徐炎良 陳春香

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化療對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌患者表皮生長(zhǎng)因子受體基因突變狀態(tài)的影響

徐炎良 陳春香

目的 探討化療對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)基因突變狀態(tài)的影響。方法 選取85例晚期NSCLC患者作為研究對(duì)象?；熐?、化療4～6個(gè)周期后均采集所有研究對(duì)象的外周血，采用酶切富集聯(lián)合變性高效液相色譜法(REDE-DHPLC)檢測(cè)EGFR-19外顯子、EGFR-21外顯子的突變狀態(tài)。結(jié)果 85例晚期NSCLC患者化療前EGFR突變陽(yáng)性率為55.29%(47/85)，化療4～6個(gè)周期后EGFR突變陽(yáng)性率為35.29%(30/85)，化療前后EGFR突變陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?；熐昂蠊灿?7例晚期NSCLC患者發(fā)生EGFR突變，其中27例從EGFR突變陽(yáng)性轉(zhuǎn)為EGFR突變陰性，10例患者從EGFR突變陰性轉(zhuǎn)為EGFR突變陽(yáng)性，兩種突變模式發(fā)生率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 晚期NSCLC患者化療過(guò)程中EGFR突變狀態(tài)可能會(huì)發(fā)生改變，因此在給予其靶向治療前應(yīng)重新對(duì)其進(jìn)行EGFR突變檢查。

非小細(xì)胞肺癌；表皮生長(zhǎng)因子受體；基因突變

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:386～388)

諸多研究表明，分子靶向治療已成為晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者的重要治療手段之一，但是其療效取決于患者的表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)基因突變狀態(tài)[1-2]。值得注意的是，分子靶向治療的費(fèi)用昂貴，因此在此之前有必要給予患者EGFR基因突變狀態(tài)檢查[3]。由于多數(shù)晚期NSCLC患者在入院時(shí)常先采用化療治療，而化療前后患者EGFR基因突變狀態(tài)是否會(huì)改變則有待我們進(jìn)一步研究。本研究即旨在探討化療對(duì)晚期NSCLC患者EGFR基因突變狀態(tài)的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2013年1月至2015年12月在江西省腫瘤醫(yī)院接受化療的85例晚期NSCLC患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)組織學(xué)和(或)細(xì)胞學(xué)檢查確診為NSCLC；②臨床分期為Ⅲb期～Ⅳ期；③KPS評(píng)分>60分，預(yù)計(jì)生存期>3個(gè)月；④簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往已接受手術(shù)或其他抗腫瘤治療；②各種原因?qū)е禄熤芷跀?shù)<4個(gè)。上述85例晚期NSCLC患者，男性59例，女性26例；年齡47.2～70.9歲，平均(56.5±5.8)歲；病理類型：腺癌49例、鱗癌36例；臨床分期：Ⅲb期53例，Ⅳ期32例。

1.2 研究方法

1.2.1 化療方案 所有患者均接受一線化療方案治療，包括GP方案(鉑類+吉西他濱)、DP方案(鉑類+多西他賽)、AP方案(鉑類+培美曲塞)等。NSCLC非鱗癌患者首選AP方案化療，NSCLC鱗癌患者可選擇GP方案或DP方案化療，化療周期數(shù)為4～6個(gè)。

