樓立新　林恒軍　王榮飛

[摘要] 目的 探討金華地區(qū)Ki-67在乳腺癌組織中的表達水平、與乳腺癌亞型的關(guān)系及其對患者行改良乳腺癌根治術(shù)后局部復發(fā)、遠處轉(zhuǎn)移的預測價值。 方法 選取我院行改良乳腺癌根治術(shù)治療的乳腺癌患者134例，術(shù)后均隨訪至少3年。檢測其乳腺癌組織Ki-67、ER、PR及Her-2表達水平和癌旁組織Ki-67表達水平，分析乳腺癌Ki-67蛋白表達水平及其與乳腺癌亞型的關(guān)系、乳腺癌Ki-67蛋白表達水平與局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移的關(guān)系及其預測局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移等預后情況的價值。 結(jié)果 乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白陽性表達率高于癌旁組織（P<0.05）。Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者不同亞型的蛋白陽性表達率分別為Luminal A型53.57%、Luminal B型77.27%、Her-2陽性型94.29%、三陰型96.30%（P<0.05）。Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織蛋白表達水平與乳腺癌亞型密切相關(guān)。Ki-67陽性表達患者的局部復發(fā)率及遠處轉(zhuǎn)移率均高于陰性表達患者（P<0.05）。Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織蛋白表達水平與局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)，且其預測局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移的價值良好。結(jié)論 金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白表達與乳腺癌亞型和局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移等預后情況均相關(guān)，且對預后情況的預測價值良好，可作為乳腺癌亞型和預后評估的參考指標。

[關(guān)鍵詞] 乳腺癌；免疫組化法；Ki-67；乳腺癌亞型；復發(fā)；轉(zhuǎn)移

[中圖分類號] R737.9 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2016）31-0009-05

乳腺癌在全球女性惡性腫瘤發(fā)病中居首位，近年來乳腺癌的發(fā)病隨著生活方式、飲食結(jié)構(gòu)等的改變而不斷增加，且呈現(xiàn)年輕化趨勢[1-3]。盡管目前臨床對乳腺癌的早期診斷和治療手段有長足進展，但患者的預后情況仍較差，乳腺癌仍是女性死亡的重要原因之一[4，5]。乳腺癌的發(fā)生受到多個因子的影響，近年來Ki-67逐漸成為一個新的研究熱點，且有研究提示其與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[6-8]。因此，Ki-67亦可能與浙江金華地區(qū)乳腺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，可能用于病情和預后評估從而指導干預。然而目前關(guān)于金華地區(qū)Ki-67在乳腺癌中的表達和意義的分析研究仍較少。因此，本研究采用免疫組化法檢測金華地區(qū)乳腺癌患者Ki-67在乳腺癌組織中的表達水平及其與乳腺癌亞型及復發(fā)、轉(zhuǎn)移等預后情況的關(guān)系，旨在為該地區(qū)乳腺癌的預后評估及治療干預提供指導從而改善預后情況，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年4月～2013年8月金華市人民醫(yī)院行改良乳腺癌根治術(shù)治療且病理確診的乳腺癌患者134例。納入標準：所有患者均經(jīng)術(shù)后病理學檢查確診，性別均為女性，年齡不限，志愿入組。排除標準：排除入選時即已合并遠處轉(zhuǎn)移、治療期間死亡、中途退出研究等患者。實驗經(jīng)我院倫理委員會審核批準，且所有入選的患者及其家屬均已簽署知情同意書。134例乳腺癌患者中年齡最小30歲，最大82歲，平均（51.83±9.88）歲，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例，病變部位在左側(cè)66例，病變部位在右側(cè)68例；病理分型：浸潤性導管癌67例，浸潤性小葉癌58例，其他病理類型9例。

1.2方法

采用免疫組織化學技術(shù)SP染色法檢測乳腺癌組織中Ki-67、雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）和人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factorreceptor-2，Her-2）的表達情況及癌旁組織中Ki-67表達水平，檢測采用的相關(guān)試劑盒均由武漢博士德生物工程有限公司提供。將手術(shù)切除所得的乳腺癌組織及癌旁組織進行甲醛固定并常規(guī)行石蠟包埋，采用切片機將組織切成厚度約0.4 μm的連續(xù)切片。由同一臨床檢驗經(jīng)驗豐富的醫(yī)師采用免疫組化SP法對乳腺癌組織的Ki-67、ER、PR及Her-2的表達情況及癌旁組織中Ki-67表達水平進行檢測，每張病理切片均隨機選擇10個高倍視野，以100個腫瘤細胞作為觀察對象，進行蛋白表達情況的評價。

