李兵++蒙秋艷++廖廣鳳++盧汝梅++朱小勇

摘要：建立了一匹綢中東莨菪苷和東莨菪內(nèi)酯的含量測(cè)定方法。色譜柱為ODS-C18，用甲醇-0.2%磷酸梯度洗脫，流速為0.8 mL/min，柱溫30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為346 nm。東莨菪苷、東莨菪內(nèi)酯0.019 2～0.096 0 mg/mL（r=0.999 9）、0.004 48～0.022 40 mg/mL（r=0.999 5）呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果符合要求。本方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，精密度和重復(fù)性好，可作為一匹綢藥材的含量檢測(cè)方法。

關(guān)鍵詞：一匹綢；HPLC；東莨菪苷；東莨菪內(nèi)酯

中圖分類號(hào)：R284.1；S567 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）01-0123-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.01.031

Determination of Scopolin and Scopoletin in Argyreia acuta by HPLC

LI Bing，MENG Qiu-yan，LIAO Guang-feng，LU Ru-mei，ZHU Xiao-yong

（Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning 530200，China）

Abstract： A HPLC method was established for determination contents of Scopolin and Scopoletin in Argyreia acuta Lour. The separation was performed on ODS-C18 column，with gradient elution in methanol -0.2% H3PO4 solution at the flow rate of 0.8 mL/min. The column temperature was 30 ℃，and the detection wavelength was 346 nm. The results showed that Scopolin and Scopoletin had good linear relationships in range of 0.019 2～0.096 0 mg/mL（r=0.999 9） and 0.004 48～0.022 40 mg/mL（r= 0.999 5）. The methodological results were in line with requirements. The method is simple and accurate， with good precision and repeatability， which could be used for the quality control of Argyreia acuta Lour.

Key words： Argyreia acuta Lour.； high performance liquid chromatography； scopolin； scopoletin

一匹綢為旋花科銀背藤屬植物白鶴藤（Argyreia acuta Lour.）的干燥全草，具有祛風(fēng)除濕、化痰止咳、散癖止血、解毒消痛等功效；用于治療腎炎水腫、肝硬化腹水、風(fēng)濕疼痛、慢性氣管炎、乳痛等癥[1]。一匹綢是廣西壯醫(yī)臨床常用的解毒藥，壯語(yǔ)稱為Godakhab（棵百合），又名白面水雞、白背絲綢等，壯醫(yī)認(rèn)為其具有調(diào)水道、氣道，除濕毒功效，已收載于《廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中，但現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)有對(duì)其中主要有效成分進(jìn)行含量測(cè)定，僅對(duì)其中咖啡酸含量進(jìn)行測(cè)定[2]。

本課題組對(duì)一匹綢的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從中分離得到抗炎有效成分東莨菪苷和東莨菪內(nèi)酯[3]，而一匹綢中東莨菪苷、東莨菪內(nèi)酯含量測(cè)定的方法尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)建立了HPLC法，同時(shí)測(cè)定了其中東莨菪苷和東莨菪內(nèi)酯含量，旨在為一匹綢的質(zhì)量評(píng)價(jià)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

KQ5200B型超聲波清洗儀（江蘇昆山市超聲儀器有限公司）；BSA224S型賽多利斯電子天平，1100型安捷倫液相色譜儀，GL Sciences Inertsil ODS-3 C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）。東莨菪內(nèi)酯（批號(hào)110768-200504，中國(guó)藥品生物制品檢定所），東莨菪苷（批號(hào)YY91053，上海源葉生物科技有限公司）。

一匹綢藥材1～6號(hào)采于廣西各地，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)梁子寧副教授鑒別為旋花科銀背藤屬植物白鶴藤的干燥全草。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱，GL Sciences Inertsil ODS-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.2%磷酸梯度洗脫，流速0.8 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)346 nm；柱溫30 ℃。

1.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱定東莨菪苷、東莨菪內(nèi)酯適量，甲醇溶解，配置成東莨菪苷、東莨菪內(nèi)酯濃度分別為0.074 1、0.022 3 mg/mL的混合對(duì)照品溶液，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾即可。

1.2.3 供試品溶液的制備 取不同產(chǎn)地藥材各1 g，分別加20 mL甲醇，稱重，超聲提取2 h，冷卻至室溫后補(bǔ)重，濾過(guò)取續(xù)濾液，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，制得供試品溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系考察

