EV71感染手足口病患兒血清IFN-γ及IL-4水平探討

手足口病（hand, foot, and mouth disease，HFMD）是由腸道病毒引起的急性出疹性傳染病，以CA16及EV71感染所致最常見，多發(fā)于5歲以下兒童，尤其是嬰幼兒，臨床特征表現(xiàn)為手、足、臀部出疹和口腔黏膜皰疹，絕大多數(shù)為自限性疾病。其中感染EV71型病毒者易出現(xiàn)危重癥，?？刹l(fā)無菌性腦膜炎、腦脊髓炎、腦干腦炎、肺水腫、急性馳緩性麻痹和循環(huán)障礙等，致死原因主要為腦干腦炎及神經(jīng)源性肺水腫，嚴(yán)重危害嬰幼兒的生命健康。本研究檢測EV71感染手足口病患兒急性期和恢復(fù)期外周血IFN-γ及IL-4的水平，探討其變化與病情嚴(yán)重程度的關(guān)系，以期能為臨床病情評估及治療提供依據(jù)。

1 臨床資料

選擇2014年3月至2015年7月于鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院兒科住院的手足口病患兒，經(jīng)咽拭子熒光定量PCR確診為EV71感染者，診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中華人民共和國手足口病診療指南（2010年版），急性期及恢復(fù)期參照衛(wèi)生部重癥手足口病臨床救治專家共識（2011年版）標(biāo)準(zhǔn)。入選患兒年齡6個月～5歲，病程≤3天，入院前2周未應(yīng)用糖皮質(zhì)激素及其他免疫調(diào)節(jié)劑，并排除水痘、麻疹等出疹性疾病。將EV71感染患兒分為普通組及重癥組，其中普通組72例，男42例、女30例，中位年齡29.0個月（范圍18.7～39.2個月）；重癥組48例，包括重型病例45例，危重型病例3例，其中男29例、女19例，中位年齡26.0個月（范圍21.0～36.0個月）。另選取同期兒科門診體檢的30例健康兒童作為對照組，男18例、女12例，中位年齡26.5個月（范圍19.8～40.3個月）。各組患兒性別比（χ2=0.059）、年齡（H=0.007）差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。

取得家長知情同意，所有患兒分別于入院當(dāng)日及治療5天后抽取外周靜脈血1～2 mL，對照組于體檢時采血，置干燥管中予4 500 r/min（離心半徑17.5 cm），離心10 min，取血清置－80℃冰箱保存?zhèn)溆?。采用ELISA法檢測細胞因子水平，試劑購自上海生工生物工程股份有限公司，按說明書步驟操作。

采用SPSS17.0軟件進行分析。非正態(tài)分布計量資料以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）表示，組間比較采用秩和檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

普通組、重癥組、對照組的IFN-γ水平分別為113.65（28.09～202.22）ng/L、129.70（43.55～285.12）ng/L、49.01（5.30～83.7）ng/L，三組IL-4水平分別為47.75（17.8～129.86）ng/L、60.35（24.05～142.03）ng/L、24.78（8.19～29.95）ng/L。普通組、重癥組患兒急性期血清IFN-γ及IL-4水平均高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05），而普通組與重癥組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）?；謴?fù)期普通組、重癥組IFN-γ水平分別為63.46（19.37～113.7）ng/L、65.24（17.29～115.46）ng/L，IL-4水平分別為23.92（8.09～35.95）ng/L、20.86（6.21～39.26）ng/L，恢復(fù)期各病例組IFN-γ及IL-4水平與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2 討論

有研究表明，EV71引起的重癥手足口病患兒可出現(xiàn)免疫功能失調(diào)及細胞因子分泌的改變，進而通過免疫介導(dǎo)病理損傷機制，引發(fā)腦干損傷、全身炎癥反應(yīng)以及肺血管通透性增加等表現(xiàn)，其預(yù)后與神經(jīng)病變的類型和病情嚴(yán)重程度有關(guān)，病情嚴(yán)重者病死率高，或遺留嚴(yán)重后遺癥，而EV71病毒載量則與手足口病的嚴(yán)重程度無關(guān)。

