隋增亮 （山東省高密市朝陽(yáng)街道辦事處農(nóng)林站 261500）

一起小鵝瘟病例的鑒定

隋增亮 （山東省高密市朝陽(yáng)街道辦事處農(nóng)林站 261500）

小鵝瘟作為養(yǎng)鵝業(yè)常見(jiàn)、多發(fā)的高致死性疾病，每年都會(huì)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。山東沂南地區(qū)養(yǎng)鵝密度較大，近來(lái)該地區(qū)雛鵝發(fā)生急性傳染性疾病，死亡率高達(dá)90%，病鵝起初精神委頓，后期食欲廢絕，嚴(yán)重下痢，迅速死亡。死前發(fā)生雙腿麻痹、癱瘓、角弓反張、抽搐不止等神經(jīng)癥狀。剖檢可見(jiàn)皮下組織充血、全身脫水、心臟、肝臟腫大，小腸后端可見(jiàn)明顯的纖維性混合物栓塞，初步診斷為小鵝瘟。設(shè)計(jì)針對(duì)性引物，通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增出目的條帶，最終鑒定為小鵝瘟。小鵝瘟病毒(Goose parvovirus，GPV)是由小鵝瘟病毒引起的一種傳染性疾病，表現(xiàn)為急性敗血癥。4～20日左右的雛鵝易發(fā)生感染，死亡率很高，隨著雛鵝日齡的增長(zhǎng)發(fā)病率和死亡率逐漸減低。根據(jù)發(fā)病時(shí)間長(zhǎng)短不同可分為3種類型，最急性型、急性型和亞急性型。發(fā)病的雛鵝表現(xiàn)為全身敗血癥、稀瀉。1周內(nèi)的雛鵝死亡率為100%。沂南地區(qū)一養(yǎng)殖戶，養(yǎng)鵝2000只，在2016年4月份感染某急性傳染病，死亡率達(dá)91%。筆者對(duì)該病進(jìn)行系統(tǒng)鑒定。

1 材料和方法

1.1 材料 山東省沂南縣一鵝場(chǎng)送檢病死鵝數(shù)只； DNA提取試劑盒購(gòu)Qiagen公司；Taq酶購(gòu)自上海生物工程公司；瓊脂糖凝膠回收試劑盒為Qiagen公司產(chǎn)品；其它試劑均為國(guó)產(chǎn)或進(jìn)口分析純?cè)噭?/p>

1.2 臨床癥狀及剖檢觀察 通過(guò)詢問(wèn)和到場(chǎng)觀察鵝群情況，并剖檢觀察病死鵝臨床癥狀。病鵝起初表現(xiàn)為精神低迷、進(jìn)食量銳減、羽毛黯淡無(wú)光、鼻分泌物異常增加，然后嚴(yán)重下痢、排出有氣泡的黃綠色或者黃白色水樣糞便。大部分病死鵝在死前發(fā)生雙腿麻痹、癱瘓、角弓反張、抽搐不止等神經(jīng)癥狀。

1.3 病毒基因組的提取 按試劑盒步驟提取鵝小腸研磨液DNA。

1.4 PCR擴(kuò)增 設(shè)計(jì)合成針對(duì)病毒VP3蛋白的引物，如下1對(duì)引物F：5′-CCAAGCTACAACAACCACATCTAC-3′R：5′-CTGCGGCAGGGCATAGACATCCGAC-3′。上述引物由大連寶生物工程公司合成。然后取0.1μg的病毒DNA進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增，采用50μl的PCR體系：DNA0.1μg，10×PCR buffer 5μl，25mM MgCl2 3μl，10mM dNTP 1μl，上游引物和下游引物各25pmol，Taq酶0.5U，加滅菌超純水至50μl，經(jīng)94℃ 5min 變性，然后94℃ 1min，55℃ 1min，72℃ 2min，30個(gè)循環(huán)擴(kuò)增，72℃10min延長(zhǎng)，4℃保存。

1.5 PCR產(chǎn)物測(cè)序 將PCR產(chǎn)物送上海生物工程公司測(cè)序。將反饋序列在NCBI中的Nuclear acid blasting進(jìn)行序列比對(duì)。

2 結(jié)果

2.1 剖檢結(jié)果 剖檢可見(jiàn)皮下組織充血，全身脫水，心臟、肝臟腫大，小腸后段內(nèi)可見(jiàn)明顯的纖維性混合物栓塞，小腸充血、出血。該癥狀符合典型小鵝瘟特征表現(xiàn)。

2.2 PCR鑒定結(jié)果 提取組織DNA后使用特異性引物擴(kuò)增，核酸膠鑒定有明顯陽(yáng)性條帶，將條帶PCR產(chǎn)物公司測(cè)序，將反饋序列在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中比對(duì)，發(fā)現(xiàn)與小鵝瘟VP3蛋白同源性99.8%。因此，鑒定該鵝場(chǎng)感染小鵝瘟。

3 總結(jié)

目前對(duì)于小鵝瘟并沒(méi)有有效的治療方法，防制該病一般都是加強(qiáng)免疫和科學(xué)的管理。通常用高免血清和卵黃抗體做被動(dòng)免疫，也有用弱毒疫苗或者滅活強(qiáng)毒疫苗做主動(dòng)免疫，免疫情況良好。基本經(jīng)過(guò)免疫的鵝群都不會(huì)發(fā)病，通過(guò)免疫就基本可以阻止該病的暴發(fā)和流行。

S858.33

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1007-1733(2017)02-0039-01

2016–09–29）