時慶欣，張盛，王玄源(湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430065)

丁建中 (長江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434023)

宋成武，蘇明武，黃榮增 (湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430065)

HPLC法測定杏蘇散提取物中活性成分苦杏仁苷和迷迭香酸含量

時慶欣，張盛，王玄源
(湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430065)

丁建中
(長江大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 荊州 434023)

宋成武，蘇明武，黃榮增
(湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北 武漢 430065)

目的：采用反相高效液相色譜雙波長法測定杏蘇散水提液中苦杏仁苷和迷迭香酸的含量。方法：采用色譜柱為HPLC反向C18色譜柱 (4.6mm×250mm, 5μm)梯度洗脫，雙波長為λ1=222nm，λ2=330nm，流速為1.0mL/min，柱溫為30℃。結(jié)果：苦杏仁苷對照品線性關(guān)系良好，r=0.9999，回歸方程為Y=27.390X+0.0522，線性范圍為0.08～0.64μg；迷迭香酸對照品線性關(guān)系良好，r=0.9997，回歸方程為Y=26.141X+0.0905，線性范圍為0.04～0.32μg?？嘈尤受掌骄訕踊厥章蕿?8.59%，RSD=1.6%(n=6)；苦杏仁苷平均加樣回收率為98.86%，RSD=2.1%(n=6)。結(jié)論：方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，為杏蘇散的質(zhì)量控制和評價提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

杏蘇散；苦杏仁苷；迷迭香酸；反相高效液相色譜法；雙波長法

杏蘇散為我國經(jīng)典中藥復(fù)方，具有輕宣涼燥，理肺化痰之功效，主要用于治療上呼吸道感染、慢性支氣管炎。該方出自吳鞠通的《溫病條辨.中秋燥勝氣論》，其中苦杏仁和紫蘇為復(fù)方中的重要組成藥物[1]?？嘈尤受蘸兔缘闼岱謩e是中藥苦杏仁和紫蘇葉中的指標(biāo)性活性成分，具有眾多藥理活性，包括抗氧化、抗炎、抗腫瘤、抗菌等藥效作用[2～4]。

雙波長法和反相高效液相色譜法是中藥及其復(fù)方中有效成分質(zhì)量控制最為常用的方法[5～7]。因此，本研究利用該方法構(gòu)建杏蘇散水煎液中的兩種功效性成分(苦杏仁苷和迷迭香酸)的定量分析方法，進(jìn)一步為該復(fù)方制劑的質(zhì)量控制提供有效的分析檢測手段。

1 儀器與試劑

復(fù)方中所有藥材均購自湖北清大中藥飲片有限責(zé)任公司，經(jīng)湖北中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室鑒定。迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)品和苦杏仁苷標(biāo)準(zhǔn)品購自中國藥品生物檢定所。HPLC設(shè)備為Dionex-P680型號高效液相色譜儀乙腈為色譜純，流動相試劑甲醇、乙腈為色譜純(Fisher)、分析純甲酸購自國藥集團(tuán)，色譜用純凈水自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品和樣品溶液的制備

1)杏蘇散水煎液 10倍量水煎煮提取3次，每次提取1h。過濾，合并濾液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至一定體積，微孔濾膜(0.45μm)過濾，直接用于HPLC分析。

2)對照品溶液 精密稱曲一定量標(biāo)準(zhǔn)品苦杏仁苷和迷迭香酸，分別制備濃度為80μg/mL和40μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，使用時按比例稀釋成不同濃度工作液。

3)陰性對照溶液 按照供試品溶液相同制備方法制備苦杏仁、紫蘇葉陰性對照溶液。

2.2 色譜條件

參照已發(fā)表文獻(xiàn)條件[8～12]，流動相為乙腈-甲酸水；色譜柱：Aglient TC-C18柱 (4.6mm×250mm, 5μm) ；梯度條件為：0～30min，6%A；30～70min，27%A；70～80min，6%A；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：λ1=222nm (0～40min)，λ2=330nm (40～70min)。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

圖1 對照品溶液色譜

取上述制備好的對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各5μL，進(jìn)行HPLC分析。色譜圖見下圖1、2、3。

2.4 線性關(guān)系

用上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液，加甲醇制備濃度為160μg/mL的苦杏仁苷對照品工作液，并分別精密吸1、2、4、6、8mL該溶液于10mL容量瓶中，定容搖勻，分別進(jìn)行HPLC分析(所有分析重復(fù)進(jìn)樣3次)。數(shù)據(jù)結(jié)果以色譜中峰面積平均值(Y)對苦杏仁苷進(jìn)樣量(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程。制備迷迭香酸80μg/mL工作液，利用上述同樣方法HPLC進(jìn)樣分析，進(jìn)行線性關(guān)系考察。

圖2 杏蘇散水提液色譜圖 圖3 陰性對照溶液色譜圖

結(jié)果表明，苦杏仁苷在0.08～0.64μg(Y=27.390X+0.0522，r=0.9999)范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；迷迭香酸在0.04～0.32μg(Y=26.141X+0.0905，r=0.9997)范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

采用同樣HPLC分析方法，進(jìn)行6次杏蘇散水煎液分析(進(jìn)樣量為10μL)，結(jié)果RSD=0.2%，情況良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

采用同樣HPLC分析方法，于0、2、4、8、12、24h測定杏蘇散水提取液中苦杏仁苷和迷迭香酸的峰面積，計算RSD=0.6%，說明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定情況良好。

2.7 重復(fù)性試驗

采用同樣HPLC分析方法，對樣品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次分析，計算后得到的苦杏仁苷含量為0.8219mg/g(RSD=1.5%)；迷迭香酸含量為0.4211mg/g(1.5%)。

2.8 加樣回收試驗

取上述2.7中的樣品溶液，分別精密加入一定量的苦杏仁苷和迷迭香酸對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用同樣HPLC分析方法。結(jié)果見表1、表2。

表1 杏蘇散水煎液中苦杏仁苷的加樣回收率實驗結(jié)果

表2 杏蘇散水煎液中迷迭香酸的加樣回收率實驗結(jié)果

2.9 含量測定

按杏蘇散制備工藝制備3批樣品，按上述HPLC分析方法，利用外標(biāo)法測定杏蘇散水煎液中苦杏仁苷和迷迭香酸的含量，結(jié)果見表3。

表3 杏蘇散水煎液中苦杏仁苷和迷迭香酸的含量結(jié)果

3 結(jié)論

本實驗對杏蘇散中苦杏仁苷和迷迭香酸的測量波長進(jìn)行了考察，結(jié)果表明當(dāng)波長λ1=222nm，λ2=330nm，基線平整，噪音較小。本實驗所建立的雙波長-HPLC法測定杏蘇散中苦杏仁苷和迷迭香酸含量的分析方法簡單、準(zhǔn)確、有效。為該中藥經(jīng)典復(fù)方的質(zhì)量控制分析方法奠定了堅實的基礎(chǔ)。同時，該方法可為在其它中藥及中藥復(fù)方中測定苦杏仁苷和迷迭香酸含量的研究中提供經(jīng)驗借鑒。

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[編輯] 一凡

2016-12-20

國家自然科學(xué)基金資助項目(81173147)。

時慶欣(1993-)，男，碩士生，主要從事藥物分析方法的研究與設(shè)計；通信作者：黃榮增，hrz0909@163.com。

R917

A

1673-1409(2017)04-0001-03

[引著格式]時慶欣，張盛，王玄源，等.HPLC法測定杏蘇散提取物中活性成分苦杏仁苷和迷迭香酸含量[J].長江大學(xué)學(xué)報(自科版)，2017，14(4)：1～3.