林曉云　公維潔　李結(jié)超　陳秋好

【摘 要】以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)對照品，使用超聲波處理提取法提取蜂膠手工皂中的黃酮，再用紫外分光光度法測定黃酮含量。結(jié)果表明，蘆丁濃度與吸光度回歸方程為 Y=0.0989X-0.0094，相關(guān)系數(shù) R2= 0.9992，具有良好線性關(guān)系。通過精密度實驗，計算RSD得值為0.3016%，說明儀器穩(wěn)定性良好。通過重復(fù)性實驗，計算得到1g、2g、3g、4g、5g不同含量的蜂膠手工皂的RSD分別為5.502%、1.861%、1.407%、0.8491%、0.4425%，說明數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性良好。最佳計算結(jié)果顯示當(dāng)蜂膠的添加量為3g，黃酮含量為108.6081mg/g，蜂膠手工皂達(dá)到最佳效果。

【關(guān)鍵詞】蜂膠手工皂；紫外分光光度法；黃酮含量

手工皂是采用傳統(tǒng)工藝純手工制作的肥皂，它可以代替化學(xué)制成品用于清潔護(hù)理。手工皂在制作過程中，通常使用的是天然植物性油脂，不放任何化學(xué)添加劑，可以說是100%天然材料制成。在皂化過程中還會產(chǎn)生天然甘油，使其在皮膚上形成一層天然保護(hù)膜，對皮膚產(chǎn)生超凡的保濕效果。更為可貴的是，可在制作過程中添加各種活性成分如：各類精油、草本植物精華，以提高手工皂的功效，低溫冷制工藝，能夠保留這些天然材料中的營養(yǎng)成分，從而賦予手工皂更豐富的內(nèi)涵[1-4]。此外，更重要的一點是手工皂是環(huán)保產(chǎn)品，使用后生成的脂肪酸鈉易降解，不會對環(huán)境造成污染[5]。

蜂膠，擁有“紫色黃金”的美譽(yù)，營養(yǎng)成分豐富，被廣泛用于日用化工產(chǎn)品中。具有抗菌、抗病毒、抗氧化和清除自由基、增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤、降血糖與降血脂、抗輻射、止癢、排毒、遮光、護(hù)膚、促進(jìn)組織再生和增強(qiáng)SOD活性等藥理作用，蜂膠的化工產(chǎn)品可以改善皮膚的質(zhì)量，使皮膚變得細(xì)膩光滑富有彈性[6]。在手工皂中添加蜂膠制成蜂膠手工皂，其目的是在使用過程中，具有去污效果的同時，還能達(dá)到蜂膠藥理的功效。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

1.1.1 主要儀器

DHG-9245A型電熱溫鼓風(fēng)干燥箱、HWS-26型超級恒溫水浴槽、ES.1200-4型分析天平、TU-1901型雙光束紫外可見分光光度計、X85-2S型恒溫磁力攪拌器、Ju-6224型調(diào)節(jié)型超聲波發(fā)生器。

1.1.2 主要試劑

橄欖油、椰子油、棕櫚油、康富麗牌蜂膠軟膠囊、氫氧化鈉、無水乙醇、蘆丁、硝酸鋁、結(jié)晶氯化鋁、亞硝酸鈉。

1.2 實驗步驟

1.2.1 手工皂的制作

本實驗制作的手工皂為50克，油脂的比例為：橄欖油20%，椰子油20%，棕櫚油60%。配方如表1所示：

稱取氫氧化鈉7.4g，加入17.4g蒸餾水，攪拌溶解。稱取橄欖油10g、椰子油10g、棕櫚油30g，放入恒溫水浴槽中加熱并攪拌，溫度設(shè)定為42℃。待氫氧化鈉溶液降到42℃時，緩慢加入到油脂中。攪拌至粘稠狀，加入蜂膠1g，混勻后，將皂液倒入模具，用保鮮膜封好，放進(jìn)保溫箱，皂化36個小時，待手工皂變硬后，脫模。

