宋 斌 洪曉華 張 平

(惠州市中醫(yī)醫(yī)院消化內(nèi)二科，廣東 惠州 516001)

老年腸易激綜合征患者腸黏膜肥大細(xì)胞與血管活性腸肽的表達(dá)及意義

宋 斌 洪曉華1張 平

(惠州市中醫(yī)醫(yī)院消化內(nèi)二科，廣東 惠州 516001)

目的 探討腸易激綜合征(IBS)患者腸黏膜肥大細(xì)胞(MC)及血管活性腸肽(VIP)的表達(dá)及其可能作用。方法 33例腹瀉型IBS患者(D-IBS組)、27例便秘型IBS患者(C-IBS組)及18例健康體檢者(對照組)納入研究。分別取回盲部、乙狀結(jié)腸黏膜行VIP 免疫組織化學(xué)染色和甲苯胺藍(lán)染色MC計數(shù)，檢測肛管直腸壓力。結(jié)果 ①D-IBS組和C-IBS組乙狀結(jié)腸部MC計數(shù)均較回盲部顯著降低(P<0.05)，兩組間各部MC計數(shù)比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，但各部位均較對照組顯著增高(P<0.05)。②D-IBS組和C-IBS組回盲部和乙狀結(jié)腸黏膜VIP表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，但各部位均較對照組顯著增高(P<0.05)。③三組間靜息壓、最大收縮壓及松弛壓均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。D-IBS組和C-IBS組患者感覺閾值、最大容量閾值及疼痛閾值均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，但與對照組比較均顯著降低(P<0.05)。結(jié)論 IBS患者結(jié)腸黏膜MC和VIP表達(dá)增加，可能對IBS患者內(nèi)臟高敏感性的形成有一定影響。

腸易激綜合征；肥大細(xì)胞；血管活性腸肽；內(nèi)臟高敏感性

腸易激綜合征(IBS)以腹痛、腹脹或腹部不適，伴大便性狀或排便習(xí)慣改變?yōu)橹饕卣?，但無器質(zhì)性或生化指標(biāo)異常改變，在亞洲國家其患病率達(dá)2.9%～15.6%〔1〕，是最常見的功能性胃腸道功能障礙。目前其發(fā)病機(jī)制仍不明確，但大量研究顯示神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫調(diào)控異常在IBS中起到重要作用〔2〕。本研究觀察IBS患者結(jié)腸黏膜肥大細(xì)胞(MC)及血管活性腸肽(VIP)的表達(dá)，并通過直腸測壓探討VIP、MC與IBS患者內(nèi)臟高敏性的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年5月至2015年6月在我院就診的IBS患者60例，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合功能性胃腸疾病羅馬Ⅲ制定的IBS診斷標(biāo)準(zhǔn)〔3〕，包括腹瀉型IBS(D-IBS)患者 33例，便秘型IBS(C-IBS)患者 27例；男25例，女35例，年齡59～70〔平均(64.7±6.3)〕歲。選擇同期行健康體檢或腸息肉內(nèi)鏡下切除術(shù)后復(fù)查者18例作為對照組，均無胃腸道癥狀、大便習(xí)性正常、鏡檢腸黏膜無異常且近期無服藥史，男女各9例，年齡58～65〔平均(55.5±5.8)〕歲。所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 腸黏膜標(biāo)本制備 采用電子結(jié)腸鏡(奧林巴斯CV-260)分別于回盲部(升結(jié)腸距回盲瓣約5 cm左右處)和乙狀結(jié)腸(距肛門25 cm左右)各鉗取2塊黏膜標(biāo)本，常規(guī)行固定、脫水、包埋、切片、脫蠟處理，采用免疫組化鏈霉親合素-生物素復(fù)合物(SABC)法檢測VIP，甲苯胺藍(lán)改良染色法檢測MC。VIP兔抗人多克隆抗體和免疫組化SABC購自武漢博士德生物科技有限公司；甲苯胺藍(lán)購自上?；瘜W(xué)試劑公司，操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.2 染色結(jié)果分析 VIP 陽性細(xì)胞質(zhì)呈棕褐色顆粒，MC陽性呈現(xiàn)紫紅色顆粒。采用 Olympus-CH 光學(xué)顯微鏡高倍視野(×400)下觀察5個不重復(fù)視野的黏膜層，分別對VIP、MC陽性表達(dá)進(jìn)行計數(shù)，取平均值為檢測結(jié)果。

1.3 肛管直腸壓力檢測 采用美國Medtronic公司生產(chǎn)的肛腸動力學(xué)檢測系統(tǒng)，受試者均于檢查當(dāng)日空腹，檢查前排空腸道?；颊呷∽髠?cè)臥位，屈膝顯露肛門外口，將測壓導(dǎo)管經(jīng)肛門插入肛管直腸內(nèi)，按規(guī)范程序分別測定肛管直腸括約肌靜息壓、最大收縮壓、括約肌松弛壓。向測壓導(dǎo)管的氣囊內(nèi)注氣10 ml，并以10 ml容量逐次遞增，檢測有無直腸肛門抑制，并記錄直腸感知閾值、直腸最大容量閾值及疼痛閾值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件，計量資料組間均數(shù)比較用單因素方差分析或t檢驗，多組間兩兩比較采用S-N-K法。

2 結(jié) 果

2.1 MC染色與計數(shù) 在D-IBS、C-IBS及對照組回盲部、乙狀結(jié)腸黏膜固有層均可見MC散在分布，細(xì)胞呈梭形、圓形或不規(guī)則形。各組乙狀結(jié)腸黏膜 MC計數(shù)均較回盲部顯著降低(P<0.05),而D-IBS組及C-IBS組各部位MC計數(shù)比較均無統(tǒng)計學(xué)差異，但均較對照組顯著增高(P<0.05)。見表1。

