張良文　魏丹 何愛國(guó)

摘 要 目的了解及評(píng)價(jià)過氧碳酸鈉對(duì)耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌）的殺滅效果。方法采用懸液定量殺菌方法；以殺滅率判定過氧碳酸鈉對(duì)耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌）的殺菌效果，并與金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、銅綠假單胞菌（ATCC15442）大腸桿菌（ATCC25922）的標(biāo)準(zhǔn)菌株做平行殺滅實(shí)驗(yàn)。結(jié)果不同濃度（0.20%、0.50%、1.00%）的過氧碳酸鈉對(duì)耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌），作用不同時(shí)間（5min、10min、15min），殺滅率達(dá)80.00%以上。結(jié)論過氧碳酸鈉對(duì)耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌）具有很好的殺滅效果。濃度越高，作用時(shí)間越長(zhǎng)，殺菌作用越強(qiáng)。

關(guān)鍵詞 過氧碳酸鈉 耐藥菌株 殺滅效果

中圖分類號(hào)：R187.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

過氧碳酸鈉溶于水后離解成過氧化氫、碳酸根離子和鈉離子。它們都是人體和環(huán)境中自然存在的物質(zhì)，會(huì)吸收環(huán)境中的二氧化碳，釋放氧氣。不致癌、不致畸形、不刺激皮膚。過氧碳酸鈉在水中，持續(xù)釋放出大量的活性氧，活性氧非?；顫?，能穿透細(xì)菌的細(xì)胞壁，滲入細(xì)胞內(nèi)氧化細(xì)菌、病毒的蛋白質(zhì)和核糖核酸，干擾其新陳代謝，從而殺除耐藥菌株和病毒。

1材料與方法

過氧碳酸鈉由天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)為20100602。以下檢測(cè)方法與步驟均按衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》2008版要求進(jìn)行。耐藥菌株金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌，由中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系實(shí)驗(yàn)中心提供，標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、銅綠假單胞菌（ATCC15442）大腸桿菌（ATCC25922）的標(biāo)準(zhǔn)菌株購自中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。

1.1菌懸液的制備

分別取耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌）和標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、銅綠假單胞菌（ATCC15442）大腸桿菌（ATCC25922）的培養(yǎng)物，把各菌群放入培養(yǎng)瓊脂中，使用5mL稀釋液對(duì)其進(jìn)行清洗，并進(jìn)行混合，從而達(dá)到細(xì)菌懸浮的均勻狀態(tài)，配制成所需濃度的菌懸液，備用。

1.2中和劑鑒定試驗(yàn)

用滅菌蒸餾水配制不同濃度的過氧碳酸鈉溶液（0.2%、0.5%、1.0%），作為按0.5%、把耐藥菌株和標(biāo)準(zhǔn)菌株相應(yīng)的分成三組：第一組，以金黃色葡萄球菌的耐藥菌株和標(biāo)準(zhǔn)菌株為試驗(yàn)菌；第二組，以銅綠假單胞菌的耐藥菌株和標(biāo)準(zhǔn)菌株為試驗(yàn)菌；第三組，以大腸埃希菌的耐藥菌株和標(biāo)準(zhǔn)菌株為試驗(yàn)菌。各設(shè)計(jì)6組試驗(yàn)，按懸液定量殺菌試驗(yàn)程序進(jìn)行。（1）過氧碳酸鈉溶液+菌懸液；（2）（過氧碳酸鈉溶液+菌懸液）+中和劑；（3）中和劑+菌懸液；（4）（過氧碳酸鈉溶液+中和劑）+菌懸液；（5）稀釋液+菌懸液；（6）稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基。以第一組為例，濃度為1.00%的消毒劑作用10min，第1、2組無菌生長(zhǎng)或有少量菌生長(zhǎng)，第3、4、5組有相似量試驗(yàn)菌生長(zhǎng)，懸液試驗(yàn)在1？07cfu/mL～5？07cfu/mL之間，其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過15%，第6組無菌生長(zhǎng)。表明所選中和劑及其濃度為適宜。

1.3過氧碳酸鈉溶液定量殺菌試驗(yàn)

取0.5mL菌懸液和0.5mL有機(jī)干擾物質(zhì)在20℃？℃水浴中5min后，再用無菌吸液管加入4.0mL過氧碳酸鈉溶液，迅速混勻并立即計(jì)時(shí)，對(duì)不同濃度的過氧碳酸鈉溶液（0.2%、0.5%、1.0%）作用至預(yù)定時(shí)間（5min、10min、15min），分別吸取0.5mL試驗(yàn)菌與過氧碳酸鈉溶液混合液加于4.5mL中和劑中，混勻，作用10min后，取1.0mL該液按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測(cè)定存活菌數(shù)。如平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)較多時(shí)，進(jìn)行系列10倍稀釋后，再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。同時(shí)用標(biāo)準(zhǔn)硬水代替過氧碳酸鈉溶液，進(jìn)行平行試驗(yàn)，作為陽性對(duì)照。各組試驗(yàn)重復(fù)3次，分別計(jì)算殺滅率。