按照以上步驟，分別制得0g、1g、2g、3g、4g、5g不同蜂膠含量的蜂膠手工皂。

1.2.2 對照品溶液制備

準(zhǔn)確稱取干燥恒重的蘆丁對照品10mg，用無水乙醇溶解并定容至50mL，得到0.2mg/mL對照品溶液，冷藏備用。

1.2.3 硝酸鋁-亞硝酸鈉-氫氧化鈉顯色劑溶液的配制

1）10%Al（NO3）3溶液：稱取10.0062g硝酸鋁，取90mL去離子水，攪拌溶解，備用；

2）5%NaNO2溶液：稱取5.0051g亞硝酸鈉，取95mL去離子水，攪拌溶解，備用；

3）10%NaOH溶液：稱取10.0038g氫氧化鈉，取90mL去離子水，攪拌溶解，備用。

1.2.4 原材料處理

分別準(zhǔn)確稱取蜂膠手工皂2克，加入30mL無水乙醇溶液，進(jìn)行超聲波處理。處理后的液體放入冰水冷卻后進(jìn)行擠壓渣滓，過濾，除去殘余皂基，保留乙醇相。余渣另加10mL無水乙醇，再次進(jìn)行超聲波處理、擠壓渣滓、過濾，反復(fù)2～3次，直至濾渣皂基基本發(fā)白，合并濾液，用無水乙醇定容至50mL，此為蜂膠手工皂樣品待測試液。

1.2.5 最大吸收波長的研究

準(zhǔn)確吸取1mL 0.2mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液于25mL容量瓶中，加入5%NaNO2溶液1mL，搖勻，靜置6min，然后加入10% Al（NO3）3溶液1mL，搖勻，靜置6min，再加入10%NaOH溶液10mL，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置15min。以不加蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的空白試劑為參比，在400-700nm波長范圍進(jìn)行波長掃描，得最大吸收波長。

1.2.6 蜂膠手工皂中黃酮含量的測定實驗

1）蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

準(zhǔn)確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00mL，1.00mL，2.00mL，3.00mL，4.00mL，5.00mL，6.00mL，分別置于25mL容量瓶中，分別加5%NaNO2溶液1mL，搖勻，靜置6min，然后加入10%Al（NO3）3溶液1mL，搖勻，靜置6min，再加入10%NaOH溶液10mL，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置15min。以不加蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的空白試劑為參比，在508nm波長處測定吸光度。

以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程。

2）蜂膠手工皂皂基干擾實驗

分別準(zhǔn)確移取不同含量的手工皂樣品溶液10mL各1份，分別置于50mL容量瓶中，分別加5%NaNO2溶液1mL，搖勻，靜置6min，然后加入10%Al（NO3）3溶液1mL，搖勻，靜置6min ，再加入10%NaOH溶液10mL，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置15min。以不加蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的空白試劑為參比，在508nm波長處測定吸光度。

3）蜂膠手工皂中黃酮含量的測定

分別準(zhǔn)確移取不同含量的蜂膠手工皂樣品溶液10mL各1份，分別置于50mL容量瓶中，分別加5%NaNO2溶液1mL，放置6min，然后加入10%Al（NO3）3溶液1mL，放置6min，再加入10%NaOH溶液10mL，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15min。以什么試劑都不加，只加樣品溶液為參比，在508nm波長處測定吸光度。代入回歸方程求出對應(yīng)蘆丁含量的濃度，計算出黃酮含量。

4）精密度試驗

準(zhǔn)確移取2mL 0.2mg/mL蘆丁供試品溶液置于25mL容量瓶中，加5%NaNO2溶液1mL，搖勻，靜置6min，然后加入10%Al（NO3）3溶液1mL，搖勻，靜置6min ，再加入10%NaOH溶液10mL，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置15min。以空白試液為參比，在波長508nm處測定吸光度，平行測定5次。

5）重復(fù)性實驗

準(zhǔn)確稱取蜂膠加入量為1g的蜂膠手工皂2g，平行稱取5次，并標(biāo)號1、2、3、4、5，按照1.2.4原材料的處理方法進(jìn)行處理，得到處理后的樣品溶液，然后分別準(zhǔn)確移取1號至5號的樣品液10mL，置于50mL容量瓶中，分別加5%NaNO2溶液1mL，搖勻，靜置6min，然后加入10%Al（NO3）3溶液1mL，搖勻，靜置6min，再加入10%NaOH溶液10mL，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置15min。以什么試劑都不加，只加樣品溶液為參比，在508nm波長處測定吸光度。

