周愛華

（武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢 430071）

腹腔鏡闌尾切除術(shù)對(duì)免疫功能影響分析

周愛華

（武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢 430071）

目的探討分析腹腔鏡闌尾切除術(shù)對(duì)免疫功能影響。方法隨機(jī)選取2015年8月～2016年5月期間在我市中心醫(yī)院接受診治的闌尾疾病患者100例作為本次的研究對(duì)象，100例闌尾疾病患者中，50例患者行開腹闌尾切除術(shù)，將此分為甲組，50例患者行腹腔鏡闌尾切除術(shù)，將此分為乙組，對(duì)兩組患者的腹腔的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNFɑ生物學(xué)活性和中性粒細(xì)胞吞噬功能以及腹腔T細(xì)胞亞群CD4+/CD8

+的比值進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果兩組T淋巴細(xì)胞亞群CD4+/CD8

+比值沒有明顯差異，甲組為0.53，乙組為0.57，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。甲組中性粒細(xì)胞化學(xué)發(fā)光峰值為98，乙組為102。甲組L929細(xì)胞0D570值為0.183，乙組為0.152。結(jié)論開腹闌尾切除術(shù)相對(duì)腹腔鏡闌尾切除術(shù)來(lái)說對(duì)腹腔局部免疫特別是細(xì)胞免疫有明顯的抑制效應(yīng)，腹腔鏡闌尾切除術(shù)對(duì)腹腔局部免疫沒有明顯的抑制作用，開腹闌尾切除術(shù)對(duì)巨噬細(xì)胞功能有明顯的影響。

腹腔鏡闌尾切除術(shù)；免疫功能；影響分析

據(jù)相關(guān)研究證明，現(xiàn)腹腔鏡手術(shù)相比開腹手術(shù)具有顯著的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)全身創(chuàng)傷損傷相對(duì)來(lái)說較小，不過手術(shù)對(duì)人體的創(chuàng)傷損傷小會(huì)不會(huì)對(duì)機(jī)體的免疫功能影響同樣小呢，在當(dāng)前還沒有達(dá)成一致的結(jié)論[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

乙組患者當(dāng)中，男28例，女22例，年齡范圍區(qū)間為20～65歲，平均年齡值為（41.1±1.2）歲。采用CO2氣腹，壓力12～14 mmHg。甲組患者當(dāng)中，男27例，女23例，年齡范圍區(qū)間為24～64歲，平均年齡值為（42.3±0.9）歲。兩組手術(shù)時(shí)間為40～50 min不等，平均手術(shù)時(shí)間為40分鐘。兩組患者在一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 中性粒細(xì)胞吞噬功能測(cè)定

對(duì)于中性粒細(xì)胞吞噬功能的檢測(cè)，本研究研采用發(fā)光劑―魯米諾法進(jìn)行檢測(cè)。培養(yǎng)箱溫度為37℃，5%CO2，中性粒細(xì)胞懸液混勻置此培養(yǎng)箱當(dāng)中，取懸液需在60 min以后，最后可取劑量為0.1 mL的懸液，測(cè)定管中分別置入魯米諾和血漿活化酵母多糖。測(cè)定出化學(xué)光峰值，采用LKB 1 250發(fā)光儀進(jìn)行為數(shù)3次的測(cè)定，單位為V/mv。吞噬功能受損的觀察指標(biāo)為峰值降低。

1.2.2 TNF-α生物學(xué)活性檢測(cè)

L929細(xì)胞用胰酶消化處理，之后對(duì)細(xì)胞濃度調(diào)整至2×105/mL。于96 孔培養(yǎng)板每孔接種細(xì)胞懸液，每孔為100 μL，培養(yǎng)箱溫度為37℃，5%CO，進(jìn)行為時(shí)4 h的培養(yǎng)后，使細(xì)胞貼壁。將100μl 4倍稀釋的上清液加入至每孔當(dāng)中，在此過程中置入陰性，目的是方便對(duì)照。培養(yǎng)箱溫度為37℃，5%CO，進(jìn)行為時(shí)24小時(shí)的孵育后，將50μL MTT將入每孔當(dāng)中繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，將上清棄去，同時(shí)將150μL DMSO加入每孔當(dāng)中， 酶標(biāo)自動(dòng)分析儀讀取OD值（波長(zhǎng)為570 nm）。倘若OD值越，以此說明TNF-α生物學(xué)活性越低，同時(shí)L929 細(xì)胞生長(zhǎng)抑制程度就越輕。

1.2.3 T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)

采用由美國(guó)BD公司生產(chǎn)的CD4 FITC/CD8PE抗體。將10 μL標(biāo)記抗體加入至各100 μL樣本當(dāng)中，進(jìn)行為時(shí)20 min的室溫暗處反應(yīng)后， 加入由美國(guó)BD公司生產(chǎn)的劑量為2mL的1×FACS溶血素，進(jìn)行為時(shí)10 min的室溫暗處反應(yīng)。1000 g離心10分鐘，將上清棄去，加入劑量為2 mL的PBS，同上所述1000 g離心10 min，將上清棄去，加多聚甲醛固定（500 μL 1%），分析采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析，此操作需在24 h之內(nèi)完成。分別記錄CD4+胞數(shù)與CD4

+/CD8+比值以及CD8

+細(xì)胞數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以“±s”表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例（n），百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用x2檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 巨噬細(xì)胞 TNF- α活性比較

應(yīng)用L929細(xì)胞法對(duì)巨噬細(xì)胞TNF-α活性進(jìn)行測(cè)定。兩組OD值差異明顯，甲組為0.183，乙組為0.152，甲組高于乙組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 兩組中性粒細(xì)胞吞噬功能比較

兩組患者應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定其中性粒細(xì)胞吞噬功能，經(jīng)過測(cè)定后，甲組98為其平均發(fā)光峰值，乙組為102，平均發(fā)光峰值兩組差異明顯，甲組低于乙組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 淋巴細(xì)胞亞群比較

兩組T淋巴細(xì)胞亞群CD4+/CD8

+比值沒有明顯差異，甲組為0.53，乙組為0.57，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討 論

對(duì)于手術(shù)的一般創(chuàng)傷可以一定程度改變機(jī)體的免疫功能，手術(shù)損傷的大小和所需時(shí)間與免疫功能所發(fā)生改變的改變程度兩者之間呈正比的關(guān)系。單核- 巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、T 淋巴細(xì)胞構(gòu)成機(jī)體的細(xì)胞免疫。防御感染的主要屏障主要是由中性粒細(xì)胞的吞噬功能發(fā)揮著巨大作用。

[1] 溫澤霖.急診腹腔鏡闌尾切除術(shù)對(duì)2型糖尿病患者胰腺內(nèi)分泌功能的影響[D].重慶醫(yī)科大學(xué),2015.

[2] 劉 玲,阮雅文.腹式與腹腔鏡全子宮切除術(shù)對(duì)患者機(jī)體免疫功能影響的臨床對(duì)比研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,12:1379-1383.

[3] 陳 勇,王勝義,查 健.腹腔鏡下闌尾炎切除術(shù)對(duì)小兒細(xì)胞免疫功能的影響[J].吉林醫(yī)學(xué),2009,23:2934-2936.

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ISSN.2095-8242.2017.049.9544.01

本文編輯：李 豆