l表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 優(yōu)凈對(duì)人工感染IBV-M41雛雞的預(yù)防與治療效果

2.1.1 預(yù)防效果 由表1可以看出,在同一采血時(shí)間,人工感染IBV-M41雛雞血清中的IFN-γ質(zhì)量濃度均隨用藥劑量的增加而升高,且均與陰性對(duì)照組有顯著差異(P< 0.05),并在28日齡達(dá)到極顯著水平(P<0.01),但不同劑量組間差異并不顯著(P>0.05)。TNF-β質(zhì)量濃度的變化規(guī)律與IFN-γ的基本相同,但于25日齡時(shí)與陰性對(duì)照組的差異達(dá)到極顯著水平(P<0.01)。由此可知,優(yōu)凈可使雛雞血清中IFN-γ與TNF-β的質(zhì)量濃度升高,且日齡越大,升高幅度越大。這表明優(yōu)凈對(duì)IFN-γ與TNF-β有誘生作用。

表1 優(yōu)凈對(duì)預(yù)防組人工感染IBV-M41雛雞血清中IFN-γ和TNF-β變化的影響

2.1.2 治療效果 (1)由表2可以看出,治療組中,各用藥組雛雞血清中的IFN-γ質(zhì)量濃度在25日齡時(shí)與陰性對(duì)照組比較差異顯著(P<0.05),但顯著低于陽性對(duì)照組(P<0.05)。陽性對(duì)照組雛雞的IFN-γ質(zhì)量濃度高于陰性對(duì)照組,且差異顯著(P<0.05)。說明3個(gè)用藥組在用藥過程中對(duì)IFN-γ的影響不大,但I(xiàn)BV-M41對(duì)其影響較大,使其質(zhì)量濃度明顯升高(對(duì)照組)。28日齡時(shí),3個(gè)用藥組雛雞血清中IFN-γ質(zhì)量濃度顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05),且治療組中高、中劑量組的IFN-γ質(zhì)量濃度顯著高于陽性對(duì)照組(P<0.05);高劑量組顯著高于低劑量組(P<0.05)。說明在用藥結(jié)束后,雛雞血清中的IFN-γ質(zhì)量濃度明顯升高,藥物劑量高低使IFN-γ出現(xiàn)了組間差異。30日齡時(shí),3個(gè)用藥組雛雞血清中的IFN-γ質(zhì)量濃度顯著高于陰性、陽性對(duì)照組(P<0.05),說明在用藥過程中優(yōu)凈對(duì)IFN-γ影響不顯著,但是在1個(gè)用藥周期(5d)結(jié)束后對(duì)IFN-γ具有明顯的誘生作用。(2)由表2還可知,25日齡時(shí),3個(gè)用藥組雛雞血清中TNF-β的質(zhì)量濃度顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05),且高、中劑量組與陰性對(duì)照組比較達(dá)極顯著差異水平(P<0.01),高、中劑量組雛雞血清中TNF-β的質(zhì)量濃度也顯著高于陽性對(duì)照組(P<0.05),且高劑量組與低劑量組組間差異顯著(P<0.05)。28日齡時(shí),3個(gè)用藥組雛雞血清中TNF-β的質(zhì)量濃度均顯著高于陰性、陽性對(duì)照組(P<0.05),且高、中劑量組與陰性對(duì)照組比較差異顯著(P<0.05)。30日齡時(shí),3個(gè)用藥組雛雞血清中TNF-β的質(zhì)量濃度均顯著高于陰性對(duì)照組,高、中劑量組顯著高于陽性對(duì)照組(P<0.05),但組間差異不顯著。說明治療組雛雞血清中的TNF-β質(zhì)量濃度明顯升高,且高劑量組顯著高于低劑量組。

綜合以上結(jié)果,在治療試驗(yàn)中,優(yōu)凈對(duì)IFN-γ的誘生作用不明顯,但TNF-β的質(zhì)量濃度卻明顯升高,說明優(yōu)凈有誘生TNF-β的功能。在治療結(jié)束后,IFN-γ和TNF-β的質(zhì)量濃度顯著升高,表明優(yōu)凈可以使IFN-γ和TNF-β的質(zhì)量濃度持續(xù)升高。

表2 優(yōu)凈對(duì)治療組人工感染IBV-M41雛雞血清中IFN-γ和TNF-β變化的影響

2.2 優(yōu)凈對(duì)人工感染IBV-M41雛雞的臨床治療效果

在預(yù)防試驗(yàn)和治療試驗(yàn)中,用藥組雞群整體精神狀態(tài)良好,飲水量及采食量基本正常,僅個(gè)別雞只表現(xiàn)出精神沉郁。陽性對(duì)照組雞群精神沉郁,采食、飲水量下降甚至廢絕,甩鼻,咳嗽,出現(xiàn)石灰樣糞便,試驗(yàn)過程中接近半數(shù)死亡。陰性對(duì)照組隔離飼養(yǎng),采食與飲水正常,未見臨床變化。剖檢發(fā)現(xiàn),治療組雞群的腎臟微腫,但無花斑腎出現(xiàn),輸尿管內(nèi)無尿酸鹽沉積,糞便正常。由表3可以看出,預(yù)防試驗(yàn)中,隨藥物劑量增大,雞群發(fā)病率逐漸降低;治療試驗(yàn)中,隨藥物劑量增大,雞群治愈率逐漸提高。說明本研究的優(yōu)凈對(duì)感染IBV-M41的雞群具有較好的防治效果,得出臨床推薦劑量為2.0ml/只,2次/d。

表3 優(yōu)凈對(duì)人工感染IBV-M41雛雞的臨床治療效果 (%)

3 討論

(1)本研究發(fā)現(xiàn),優(yōu)凈對(duì)腎型雞傳染性氣管炎有一定療效;用藥后雛雞血清中的IFN-γ和TNF-β的質(zhì)量濃度明顯升高;治療試驗(yàn)表明,優(yōu)凈能持續(xù)誘生IFN-γ和TNF-β,從而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)作用。本研究結(jié)果與文獻(xiàn)[7]結(jié)果一致。(2)文獻(xiàn)[8]報(bào)道體外試驗(yàn)表明,IFN-γ能活化巨噬細(xì)胞,通過產(chǎn)生腫瘤壞死因子,如TNF等細(xì)胞因子的機(jī)制而發(fā)揮作用,從而使得TNF的含量也相應(yīng)增加。文獻(xiàn)[3]表明,IFN-γ具有抗病毒和抗增殖活性,能保護(hù)細(xì)胞免受病毒感染,對(duì)正常細(xì)胞具有重要的抗增生活性,并能調(diào)節(jié)體液免疫。文獻(xiàn)[4]表明,由IFN-γ誘導(dǎo)產(chǎn)生的TNF可以選擇性地溶解感染病毒的細(xì)胞以限制病毒繁殖,IFN-γ能與TNF-β協(xié)調(diào)作用激活體內(nèi)抗病毒途徑。文獻(xiàn)佐證本研究中的優(yōu)凈具有抗病毒作用。(3)根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果,選擇治療試驗(yàn)中的中劑量(2.0ml/只)作為臨床推薦劑量。

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S853.91

A

1007-1733(2017)02-0005-03

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