1.3觀察指標

采用免疫組化檢測患者乳腺癌組織Ki-67、ER、PR及Her-2表達水平和癌旁組織Ki-67表達水平，分析患者乳腺癌亞型，并比較乳腺癌不同亞型患者乳腺癌組織Ki-67蛋白表達水平。術(shù)后均隨訪至少3年，統(tǒng)計患者隨訪期間局部復發(fā)率和遠處轉(zhuǎn)移率。

1.4 判斷標準[9]

Ki-67、ER、PR染色定位于細胞核，Her-2染色定位于細胞膜，以細胞膜或細胞核存在棕黃色顆粒為陽性標準，觀察乳腺癌組織各切片中Ki-67、ER、PR、Her-2陽性表達情況及癌旁組織中Ki-67蛋白陽性表達情況。乳腺癌亞型判斷標準[10]：Luminal A型：ER（+）或PR（+）且Her-2（-）；Luminal B型：ER（+）或PR（+）且Her-2（+）；Her-2陽性型： ER（-），PR（-）且Her-2（+）；三陰型：ER（-），PR（-）且Her-2（-）。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS14.0統(tǒng)計學軟件進行處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗，采用Logistic多因素分析法分析乳腺癌Ki-67蛋白表達水平及其與乳腺癌亞型、局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移的關(guān)系，并采用受試者操作特性曲線（ROC）分析乳腺癌Ki-67蛋白表達水平預測局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移等預后情況的價值，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1乳腺癌組織和癌旁組織Ki-67蛋白表達情況比較

134例乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白陽性表達率顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表1。

2.2乳腺癌患者乳腺癌亞型分析

金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌亞型比例分別為Luminal A型20.90%、Luminal B型32.83%、Her-2陽性型26.12%、三陰型20.15%，見表2。

2.3乳腺癌不同亞型患者乳腺癌組織Ki-67蛋白表達水平比較

Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者不同亞型的蛋白陽性表達率分別為Luminal A型53.57%、Luminal B型77.27%、Her-2陽性型94.29%、三陰型96.30%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表3。

2.4乳腺癌組織Ki-67蛋白表達水平與乳腺癌亞型的關(guān)系分析

Logistic多因素分析結(jié)果顯示，Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織蛋白表達水平與乳腺癌亞型密切相關(guān)（P<0.05）。見表4。

2.5乳腺癌患者隨訪期間局部復發(fā)率和遠處轉(zhuǎn)移率預后情況分析

134例乳腺癌患者隨訪3年期間局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移的患者例數(shù)分別為45例和38例，局部復發(fā)率和遠處轉(zhuǎn)移率分別為33.58%（45/134）和28.36%（38/134），提示局部復發(fā)率和遠處轉(zhuǎn)移率高，患者預后情況差，急需改善。

2.6 乳腺癌組織中Ki-67陽性表達和陰性表達患者的預后比較

Ki-67陽性表達患者的局部復發(fā)率及遠處轉(zhuǎn)移率均高于陰性表達患者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表 5。

2.7乳腺癌組織Ki-67蛋白表達水平與預后的關(guān)系

Logistic多因素分析結(jié)果顯示Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織蛋白表達水平與局部復發(fā)密切相關(guān)，其β、SE、Wald、P、OR和95%CI分別為1.535、0.342、4.488、0.000、9.475和2.268～9.735。Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織蛋白表達水平與遠處轉(zhuǎn)移亦密切相關(guān)，其β、SE、Wald、P、OR和95%CI分別為1.506、0.314、4.796、0.000、9.278和2.205～9.563。

2.8 金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白表達預測其預后的價值分析

進一步ROC曲線分析結(jié)果顯示，金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白陽性表達預測局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移的曲線下面積、敏感度、特異度、準確性、陽性預測值、陰性預測值等均較高，金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白陽性表達預測局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移的價值均良好，見表6及圖1、2。

3討論

近年來，隨著生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)改變及環(huán)境變化增加各類惡性腫瘤的發(fā)生，其中女性常見惡性腫瘤之一的乳腺癌的發(fā)病亦呈逐年上升趨勢。乳腺癌是女性發(fā)病率首位的惡性腫瘤，其在金華地區(qū)的發(fā)病率高，可明顯影響女性患者的健康，甚至直接威脅著女性患者的生命安全[11]。因此，對乳腺癌早期進行疾病確診，并根據(jù)患者的組織分型、腫瘤直徑等確定治療方案，有利于預后的改善。乳腺癌的早期診治技術(shù)目前已取得了較大進展，然而患者術(shù)后復發(fā)、遠處轉(zhuǎn)移甚至死亡等不良預后情況仍時有發(fā)生[12-14]。本研究分析134例行乳腺癌根治術(shù)治療的乳腺癌患者隨訪3年的局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移發(fā)生情況，本研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者隨訪期間局部復發(fā)率和遠處轉(zhuǎn)移率分別為33.58%和28.36%，其局部復發(fā)率和轉(zhuǎn)移率均較高，極易導致死亡等不良預后情況，乳腺癌患者的預后情況差。因此，對乳腺癌患者的病情和預后進行評估從而及時采取更有效的治療措施進行相關(guān)治療具有重要意義。