1.2.2 EGFR突變狀態(tài)檢測(cè) 方法如下：①空腹采集所有研究對(duì)象外周血4 ml，乙二胺四乙酸二鉀抗凝，離心分離血漿，采用QIAamp DNA Blood Mini Kit試劑盒(美國(guó)QIAGEN公司)提取游離DNA。注意化療前、化療4～6個(gè)周期后均進(jìn)行EGFR突變狀態(tài)檢測(cè)；②第一輪PCR擴(kuò)增體系：10×PCR緩沖液2 μl、5U/μl Taq DNA聚合酶0.2 μl、10 μmol/μl dNTP 2 μl、10 μmol/μl上游引物1 μl、10 μmol/μl下游引物1 μl、模板DNA 2 μl。PCR擴(kuò)增參數(shù)：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 50 s，40個(gè)循環(huán)；72 ℃ 7 min。③EGFR-19外顯子突變檢測(cè)：將第一輪PCR產(chǎn)物加入含有Mse Ⅰ(美國(guó)NEB公司)的酶切體系，37 ℃孵育150 min，對(duì)酶切產(chǎn)物進(jìn)行第二輪PCR擴(kuò)增，其擴(kuò)增體系、擴(kuò)增參數(shù)與第一輪PCR擴(kuò)增一致，采用DNASep柱(美國(guó)Transgenomic公司)對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析。④EGFR-21外顯子突變檢測(cè)：將第一輪PCR產(chǎn)物加入含有Msc Ⅰ(美國(guó)NEB公司)的酶切體系，37 ℃孵育150 min，對(duì)酶切產(chǎn)物進(jìn)行第二輪PCR擴(kuò)增，其擴(kuò)增體系、擴(kuò)增參數(shù)與第一輪PCR擴(kuò)增一致，對(duì)產(chǎn)物采用Sau 96Ⅰ(美國(guó)Transgenomic公司)進(jìn)行酶切，95℃孵育5min，以1℃/min速度降至35 ℃復(fù)性，采用DNASep柱對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SAS 9.3統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，研究對(duì)象化療前后EGFR突變狀態(tài)比較采用配對(duì)設(shè)計(jì)χ2檢驗(yàn)，兩種突變模式發(fā)生率比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

85例晚期NSCLC患者化療前EGFR突變陽(yáng)性率為55.29%(47/85)，化療4～6個(gè)周期后EGFR突變陽(yáng)性率為35.29%(30/85)，化療前后EGFR突變陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。化療前后共有37例晚期NSCLC患者發(fā)生EGFR突變，其中27例從EGFR突變陽(yáng)性轉(zhuǎn)為EGFR突變陰性，化療前后EGFR突變陽(yáng)性轉(zhuǎn)陰性發(fā)生率為57.45%(27/47)，10例患者從EGFR突變陰性轉(zhuǎn)為EGFR突變陽(yáng)性，化療前后EGFR突變陰性轉(zhuǎn)陽(yáng)性發(fā)生率為33.33%(10/30)，兩種突變模式發(fā)生率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

化療是目前臨床上治療各種晚期惡性腫瘤最常用的方法，盡管其療效已經(jīng)獲得了充分認(rèn)可，但是由于化療常導(dǎo)致患者繼發(fā)嚴(yán)重的毒副反應(yīng)，并且其療效尚有進(jìn)一步提升的空間，因此探索療效更好、安全性更高的治療手段成為當(dāng)前腫瘤學(xué)研究的重要課題[4-5]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，分子靶向治療逐步應(yīng)用于臨床，該治療手段主要針對(duì)腫瘤特異的基因異常進(jìn)行治療，從而具有針對(duì)性強(qiáng)、療效較好、副作用輕等優(yōu)點(diǎn)[6]。盡管費(fèi)用問(wèn)題限制了分子靶向治療的大規(guī)模推廣使用，但是對(duì)于經(jīng)濟(jì)條件較好的患者來(lái)說(shuō)，分子靶向治療不失為一種理想的抗腫瘤治療手段。

肺癌是目前臨床上分子靶向治療研究最多的惡性腫瘤之一，肺癌領(lǐng)域應(yīng)用的治療靶點(diǎn)已包括EGFR、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、間變淋巴瘤激酶(ALK)等[7]。國(guó)內(nèi)以EGFR研究最為透徹。邱純等[8]報(bào)道，吉非替尼治療晚期NSCLC患者的無(wú)進(jìn)展生存期(PFS)顯著高于標(biāo)準(zhǔn)化療組，由此可見(jiàn)吉非替尼治療NSCLC的遠(yuǎn)期療效優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)化療。朱國(guó)煉等[9]報(bào)道，厄羅替尼治療晚期NSCLC患者的臨床總有效率、疾病控制率均顯著高于多西他賽，而不良反應(yīng)發(fā)生率則顯著低于多西他賽，由此可見(jiàn)厄羅替尼是治療晚期NSCLC安全、有效的藥物之一。由此可見(jiàn)，分子靶向治療晚期NSCLC的疾病控制時(shí)間、有效率、安全性均優(yōu)于傳統(tǒng)化療，其治療晚期NSCLC已倍受臨床青睞。

