邵少慰，梁少姬，李文成，羅巧明，梁儲財，陳裕章，陳連紅

一種用于子宮內膜病變篩查的細胞塊制作方法及質量控制

邵少慰，梁少姬，李文成，羅巧明，梁儲財，陳裕章，陳連紅

子宮內膜癌；篩查；細胞塊；石蠟切片；質量控制

當前，脫落細胞塊技術是細胞學發(fā)展的方向之一，即將采集于自然管腔、器官表面或黏膜面，自然或人為脫落的細胞經離心，將細胞和微小組織塊高度濃縮后用固定劑凝聚，再經脫水、石蠟包埋、染色等步驟制成切片[1-4]，進一步觀察診斷。本文用子宮內膜采集器采集子宮內膜細胞樣本，應用細胞塊技術制成HE切片，這種切片的觀察效果遠比子宮內膜脫落細胞手工抹片或液基細胞學制片(endometrial cytological test, ECT)要好，其診斷價值更有優(yōu)勢[5]?，F(xiàn)介紹一種簡易的用于子宮內膜病變篩查的細胞塊制作方法及質量控制過程。

1 材料與方法

1.1 材料 SPA-1子宮內膜采集器(北京賽普九州公司)，標本保存瓶和保存液(主要成分為10%中性福爾馬林)，PBS，圓底離心管，一次性吸管，震蕩器，低速離心機，自制塑料小鏟，1%麝香草酚蛋清液(防腐、凝固劑，作為細胞骨架介質)，HE染色液，巴氏染色液和冰箱。

1.2 方法

1.2.1 取材 使用SPA-1子宮內膜采集器采集子宮內膜細胞樣本，剪斷采集器的采集環(huán)，將采集環(huán)及包含的細胞樣本投入到保存瓶中保存，搖動保存瓶，使瓶內采集環(huán)上的細胞充分涮洗到保存液中，保存液呈混懸狀，完成樣本的采集。

1.2.2 標本處理 核對標本并編號，搖勻保存瓶，再將保存瓶內的液體倒入離心管內800～1 000 r/min離心10 min，除去上清液后加入緩沖液，搖勻，吸取離心管內約1/3的無明顯懸浮物的細胞懸液，按沉降式制片法制作一張液基細胞巴氏染色涂片作對照；將離心管內余下2/3的細胞懸液進行離心，吸去大部分上清液，向離心管內滴入0.6～1 mL流質狀的麝香草酚蛋清液，混勻并使樣本內細胞均勻分散在蛋清液中，再沿著離心管壁加入10%中性福爾馬林1～3 mL，離心管內的蛋清變成膠凍狀，再次離心，除去上清液后放入冰箱冷凍約20 min，溫度-4 ℃，待離心管底部樣本結成凍塊狀，用塑料小鏟推動并將凍塊剔出，用濾紙包埋，常規(guī)固定、脫水后制得石蠟細胞塊，切片并行HE染色。

1.3 診斷結果的評估標準 采用雙盲法由兩名細胞病理學診斷醫(yī)師獨立閱片，子宮內膜細胞塊切片和ECT涂片評估均參照經典子宮內膜四級分類診斷系統(tǒng)[6-8]：(1)未見上皮內病變及惡性細胞(正常子宮內膜)；(2)良性增生性病變(包括子宮內膜炎癥或息肉、不規(guī)則增生、單純性增生和復雜性增生)；(3)子宮內膜非典型增生(包括子宮內膜非典型增生和上皮內病變)；(4)癌變。

1.4 質量管理標準

1.4.1 標本及制片滿意的標準 (1)申請單項目填寫完整，有相關臨床資料；(2)標本瓶標記清晰，標本液無溢出或滲漏現(xiàn)象；(3)制片有足夠數(shù)量的子宮內膜組織小片段(至少有5～6個內膜腺體和間質成分或腺上皮細胞群，萎縮期子宮內膜可呈片狀子宮內膜間質成分為主)，并且保存完好；(5)有異常細胞的標本均判定為滿意標本；(6)染色效果好。

1.4.2 標本及制片不滿意的標準 (1)申請單填寫缺項；(2)標本瓶無明確標記，標本瓶無擰緊，標本液溢出過半；(3)制片的細胞過度重疊，有血液、炎性細胞或污染物覆蓋，影響超過75%以上的腺細胞觀察；(4)保存完好的子宮內膜組織片段的腺體數(shù)﹤5個(萎縮期子宮內膜除外)；(5)細胞擠壓變形明顯；(6)染色效果差。對前兩項應在申請單上標明原因并直接拒絕接收標本，對后4項不滿意的制片均在報告單上說明原因，建議重新取材送檢。