按照以上方法，分別測定蜂膠加入量為2g、3g、4g、5g的蜂膠手工皂的吸光度值。

1.2.7 黃酮含量的對比

根據(jù)所得實驗數(shù)據(jù)，以蜂膠添加量為橫坐標(biāo)，黃酮含量為縱坐標(biāo)，繪制圖形。

2 結(jié)果與分析

2.1 蜂膠手工皂的制備

產(chǎn)品外形光滑整齊， 色澤均勻，恒重數(shù)據(jù)見表2。

2.2 最大吸收波長的確定

如圖1所示，在508nm處有最大吸光度，所以選擇波長在508nm測定。

2.3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

由所測實驗數(shù)據(jù)，得到回歸方程Y=0.0989X-0.0094，r2=0.9992。實驗表明，蘆丁含量在0.0～1.2mg/mL與吸光度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.4 皂基干擾實驗

由表3可知：沒有加蜂膠的樣品液也有吸光度，主要是受皂基的影響，顯現(xiàn)出皂基的顏色。所以本實驗用的參比溶液選擇什么試劑都不加，只加樣品溶液。

2.5 蜂膠手工皂中黃酮含量的測定

將實驗所測吸光度帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程Y=0.0989X-0.0094，求出對應(yīng)蘆丁含量的濃度，再代入公式：

得出不同含量的蜂膠手工皂中總黃酮的含量如表4所示：

2.6 精密度實驗

由表5中實驗測數(shù)據(jù)可見， RSD值為0.3016%，說明儀器的穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性實驗

由表6可知，1g、2g、3g、4g、5g不同含量的蜂膠手工皂的RSD分別為5.502%、1.861%、1.407%、0.8491%、0.4425%，說明數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性良好。

2.8 黃酮含量的對比

根據(jù)所得實驗數(shù)據(jù)，以蜂膠添加量為橫坐標(biāo)，黃酮含量為縱坐標(biāo)，繪制圖形。系列1表示手工皂中黃酮含量隨蜂膠添加量的變化曲線，系列2表示理論黃酮含量隨蜂膠添加量的變化曲線。如圖所示，黃酮含量隨著蜂膠添加量的增加呈比例上升，表現(xiàn)出相應(yīng)的線性關(guān)系。將所測值和理論值進(jìn)行比較，實驗數(shù)據(jù)相差不大。說明在手工皂制作過程中，蜂膠有效成分的損失較小。

2.9 最佳含量的確定

在使用蜂膠手工皂過程中，若想體現(xiàn)蜂膠的最大功效，必須找出一個蜂膠手工皂中黃酮含量的最佳值。由文獻(xiàn)知化工產(chǎn)品中加入1-5%的蜂膠，才能達(dá)到保護(hù)皮膚、清除體表污垢、預(yù)防外在感染以及其它醫(yī)療保健功效[7]。根據(jù)所測得的數(shù)據(jù)，當(dāng)蜂膠的添加量為3g，黃酮含量為108.6081mg/g時，蜂膠手工皂的效果達(dá)到最佳，結(jié)果見表7：

3 結(jié)論

本文采用紫外分光光度法，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)試液為對照品，以亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉為緩沖溶液的顯色體系，分別于508nm處分別測定蜂膠手工皂中的黃酮含量，建立了黃酮濃度吸光度關(guān)系的回歸方程Y=0.0989X-0.0094（R2=0.9992）。

測得1g至5g不同含量的蜂膠手工皂中黃酮含量分別為31.1719mg/g、68.3090mg/g、108.6081mg/g、147.2818mg/g、186.5615mg/g；與理論值40mg/g、80mg/g、120mg/g、160mg/g、200mg/g對比相差不大，其原因在于進(jìn)行超聲波處理后，過濾時有少量的黃酮存在皂基中，沒有過濾出來。精密度實驗的RSD為0.3016%，1g-5g不同含量的蜂膠手工皂的重復(fù)性實驗的RSD分別為5.502%、1.861%、1.407%、0.8491%、0.4425%，實驗數(shù)據(jù)表明精密度及重復(fù)性的效果良好。結(jié)合文獻(xiàn)及實驗結(jié)果得出：蜂膠的添加量為3g，黃酮含量為108.6081mg/g時，蜂膠手工皂的效果達(dá)到最佳。本文對蜂膠手工皂的制作及工藝進(jìn)行研究，數(shù)據(jù)可靠，為以后蜂膠手工皂的開發(fā)和評價提供科學(xué)的參考依據(jù)。

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[責(zé)任編輯：朱麗娜]