溫海蔚，劉燕霏，楊建德

衣原體嚴(yán)格在細(xì)胞內(nèi)寄生，經(jīng)過(guò)特殊的生長(zhǎng)周期以二等分裂繁殖原核細(xì)胞型微生物，現(xiàn)普遍認(rèn)為是介于立克次體和病毒之間的生命體。牛衣原體病在世界各地均有發(fā)生，在我國(guó)新疆、內(nèi)蒙及西北等地多發(fā)，給畜牧業(yè)及公共衛(wèi)生造成不同程度的影響[1-3]。在目前已有資料中，1985至2015年間我國(guó)一共檢測(cè)了22個(gè)地區(qū)的牛衣原體病的感染情況。僅有上海市沒(méi)有檢測(cè)到牛衣原體病的感染，其余21個(gè)地區(qū)都存在有牛衣原體感染的相關(guān)報(bào)道[4-6]。國(guó)內(nèi)已有李永琴等報(bào)道寧夏回族自治區(qū)牛衣原體抗體陽(yáng)性率為25.8%（61/224）[7]。洪尼寧等報(bào)道貴州省牛衣原體陽(yáng)性率為2.86%（24/838）[8]。在青海省也已有關(guān)于牛衣原體的相關(guān)調(diào)查，祁小英等報(bào)道青海省樂(lè)都縣牛衣原體抗體檢測(cè)陽(yáng)性率為2.16%（5/232）[9]?；诒镜貐^(qū)防疫需求，本項(xiàng)目對(duì)青?；ブh開(kāi)展了牛衣原體病的血清學(xué)調(diào)查，以期闡明該病在這些地區(qū)的流行情況，為防制本病提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 待檢血清

青海省互助縣部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)及兩個(gè)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)牛血清765份，其中巴扎鄉(xiāng)、松多鄉(xiāng)、加定鎮(zhèn)為牦牛血清，共62份，其余為乳牛血清703份。由所需要地區(qū)的獸醫(yī)站以及養(yǎng)殖場(chǎng)駐場(chǎng)獸醫(yī)輔助無(wú)菌采血，凝固后分離血清，冷凍保存待檢。

1.2 診斷液

衣原體間接血凝抗原、稀釋液、陰性血清、陽(yáng)性血清購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，批號(hào)150430。

2 方法

2.1 稀釋血清

96孔板每孔加稀釋液75 μL，取待檢血清25 μL加入第1孔，以4倍稀釋?zhuān)瑥牡?孔稀釋至第3孔（即 1∶4、1∶16、1∶64），第 3孔棄去 25 μL，孔內(nèi)液體量仍為75 μL。同一時(shí)間，在同一板上設(shè)陽(yáng)性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照2孔，空白對(duì)照2孔。

2.2 加抗原

在每個(gè)孔中加入稀釋好的抗原25 μL，放在微型振蕩器上，振蕩2 min后蓋上一次性封口膜，然后在37℃下作用2 h判定結(jié)果。

2.3 結(jié)果判定

對(duì)照各孔均成立，則被檢血清1∶16孔出現(xiàn)“++”以上者為陽(yáng)性；1∶4孔出現(xiàn)“+”以下者為陰性；1∶4孔“++”至1∶16孔“+”以下者為可疑[10-12]。

3 結(jié)果與分析

經(jīng)過(guò)對(duì)765份送檢血清檢測(cè)衣原體抗體，衣原體抗體陽(yáng)性檢出率為26.1%（200/765）。松多鄉(xiāng)、巴扎鄉(xiāng)、加定鎮(zhèn)3個(gè)牦牛血清采集點(diǎn)中均檢測(cè)到衣原體抗體，采集點(diǎn)陽(yáng)性檢出率為100.0%；其余9個(gè)乳牛送檢點(diǎn)中6個(gè)檢測(cè)到衣原體抗體，采集點(diǎn)陽(yáng)性檢出率66.7%。檢測(cè)結(jié)果顯示，衣原體在各采集點(diǎn)中存在不同程度的感染。對(duì)不同種類(lèi)的牛、不同送檢點(diǎn)衣原體抗體陽(yáng)性檢出率進(jìn)行了分析（表 1）。