2.2 VIP免疫組化染色 在D-IBS、C-IBS及對照組回盲部、乙狀結(jié)腸黏膜均可見VIP表達(dá)，主要分布在腸黏膜固有層內(nèi)分泌細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，呈楔形或不規(guī)則形。各組在回盲部和乙狀結(jié)腸腸黏膜VIP表達(dá)比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；組間比較，D-IBS組與C-IBS組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但均高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 各組腸黏膜VIP染色和 MC計數(shù)結(jié)果，個/高倍視野)

與對照組比較：1)P<0.05；與回盲部比較：2)P<0.05；下表同

2.3 肛管直腸壓力檢測結(jié)果 D-IBS組、C-IBS組及對照組均存在直腸肛門抑制性反射,且三組間靜息壓、最大收縮壓及松弛壓比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。D-IBS組和C-IBS組患者感覺閾值、最大容量閾值及疼痛閾值比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，但與對照組比較均顯著降低(P<0.05)。見表2。

表2 各組受試者肛管直腸測壓結(jié)果±s，kPa)

3 討 論

內(nèi)臟高敏感性是指內(nèi)臟組織對刺激的感受性增強，導(dǎo)致引起內(nèi)臟發(fā)生疼痛或不適感覺的閾值降低〔4〕。大量研究表明內(nèi)臟敏感性增高是IBS最主要的病理生理改變，因此，不能誘發(fā)正常人起反應(yīng)的微小刺激可能導(dǎo)致IBS患者腸管劇烈收縮，并發(fā)生腹痛和排便異常等癥狀〔5〕。本研究結(jié)果顯示IBS患者直腸動力是正常的。但不論是D-IBS，還是C-IBS患者，其感覺閾值、最大容量閾值和疼痛閾值均顯著低于對照組，提示IBS患者容量刺激的耐受性顯著降低，結(jié)、直腸敏感性增加，而研究證實其也反映了食管、胃、十二指腸、小腸等內(nèi)臟敏感性增加〔6〕。

MC是人體內(nèi)具有重要免疫活性的細(xì)胞，在胃腸道廣泛存在，作為一種抗原感受器在腸黏膜發(fā)揮局部免疫作用。據(jù)報道約1/3的患者在腸道感染后出現(xiàn)IBS〔7〕，感染后IBS患者腸黏膜MC明顯增多〔8〕，表明MC在IBS的發(fā)病過程中起到了重要作用。本研究顯示IBS患者結(jié)腸黏膜MC計數(shù)較正常者顯著增加，與王承黨等〔9〕的研究結(jié)果一致。各種理化因素或內(nèi)源性物質(zhì)如神經(jīng)肽等可誘導(dǎo) MC 活化，并通過脫顆粒作用釋放多種生物活性介質(zhì)，如組織胺、前列腺素、5-羥色胺、白三烯等，這些介質(zhì)作用于神經(jīng)纖維引發(fā)腸道高敏感性。

VIP是一種含 28個氨基酸的堿基多肽，廣泛分布于腸道和神經(jīng)系統(tǒng)，以神經(jīng)遞質(zhì)的方式局部發(fā)揮作用〔10〕。本研究結(jié)果顯示正常對照組和IBS患者結(jié)腸黏膜均有VIP表達(dá)，且主要在結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞間的內(nèi)分泌細(xì)胞內(nèi)。而與對照組比較，IBS患者VIP陽性表達(dá)明顯增強，且在不同類型IBS患者及結(jié)腸不同部位的分布均無明顯差異，與趙志忠等〔11〕研究結(jié)果一致。提示VIP可能在IBS發(fā)病機(jī)制中的不同環(huán)節(jié)發(fā)生作用。VIP增高使C-IBS患者腸蠕動性收縮作用減弱導(dǎo)致便秘，但在D-IBS患者中VIP導(dǎo)致胃腸道動力紊亂，促進(jìn)腸道水和電解質(zhì)分泌增加，腸道對外來刺激敏感性增強，因此導(dǎo)致腹瀉、腹痛等癥狀〔12〕。

研究表明，胃腸道的功能受到自主神經(jīng)-腸神經(jīng)系統(tǒng)(ENS)的調(diào)控，ENS具有自主調(diào)節(jié)、自我控制的特點，但通過腦腸軸與中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)聯(lián)系起來，CNS間接通過各種腦腸肽調(diào)控ENS和胃腸運動〔13〕。MC作為神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)的橋梁，MC激活后一方面分泌活性介質(zhì)，促進(jìn)水、電解質(zhì)和黏液的分泌〔14〕，另一方面作用于鄰近的內(nèi)分泌細(xì)胞和 ENS，促使VIP等一系列神經(jīng)肽釋放〔15〕，引發(fā)腸動力和敏感性變化，腸功能發(fā)生紊亂，最終導(dǎo)致 IBS患者發(fā)生腹痛、腹脹及排便習(xí)慣改變等癥狀。

綜上所述，MC與VIP在IBS患者結(jié)腸黏膜表達(dá)增強，可能通過神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)導(dǎo)致腸動力紊亂和腸道敏感性增高，在IBS的發(fā)病機(jī)制發(fā)揮重要作用。

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〔2016-06-05修回〕

(編輯 袁左鳴)

宋 斌(1979-)，男，副主任醫(yī)師，主要從事消化內(nèi)科臨床研究。

R574.4

A

1005-9202(2017)03-0654-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.03.058

1 惠州市中醫(yī)醫(yī)院心內(nèi)六科