1.4質(zhì)量控制

整個(gè)試驗(yàn)操作嚴(yán)格按照《消毒技術(shù)規(guī)范》2008版的要求進(jìn)行，試驗(yàn)操作人員都經(jīng)過了專業(yè)培訓(xùn)。資料數(shù)據(jù)經(jīng)嚴(yán)格審查核對(duì)。

1.5數(shù)據(jù)處理

資料采用Excel2003進(jìn)行錄入?yún)R總，并利用Excel2003計(jì)算殺滅率。

2結(jié)果

2.1中和劑鑒定試驗(yàn)

用含5g/L硫代硫酸鈉、20g/L吐溫80的PBS溶液作為中和劑，結(jié)果顯示，第一組不長(zhǎng)菌，第二組長(zhǎng)少量菌，第三、四、五組組間菌落數(shù)相差≤15%，第六組不長(zhǎng)菌，表明中和劑可有效中和過氧碳酸鈉溶液對(duì)金黃色葡萄球菌的殘留作用，且對(duì)培養(yǎng)基無不良影響。見表1。

2.2 過氧碳酸鈉溶液定量殺菌試驗(yàn)

結(jié)果表明，過氧碳酸鈉溶液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株和耐藥菌株的殺滅率無顯著性差異。在0.20%、0.50%、1.00%的過氧碳酸鈉溶液對(duì)金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株和耐藥菌株分別作用5min、10min、15 min，平均殺滅率見表2。

3討論

由于過氧碳酸鈉無味、無毒，冷水中易于溶解，去污力強(qiáng)，溶于水后能放出氧而起到漂白殺菌等多種功效，符合現(xiàn)代洗滌劑發(fā)展潮流。

近年來，由于耐藥菌株所致感染的流行性疾病和發(fā)病率都呈逐年上升的趨勢(shì)，而且其耐藥性也逐年增加，尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA），對(duì) -內(nèi)酰胺類及其他多種抗菌藥物耐藥，所導(dǎo)致的各種感染治療困難，病死率較高，因此逐漸引起臨床的重視。細(xì)菌生物膜（bacterialbiofilm，BBF）是指附著于有生命或無生命物體表面被細(xì)菌胞外大分子包裹的有組織的細(xì)菌群體及其分泌的多糖基質(zhì)、纖維蛋白、脂蛋白等多糖蛋白復(fù)合物。是細(xì)菌耐藥性形成的重要機(jī)制之一，也是許多慢性感染性疾病反復(fù)發(fā)作和難以控制的主要原因。過氧碳酸鈉分解產(chǎn)物中的羥基自由基（HO2-），其羥基自由基因其具有很高的氧化電勢(shì)，能夠破壞微生物通透性屏障，破壞病原微生物的蛋白質(zhì)、酶和核酸，導(dǎo)致病原微生物的死亡。在低濃度下對(duì)革蘭氏陽性菌（如金黃色葡萄球菌）、革蘭氏陰性菌、酵母、藻類等均有顯著的殺滅效果。

根據(jù)聯(lián)合國(guó)環(huán)境署公布的《經(jīng)合組織過氧碳酸鈉篩選數(shù)據(jù)組》和歐盟Human&EnvironmentalRiskAssessment（簡(jiǎn)稱HERA）項(xiàng)目專家報(bào)告《過氧碳酸鈉對(duì)人類和環(huán)境的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估》，過氧碳酸鈉溶于水后離解成過氧化氫、碳酸根離子和鈉離子，它們都是人體和環(huán)境中自然存在的物質(zhì)。

過氧碳酸鈉，溶于水后離解成過氧化氫、碳酸根離子和鈉離子，其實(shí)也相當(dāng)于是一個(gè)過氧化氫復(fù)方消毒劑。有文獻(xiàn)報(bào)道過氧化氫與許多理化因子均有協(xié)同增效作用，如有機(jī)酸、碘化鉀、硝酸銀螯合物等。本研究結(jié)果表明，不同濃度（0.20%、0.50%、1.00%）的過氧碳酸鈉對(duì)耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌），作用不同時(shí)間（5min、10min、15min），殺滅率達(dá)80.00%以上。結(jié)論過氧碳酸鈉對(duì)耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌）具有很好的殺滅效果。濃度越高，作用時(shí)間越長(zhǎng)，殺菌作用越強(qiáng)。

綜上所述，過氧碳酸鈉性能穩(wěn)定，受有機(jī)物的干擾小，對(duì)耐藥菌株（金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌）殺滅效果好，能夠廣泛應(yīng)用于人口相對(duì)集中的公共場(chǎng)所。

（通信作者：魏丹）

基金項(xiàng)目：湖南省科技廳資助項(xiàng)目（2011SK3259）。

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