表1 不同種類(lèi)牛衣原體抗體陽(yáng)性檢出率統(tǒng)計(jì)表

由表1可知，乳牛送檢樣品陽(yáng)性檢出率為25.6%（180/703），牦牛送檢樣品陽(yáng)性檢出率為32.3%（20/62）。牦牛送檢樣品陽(yáng)性檢出率高于乳牛送檢樣品陽(yáng)性率。經(jīng)過(guò)卡方檢驗(yàn)p＝1.31（2.71≤p≤3.84，差異顯著），對(duì)乳牛和牦牛衣原體抗體陽(yáng)性檢出率比較差異不顯著。

通過(guò)圖1對(duì)不同采集點(diǎn)進(jìn)行分類(lèi)統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)五十鎮(zhèn)與東溝陽(yáng)性檢出率居高，分別有71.4%（10/14）和66.7%（4/6）；南門(mén)峽鎮(zhèn)、五峰鎮(zhèn)以及威遠(yuǎn)鎮(zhèn)未檢測(cè)出衣原體抗體陽(yáng)性；松多鄉(xiāng)、加定鎮(zhèn)及巴扎鄉(xiāng)所采集的血清為牦牛血清。

圖1 不同采集點(diǎn)牛衣原體抗體陽(yáng)性檢出率

4 討論

本次調(diào)查包含12個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)采集點(diǎn)，其中另有兩個(gè)規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)，調(diào)查結(jié)果具有一定的代表性。在對(duì)765份送檢血清進(jìn)行檢測(cè)后，衣原體抗體陽(yáng)性檢出率為26.1%（200/765）。其中五十鎮(zhèn)、東溝陽(yáng)性檢出率較高，分別為71.4%（10/14）和66.7%（4/6）。南門(mén)峽鎮(zhèn)、五峰鎮(zhèn)以及威遠(yuǎn)鎮(zhèn)未檢測(cè)出衣原體抗體陽(yáng)性，結(jié)果相差較大。分析其原因，五十鎮(zhèn)和東溝鄉(xiāng)地理位置位于較偏遠(yuǎn)山區(qū)，牛均為本地牛且養(yǎng)殖方式多以農(nóng)戶(hù)放養(yǎng)為主，放養(yǎng)較為集中，牛衣原體發(fā)病后會(huì)迅速感染一些抵抗力較弱的牛，導(dǎo)致感染現(xiàn)狀比較嚴(yán)重。南門(mén)峽鎮(zhèn)、五峰鎮(zhèn)、威遠(yuǎn)鎮(zhèn)在近幾年以購(gòu)買(mǎi)外地牛為主，購(gòu)買(mǎi)的外地牛多數(shù)經(jīng)過(guò)衣原體病免疫。本次調(diào)查對(duì)乳牛和牦牛進(jìn)行了分類(lèi)統(tǒng)計(jì)，其中乳牛和牦牛陽(yáng)性檢出率為25.6%（180/703）和32.3%（20/62）。乳牛的衣原體抗體陽(yáng)性檢出率與馬怡雋[12]等報(bào)道的青海省26.4%（60/227）的檢測(cè)結(jié)果相近。牦牛的衣原體陽(yáng)性檢出率與馬德禮[13]等報(bào)道的青海省門(mén)源縣牦牛衣原體陽(yáng)性檢出8.0%（16/200）差別較大。

5 結(jié)論

本次通過(guò)對(duì)青海省互助縣牛衣原體病的調(diào)查，我們了解到青海省互助縣牛衣原體病感染現(xiàn)狀較為嚴(yán)重，有部分地區(qū)陽(yáng)性檢出率很高，針對(duì)這些鄉(xiāng)鎮(zhèn)可采取加強(qiáng)免疫措施；但其他一些地區(qū)未檢測(cè)出陽(yáng)性抗體，地區(qū)之間存在較大差異，這為該縣的牛衣原體病防治工作提供了科學(xué)依據(jù)。

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