兒童免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未完全成熟，尤其是嬰幼兒，其先天性及獲得性免疫系統(tǒng)功能發(fā)育均不健全，易患感染性疾病，這可能也是手足口病易發(fā)于5歲以下兒童的原因之一。有研究表明，腸道病毒感染后T細胞在免疫發(fā)病機制中起重要作用。正常情況下，機體內(nèi)Th1和Th2能夠相互轉(zhuǎn)化并維持動態(tài)平衡，保持機體的穩(wěn)定性。但在病理狀態(tài)下，Th1和Th2細胞受外來抗原信號的刺激功能發(fā)生改變，細胞亞群的動態(tài)平衡被破壞，導(dǎo)致其下游的細胞因子水平發(fā)生改變，進而導(dǎo)致機體免疫功能發(fā)生改變。根據(jù)細胞因子在炎癥過程中作用性質(zhì)特點不同，可分為促炎因子和抗炎因子，IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β、IFN-γ等為促炎因子，IL-4、IL-10、IL-13等為抗炎因子。機體受病毒感染后，細胞限制病毒的入侵和復(fù)制，同時細胞被激活、擴增，并釋放大量細胞因子，它們構(gòu)成了免疫微循環(huán)的細胞因子網(wǎng)絡(luò)，對于維持機體正常生理功能必不可少，但分泌過多，則對機體帶來嚴(yán)重危害。

IFN-γ、IL-4分別是Th1和Th2細胞的特征性細胞因子。IFN-γ是Ⅱ型IFN，主要由CD4+T細胞、CD8+T細胞和NK細胞產(chǎn)生，其可直接激活其他免疫細胞，在先天性免疫和獲得性免疫反應(yīng)中都起重要作用。IFN能抑制病毒復(fù)制，還可調(diào)節(jié)其他細胞因子的分泌，并誘導(dǎo)一系列細胞內(nèi)蛋白表達，發(fā)揮抗病毒效應(yīng)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。有研究表明，EV71感染腦干腦炎及肺水腫患兒的外周血及腦脊液IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-γ等前炎癥細胞因子水平明顯升高，而IFN-γ可通過降低內(nèi)皮屏障及緊密連接增加血管通透性，在EV71肺水腫的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，重癥手足口病肺水腫患兒腦脊液中可檢測到高水平的IFN-γ與IL-6，進而推測其可能與EV71誘發(fā)的神經(jīng)病理損害有關(guān)。也有動物實驗證實，EV71感染的小鼠經(jīng)IL-6或 IFN-γ處理后可發(fā)生肺水腫。本研究顯示，EV71感染的普通組及重癥組手足口病患兒的血清IFN-γ水平均比健康對照組增高，且重癥組較普通組升高更明顯，提示高水平的IFN-γ參與了EV71感染的病理過程，且可能與病情嚴(yán)重程度有關(guān)。而恢復(fù)期患兒血清IFN-γ水平明顯下降，與健康對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明IFN-γ水平的下降與疾病的恢復(fù)相一致，進一步證明了IFN-γ對手足口病進展的影響。IL-4 是重要的抑炎性細胞因子之一。有研究表明，手足口病患兒IL-4、IFN-γ均明顯下降，且重癥組較普通組下降更明顯。亦有研究表明，IL-4在重癥手足口病急性期升高，恢復(fù)期下降或者無任何變化。本研究顯示手足口病普通組及重癥組患兒IL-4水平均較正常對照組升高，恢復(fù)期下降，接近健康對照組水平（P＞0.05），提示恢復(fù)期抗炎性細胞因子水平下降。結(jié)合本研究IFN-γ水平升高，提示手足口病患兒體內(nèi)存在激烈的免疫炎癥反應(yīng)，促炎性細胞因子及抗炎性細胞因子維持于高水平狀態(tài)，二者分別增高，相互拮抗，共同促進病情發(fā)展，過度的免疫炎癥反應(yīng)最終導(dǎo)致了機體各臟器的損害。而恢復(fù)期手足口病各組患兒IFN-γ、IL-4水平下降，提示病理狀態(tài)下機體內(nèi)過度激烈的免疫炎癥反應(yīng)趨于平靜，并通過自身代償以確保免疫功能的穩(wěn)態(tài)。

doi∶10.3969/j.issn.1000-3606.2017.10.020

鄭州市普通科技攻關(guān)項目（No.20130468）

[1.鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院兒科(河南鄭州 450007)；2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科（河南鄭州 450052）孔慧霞 王 凱 段紅寶 劉靜炎 彭 韶 張艷華 段曉峰]

(本文編輯：蔡虹蔚)