何深(開封市中心醫(yī)院 血液科 河南 開封 475000)

91例彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤與EB病毒的關(guān)系研究

何深
(開封市中心醫(yī)院 血液科 河南 開封 475000)

目的 研究彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)與EB病毒的關(guān)系。方法 將篩選的91例結(jié)外DLBCL患者標(biāo)本制成組織芯片，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測BCL-6、CD10和MUM1水平，將病例分為非生發(fā)中心型(non-GCB)、生發(fā)中心型(GCB)兩個免疫亞型。再通過原位雜交技術(shù)檢測兩個亞型DLBCL和20例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生組織中EB病毒編碼的小核糖核酸(EBERs)的表達。結(jié)果 20例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生組織中EBERs均為陰性，91例DLBCL中30例EBERs陽性表達，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。91例DLBCL中，GCB型44例(48.4%)，non-GCB型47例(51.6%)；EBERs陽性表達30例(33.0%)，其中GCB組中10例EBERs陽性(22.7%)，non-GCB組中20例陽性(45.5%)。non-GCB組EB病毒感染率較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 DLBCL發(fā)生、發(fā)展與EBV感染有關(guān)，不同免疫表型的結(jié)外彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的病因具有異質(zhì)性。

淋巴瘤；B細(xì)胞；EB病毒

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)占成人淋巴瘤總數(shù)的30%～40%，是非霍奇金淋巴瘤(NHL)中最常見的一種類型，病理機制較為復(fù)雜，發(fā)展過程呈侵襲性，臨床表現(xiàn)不一[1]。統(tǒng)計結(jié)果顯示，該病發(fā)病率呈逐年上升趨勢。低度侵襲性淋巴瘤(如濾泡性淋巴瘤)可以演變?yōu)镈LBCL，這種演變很大程度上可能與一些染色體結(jié)構(gòu)改變有關(guān)[2]，但大多數(shù)情況下，該淋巴瘤多為原發(fā)。國外學(xué)者等采用免疫組織化學(xué)方法深入研究淋巴瘤中CD10、BCL-6、MUM1蛋白的表達情況，將DLBCL區(qū)分為兩種免疫類型：生發(fā)中心型(GCB)及非生發(fā)中心型(non-GCB)[3]。兩亞型在治療反應(yīng)及生物學(xué)行為表現(xiàn)上均有所不同，可用來反映不同的病因及其發(fā)病過程。本研究選取91例DLBCL患者的組織標(biāo)本，探討EB病毒在結(jié)外部位的DLBCL發(fā)病中的作用及其機制。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集2012年1月至2015年7月河南省開封市中心醫(yī)院收治的NHL病例，依據(jù)2001年WHO中有關(guān)淋巴造血組織腫瘤分類DLBCL診斷標(biāo)準(zhǔn)進行篩選[5]，根據(jù)組織形態(tài)、臨床和免疫組化等方面特點選出91例DLBCL病例，其中男51例，女40例， 中位年齡為52歲。對照組為20例淋巴結(jié)反應(yīng)增生組織患者，其中男12例，女8例，中位年齡為48歲。

1.2 免疫組織化學(xué) 采用免疫組化法(所用抗體均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司)檢測淋巴瘤中CD10、BCL-6、MUM1蛋白表達量。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：CD10陽性表達率>10%，BCL-6陽性表達率>5%，MUM1陽性表達率>20%，均視為陽性病例。

1.3 EB病毒原位雜交 原位雜交相關(guān)試劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司，按照試劑盒說明中的步驟進行檢測。陽性標(biāo)準(zhǔn)：切片中觀察到核型不規(guī)則的細(xì)胞或中—大的淋巴細(xì)胞3個以上呈EBERs陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 以SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，四格表資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫分型 依據(jù)CD10、MUM1、BCL-6免疫組化結(jié)果分為GCB與non-GCB兩種分型。其中GCB型為BCL-6陽性、CD10陽性(或陰性)、MUM-1陰性，共44例(占48.4%)。non-GCB型為BCL-6陰性或CD10陰性，BCL-6陽性，MUM1陽性、CD10陽性，共47例(51.6%)。

2.2 EBERs原位雜交 GCB組EBERs陽性10例(22.7%)，non-GCB組EBERs陽性20例(45.5%)；GCB組EBERs陽性率低于non-GCB組(P<0.05)。20例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生組織中EBERs均陰性，91例DLBCL中30例(33.0%)EBERs陽性表達，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

DLBCL免疫表型、臨床發(fā)生發(fā)展過程及遺傳學(xué)特征極具異質(zhì)性，且先前已有報道證實其可能包含多個獨立的病種，每個獨立的病種有其不同的發(fā)病原因及機制[6]。鑒于此，本研究對91例DLBCL病例進行免疫分型，生發(fā)中心型(GCB)有44例(48.4%)，非生發(fā)中心型(non-GCB)有47例(51.6%)。

在EBV基因組U5-TR區(qū)中，存在1個左向啟動子控制轉(zhuǎn)錄片段，稱為BNLF-1基因，PolyA位于BNLF-1基因166946-166950處。BNLF-1為潛在瘤基因，編碼為LMP-1潛膜蛋白，已成為EB病毒分子學(xué)研究熱點。LMP-1生物學(xué)功能表現(xiàn)在以下方面：①對B細(xì)胞標(biāo)志及CD23、CD54、CD40等細(xì)胞黏附分子的表達起上調(diào)作用，對CD10表達進行下調(diào)，還可激活細(xì)胞LFA3、LFAI、ICAM1等黏附分子的表達；②誘導(dǎo)NFKB表達活化；③誘導(dǎo)BCL-2基因及原癌基因的表達，同時可上調(diào)p53基因的表達。EBV基因產(chǎn)物有著關(guān)鍵性的作用，能直(間)接調(diào)節(jié)細(xì)胞基因的表達，又能影響宿主信號系統(tǒng)[7]。EBV之所以能夠參與淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展，可能與跟宿主B細(xì)胞之間復(fù)雜的相互作用有關(guān)。但為什么只有一些特定類型的淋巴瘤與EB病毒密切相關(guān)，目前仍無明確答案。關(guān)于彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的病因還不十分清楚，有關(guān)DLBCL中EB病毒感染的報道，結(jié)果不一致。Pothen等[8]報道，380例韓國地區(qū)DLBCL中，有34例EBERs陽性，占8.95%。本研究在組織芯片的基礎(chǔ)上大規(guī)模地采用EBERs原位雜交技術(shù)檢測，發(fā)現(xiàn)EBERs陽性率高達33.0%，GCB組陽性率達22.7%，non-GCB組陽性率高達45.5%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。將近50%的non-GCB病例EBERs為陽性，提示EB病毒在淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要的角色。值得一提的是，這與DLBCL中non-GCB預(yù)后較差是否有關(guān)聯(lián)，需要更深層面的探究。

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R 733.1

10.3969/j.issn.1004-437X.2017.01.013

2016-03-18)