配置東莨菪苷含量為0.019 2、0.038 4、0.057 6、0.076 8、0.096 0 mg/mL，東莨菪內(nèi)酯含量為0.004 48、0.008 96、0.013 44、0.017 92、0.022 40 mg/mL的混合對(duì)照液5份，分別進(jìn)樣5 μL，測(cè)定峰面積，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為：東莨菪苷y=15 238.055 7x-5.272 649 9（r=0.999 9），在0.019 2～0.096 0 mg/mL線性關(guān)系良好；東莨菪內(nèi)酯y=29 093.227 3x+6.080 748 1（r=0.999 5），在0.004 48～0.022 40 mg/mL線性關(guān)系良好。

2.2 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，每次5 μL，在“1.2.1”色譜條件下測(cè)量東莨菪苷、東莨菪內(nèi)酯峰面積，計(jì)算其RSD值分別為0.16%、0.28%，表明精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，在0～12 h內(nèi)每隔2 h進(jìn)樣5 μL，在“1.2.1”色譜條件下測(cè)量東莨菪苷、東莨菪內(nèi)酯峰面積，計(jì)算其RSD值分別為1.33%、2.28%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批藥材（產(chǎn)地廣西武鳴縣）共6份，各1 g，按“1.2.3”制備供試品溶液，分別進(jìn)樣5 μL，在“1.2.1”色譜條件下測(cè)量東莨菪苷、東莨菪內(nèi)酯峰面積，計(jì)算其RSD值分別為2.07%、1.66%，表明重復(fù)性良好。

2.5 加樣回收率試驗(yàn)

取藥材（產(chǎn)地廣西武鳴縣）0.5 g，各6份，分別加入對(duì)照品（其中東莨菪苷0.698 0 mg，東莨菪內(nèi)酯0.087 0 mg）并加20 mL甲醇，按“1.2.3”制備供試品溶液，分別進(jìn)樣5 μL，在“1.2.1”色譜條件下，測(cè)定峰面積，計(jì)算6份供試品中東莨菪苷和東莨菪內(nèi)酯的平均回收率及RSD值，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.6 樣品測(cè)定

取各產(chǎn)地藥材1 g，按“1.2.3”制備樣品供試液，在“1.2.1”色譜條件下，分別進(jìn)樣5 μL，記錄色譜圖，按外標(biāo)法測(cè)定東莨菪苷、東莨菪內(nèi)酯峰面積，計(jì)算其含量。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 色譜條件優(yōu)化

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[4]，東莨菪苷、東莨菪內(nèi)酯的紫外最大吸收波長(zhǎng)為346 nm，故選定346 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。分別考察不同比例乙腈-水、甲醇-水、甲醇-0.2%磷酸流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在甲醇-0.2%磷酸流動(dòng)相條件下峰型較好，分離度達(dá)到要求，故選擇甲醇-0.2%磷酸為流動(dòng)相。以此流動(dòng)相條件測(cè)量時(shí)分別進(jìn)行不控溫和控制柱溫20和30 ℃，結(jié)果表明控制柱溫為30 ℃時(shí)效果更好更穩(wěn)定。

3.2 樣品提取條件優(yōu)化

試驗(yàn)采用了單因素考察分析方法。分別使用甲醇、95%乙醇進(jìn)行提取，結(jié)果表明甲醇提取效率更佳。考察回流提取、超聲提取，兩種方法提取效率接近，因超聲提取法操作簡(jiǎn)便，故選擇超聲提取方法。分別用10、15、20、25、30倍量甲醇進(jìn)行提取，結(jié)果表明20倍量甲醇提取東莨菪苷和東莨菪內(nèi)酯含量較高?？疾焯崛r(shí)間及提取次數(shù)，分別提取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h，發(fā)現(xiàn)在20倍量甲醇超聲提取2.0 h提取較完全，以此法進(jìn)行2次提取，第二次提取液中東莨菪苷、東莨菪內(nèi)酯的含量極低，故而只需提取1次便可。

參考文獻(xiàn)：

[1] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海：上海科技出版社，1977.

[2] 廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局.廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（第一卷）[M].南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，2008.

[3] 楊澤華.壯藥一匹綢化學(xué)成分及抗炎活性的研究[D].南寧：廣西中醫(yī)藥大學(xué)，2015.

[4] 徐 飛，王曉中，張 雷，等.HPLC測(cè)定寧夏枸杞中東莨菪素和東莨菪苷含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，13（18）：67-69.