現(xiàn)階段，分子生物學在腫瘤診治中得到廣泛應用，對確定治療靶點具有較高的臨床價值。乳腺癌的發(fā)生受到多個基因的調(diào)控，其中雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）和人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor-2，Her-2）等在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用亦得到多項研究的認可，并可根據(jù)乳腺癌蛋白表達水平確定乳腺癌分型從而指導治療[15-17]。近年來Ki-67逐漸成為一個新的研究熱點，是目前較為肯定的核增殖標記物，由于其半衰期短，故已成為檢測腫瘤細胞增殖活性最可靠的指標[18-22]。因此對Ki-67在乳腺癌組織中的表達水平和意義進行研究可在分子學水平上加深對乳腺癌生物學行為的認識，對預測乳腺癌臨床治療的療效、判斷乳腺癌患者的預后、優(yōu)化個體化治療方案等均有重要意義。因此，本研究對134例采用乳腺癌根治術(shù)治療患者的乳腺癌組織Ki-67、ER、PR及Her-2表達水平進行檢測分析，根據(jù)ER、PR及Her-2表達確定乳腺癌分型，并分析Ki-67乳腺癌組織表達水平與乳腺癌亞型的關(guān)系，結(jié)果顯示，乳腺癌組織中的Ki-67蛋白陽性表達率明顯高于癌旁組織，提示Ki-67與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，與前文的假設及Ignatiadis M等[23]的研究結(jié)果一致。Ki-67的乳腺癌組織表達水平在金華地區(qū)三陰型乳腺癌中的陽性表達率最高，其次為Her-2 陽性型乳腺癌，再次為Luminal B型乳腺癌，在Luminal A型乳腺癌中的陽性表達率最低，提示金華地區(qū)乳腺癌組織Ki-67表達水平與乳腺癌分型可能相關(guān)。進一步的Logistic多因素分析結(jié)果顯示，Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織中的蛋白表達水平與乳腺癌亞型密切相關(guān)，對乳腺癌組織Ki-67蛋白表達進行檢測有助于了解乳腺癌亞型，指導臨床對乳腺癌進行更準確有效的治療，從而有助于療效和預后的改善。

本研究亦比較金華地區(qū)不同乳腺癌組織Ki-67蛋白表達情況患者的局部復發(fā)率和遠處轉(zhuǎn)移率，發(fā)現(xiàn)金華地區(qū)Ki-67陽性表達的患者的局部復發(fā)率及遠處轉(zhuǎn)移率均高于陰性表達患者，提示金華地區(qū)乳腺癌組織Ki-67蛋白表達情況與局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移相關(guān)，進一步的Logistic多因素分析結(jié)果顯示Ki-67在金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織蛋白表達水平與局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)，乳腺癌組織Ki-67蛋白表達情況可反映預后情況，可用于局部復發(fā)、遠處轉(zhuǎn)移等預后情況的評估。本研究進一步采用ROC曲線分析金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白陽性表達預測局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移等預后情況的價值。在ROC曲線下面積>0.5的情況時曲線下面積越接近于1則提示評估價值越好，而本研究中金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白表達預測局部復發(fā)、遠處轉(zhuǎn)移等預后的曲線下面積均接近0.9，金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織Ki-67蛋白陽性表達預測局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移的價值良好。因此，對金華地區(qū)乳腺癌患者乳腺癌組織中Ki-67蛋白表達情況進行檢測有助于早期預知不良預后風險，從而盡早采取積極措施改進治療方案，提高療效和改善預后。而金華地區(qū)Ki-67蛋白表達情況與乳腺癌分型及預后等均相關(guān)，提示Ki-67可能成為乳腺癌基因治療的靶基因，對Ki-67進行靶向抑制可能有助于乳腺癌療效和預后的改善，對Ki-67進行靶向抑制治療乳腺癌的效果有待進一步的實驗研究驗證。

綜上所述，金華地區(qū)乳腺癌組織Ki-67蛋白陽性表達高、與乳腺癌亞型及局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移等預后情況均相關(guān)，且其對預后情況的預測價值良好。因此，金華地區(qū)乳腺癌組織Ki-67蛋白表達情況的檢測有助于確定其乳腺癌亞型和預后的早期評估，為其臨床治療提供依據(jù)，從而有利于療效和預后的改善。

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（收稿日期：2016-09-02）