值得注意的是，分子靶向治療的費(fèi)用極其昂貴，因此臨床多將其作為晚期惡性腫瘤患者的二線甚至三線治療方案，即很多接受分子靶向治療的惡性腫瘤患者既往常有化療史[10]。由于分子靶向治療的基礎(chǔ)就是腫瘤特異的基因異常，如果化療對(duì)腫瘤特異基因異常產(chǎn)生一定的影響，這勢(shì)必會(huì)影響分子靶向治療的療效，因此本研究探討化療對(duì)晚期NSCLC患者EGFR基因突變狀態(tài)的影響就具有重要的臨床意義。

在本研究中，我們先對(duì)85例晚期NSCLC患者進(jìn)行EFGR突變狀態(tài)檢查，然后給予研究對(duì)象4～6個(gè)療程的化療，化療結(jié)束后再對(duì)所有患者進(jìn)行EFGR突變狀態(tài)檢查，結(jié)果顯示研究對(duì)象化療前后EGFR突變陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，進(jìn)一步分析顯示57.45%的晚期NSCLC患者由化療前的EGFR突變陽(yáng)性轉(zhuǎn)變?yōu)榛熀蟮腅GFR突變陰性，33.33%的晚期NSCLC患者由化療前的EGFR突變陰性轉(zhuǎn)變?yōu)榛熀笫荅GFR突變陽(yáng)性，兩種突變模式發(fā)生率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。綜上所述，晚期NSCLC患者在化療過(guò)程中EGFR突變狀態(tài)可能會(huì)發(fā)生改變，因此在給予其靶向治療前應(yīng)重新對(duì)其進(jìn)行EGFR突變檢查，但是化療誘使EGFR突變狀態(tài)改變的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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(編輯：吳小紅)

Influence of Chemotherapy on Epidermal Growth Factor Receptor Gene Mutations inPatients with Advanced Non-small Cell Lung Cancer

XU Yanliang,CHEN Chunxiang.

Jiangxi Cancer Hospital,Nanchang，330029

Objective To investigate the influence of chemotherapy on epidermal growth factor receptor gene(EGFR) mutations in patients with advanced non-small cell lung cancer(NSCLC).Methods 85 cases of advanced NSCLC were selected.Peripheral blood was collected from all the subjects before and after 4～6 cycles of chemotherapy,then EGFR exon 19 and exon 21 mutations were detected by restriction endonuclease digestion combine with denaturing high performance liquid chromatography (REDE-DHPLC).Results The EGFR mutation positive rate was 55.29% (47/85) in 85 cases of advanced NSCLC before chemotherapy,then the EGFR mutation positive rate converted to 35.29% after 4～6 cycles of chemotherapy.There was statistical difference in EGFR mutation positive rate between before and after chemotherapy(P<0.05).37 cases of advanced NSCLC had EGFR mutations before and after chemotherapy,including 27 cases from positive EGFR mutation to negative EGFR mutation,10 patients from negative EGFR mutation to positive EGFR mutation.There was statistical difference in incidence rate between 2 kinds of mutation models(P<0.05).Conclusion EGFR mutation status may change during chemotherapy in patients with advanced NSCLC,so it should be re-examined before targeted therapy.

Non-small cell lung cancer(NSCLC)；Epidermal growth factor receptor gene(EGFR)；Gene mutation

330029 江西省腫瘤醫(yī)院(徐炎良)；334400 南昌大學(xué)撫州醫(yī)學(xué)分院(陳春香)

陳春香

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.03.011

R734.2

A

1001-5930(2017)03-0386-03

2016-11-08

2016-12-05)