2 結果

2.1 細胞塊切片HE染色觀察 子宮內膜細胞塊切片可見帶有子宮內膜組織結構的片段，顯示清晰的腺體形態(tài)，能大致判斷腺體與間質的密度，背景清晰，能識別子宮內膜不同生理狀態(tài)、良性病變、非典型增生及癌變。

2.2 ECT涂片巴氏染色觀察 背景干凈，已去除炎細胞、血液等大部分雜質，可見散在的子宮內膜腺上皮或間質細胞，或成簇狀、緊密連接的蜂窩狀或管狀腺體，有平坦的層狀或三維結構，但由于液基細胞制片采用的自然沉降法，會出現(xiàn)細胞單個散在分布或較多成團細胞高度聚集、堆積重疊現(xiàn)象，不利于觀察和診斷評估，容易出現(xiàn)過度診斷或漏診的情況。

3 討論

3.1 技術特色和優(yōu)勢 目前，子宮內膜癌篩查主要采用子宮內膜采集器取樣，多采用手工涂片或液基細胞制片，但因易出現(xiàn)細胞過于分散或密集、重疊成片現(xiàn)象，閱片時有較大難度，使看慣了組織病理切片的病理醫(yī)師很難把握子宮內膜細胞學診斷的尺度，需要培訓專門的細胞病理學醫(yī)師來閱片，這成為子宮內膜細胞學檢查廣泛用于子宮內膜癌篩查的障礙之一。

本文將子宮內膜細胞樣本制作成子宮內膜細胞塊，其HE切片既可看到子宮內膜散在脫落的腺細胞成分，也可見到更多微小的子宮內膜組織片段，沒有腺體堆積重疊現(xiàn)象，能直觀的辨別內膜腺體的形態(tài)、類型，以及周圍間質的改變，其背景更清晰，易于觀察，這更符合病理醫(yī)師的閱片及診斷習慣，容易正確評估子宮內膜良性病變、非典型增生及癌變。同時，制成的細胞塊可長期保存，也可對有病變的樣本再作連續(xù)切片觀察，或進一步作免疫細胞化學染色，甚至分子病理檢測來協(xié)助子宮內膜腫瘤的分類診斷。

3.2 提高質控水平 本文用子宮內膜采集器獲取的微量子宮內膜成分至閱片、診斷的整個技術流程，均注重提高子宮內膜癌篩查的質控水平。首先，本實驗自制的蛋清液既經濟易得，其中加入了麝香草酚起到防腐作用，又可以長時間在冰箱冷藏，隨時備用；麝香草酚蛋清液主要是作為樣本的細胞骨架媒介，使樣本內的細胞充分混合、凝聚，冷凍后結塊。其次，用粗的飲料吸管剪成可彎曲的喇叭形小鏟，便于順著離心管的圓底將凍塊狀的樣本推移并完整剔出來，包裹后裝入脫水盒進行脫水處理。這些步驟均可最大限度減少在標本轉移過程中有效細胞的流失量控制。將細胞塊HE切片與液基細胞巴氏涂片以雙盲法分別加以評估，相互對照，對于后續(xù)有診斷性刮宮或子宮切除的病例，與病理組織活檢結果作對照，可以提高診斷子宮內膜病變的準確性。

3.3 擬解決的關鍵問題 婦科取材醫(yī)師應熟悉標本取材的環(huán)節(jié)，保證取得滿足診斷的標本。但是，由于子宮內膜采集器取得的脫落細胞成分有限，與診斷性刮宮等內膜活檢比較，其診斷信息相對具有局限性，故需總結經驗，制定更利于判斷子宮內膜細胞塊切片的診斷評估模式。

總之，子宮內膜細胞塊技術對受檢者而言屬于微創(chuàng)或者無創(chuàng)，從技術流程而言有利于提高從標本制作到診斷的質控水平，提高診斷的準確度，是今后子宮內膜良性病變乃至癌變篩查的方向。

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肇慶市科技創(chuàng)新計劃項目(2014E286)

廣東省肇慶市第二人民醫(yī)院病理科，肇慶 526060

邵少慰，女，主任醫(yī)師。E-mail: shaoweishao@163.com

時間：2017-6-20 11:19 網絡出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170620.1117.027.html

R 737.3

B

1001-7399(2017)06-0696-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.06.027

接受日期：2017-01-16