成 杰 欒業(yè)俊 仲亞娜 黃迪海 張?jiān)佥x 秦卓明⑥ 劉 霞*

文獻(xiàn)綜述

轉(zhuǎn)移因子的研究進(jìn)展

成 杰①欒業(yè)?、谥賮喣娶埸S迪海④⑤張?jiān)佥x④⑤秦卓明④⑤⑥劉 霞④⑤*

（①山東省龍口市諸由觀鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站 265701 ②山東省龍口市七甲鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站③山東省龍口市新嘉街道畜牧獸醫(yī)工作站 ④山東省健牧生物藥業(yè)有限公司 山東 濟(jì)南⑤山東省濟(jì)南市動(dòng)物生物藥品工程技術(shù)研究中心 ⑥山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所 山東 濟(jì)南）

轉(zhuǎn)移因子是由多肽和低聚核苷酸組成的一類可溶性、可透析、可超濾的小分子多肽?？蓚鬟f免疫信息、激發(fā)免疫細(xì)胞活性、增強(qiáng)機(jī)體特異性和非特異性免疫功能，對(duì)于某些病毒病、細(xì)菌性疾病、寄生蟲病以及免疫缺陷病和癌癥的防治發(fā)揮了重要的作用。由于其具有分子量小、無毒性、無抗原性、不引起過敏反應(yīng)和不產(chǎn)生對(duì)抗抗體且可超越種系界限應(yīng)用等優(yōu)點(diǎn)，因而是一種具有廣泛應(yīng)用前景的免疫增強(qiáng)劑。本文著重介紹轉(zhuǎn)移因子的成分、研制方法及新劑型的研究進(jìn)展。

轉(zhuǎn)移因子(transfer factor, TF)是一類具有免疫活性的可透析的小分子多肽，由活性T淋巴細(xì)胞釋放，并攜帶有致敏淋巴細(xì)胞的特異免疫信號(hào)，并且能夠?qū)⑵溥f呈給未致敏的受體淋巴細(xì)胞，非特異性增強(qiáng)受體免疫功能。上世紀(jì)五十年代Lawrence等首次發(fā)現(xiàn)能誘導(dǎo)遲發(fā)型超敏反應(yīng)的白細(xì)胞可透析物質(zhì)(DLE)，并將這種物質(zhì)稱為轉(zhuǎn)移因子。越來越多的研究表明TF作為是一種免疫活性肽，具有傳遞免疫信息、激發(fā)免疫細(xì)胞活性、增強(qiáng)機(jī)體特異性和非特異性免疫功能等作用[1]，故在臨床應(yīng)用中常用作免疫增效劑，對(duì)于某些病毒病、細(xì)菌性疾病、寄生蟲病以及免疫缺陷病和癌癥的防治發(fā)揮了重要的作用。

1 TF的活性成分

（1）TF是由多肽和低聚核苷酸組成的一類可溶性、可透析、可超濾的小分子多肽。分子量約為2000～5000道爾頓，能自由通過半透膜。TF不被胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、DNA酶和RNA酶等分解，對(duì)紫外線有吸收特性，不耐熱。由于TF分子質(zhì)量小、無毒、不具有抗原性、應(yīng)用后不刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體、不產(chǎn)生過敏反應(yīng)。（2）不同物種來源的TF無種屬特異性，因此人與動(dòng)物之間均可以通過TF交叉轉(zhuǎn)移細(xì)胞免疫[4]。凌紅麗[5]等采用Sephadex G-25柱層析法分離提取雞、豬脾轉(zhuǎn)移因子各組分，發(fā)現(xiàn)不同來源的豬脾和雞脾TF各組分及原液對(duì)正常小鼠的淋巴細(xì)胞均表現(xiàn)出一致的免疫活性。趙滿達(dá)[6]等研究表明不同動(dòng)物來源TF對(duì)櫻桃谷鴨T細(xì)胞的轉(zhuǎn)化增殖均有顯著的影響。（3）山東省健牧生物藥業(yè)有限公司采用液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS法)初步揭示轉(zhuǎn)移因子多肽組成[25]，測(cè)得多肽分子量為800-7476Da，含有581種多肽，包括T細(xì)胞凋亡抑制相關(guān)蛋白(TIAL1)、胸腺肽β4 (TMSB4X)、殺菌/通透性增加蛋白(BPIL3)、抑制因子活化蛋白(RAP1Ab)、抗菌肽(Cathelicidin-2)、細(xì)胞色素C(Cytochromec)等多種生物活性蛋白。

2 轉(zhuǎn)移因子的功能與作用機(jī)理

2.1 增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能 細(xì)胞免疫主要通過T淋巴細(xì)胞實(shí)現(xiàn)，馬風(fēng)龍[7]等發(fā)現(xiàn)雞TF與新城疫I系活疫苗和油乳劑滅活苗在首免和加強(qiáng)免疫時(shí)均具有協(xié)同作用，能顯著提高免疫接種雞淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，證明雞脾臟TF對(duì)雞的細(xì)胞免疫有促進(jìn)作用，可促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增殖與成熟，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答能力。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的提高，表現(xiàn)為E玫瑰花環(huán)形成率顯著提高，白細(xì)胞吞噬能力增強(qiáng)和游走活性提高，外周血液T淋巴細(xì)胞比值(Tc)升高以及受體的抗體水平增高等。張光曙等[8]研究表明，經(jīng)ConA或LPS誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞受胎盤特異性TF作用后，可增強(qiáng)T細(xì)胞的增殖效應(yīng)。陳德坤等[9]研究發(fā)現(xiàn)，給健康小鼠注射和口服豬脾臟TF可增強(qiáng)外周血液中性粒細(xì)胞對(duì)葡萄球菌的吞噬率和腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)紅細(xì)胞的吞噬率。張佩君等[10]把不同濃度的豬轉(zhuǎn)移因子加入不同時(shí)期分離的犬外周血中粒細(xì)胞與E.coli共培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)豬轉(zhuǎn)移因子不僅能夠增強(qiáng)犬中性粒細(xì)胞的殺茵活性，還能增加犬外周血中性粒細(xì)胞的數(shù)量。

2.2 增強(qiáng)體液免疫功能 大量的試驗(yàn)研究表明，轉(zhuǎn)移因子對(duì)活疫苗和油乳劑滅活苗均具有協(xié)同作用，能顯著提高機(jī)體細(xì)胞免疫水平，縮短機(jī)體免疫應(yīng)答期，促進(jìn)抗體的產(chǎn)生，并延長抗體高峰期，使之維持更長的時(shí)間。PTF與豬細(xì)小病毒油乳劑疫苗同時(shí)使用，能增強(qiáng)小鼠免疫機(jī)能，血清中IFN-γ、IL-6和IL-4水平上升，因此TF可做為疫苗的有效佐劑[11]。孫宏鑫等研究表明禽流感病毒H5N1型特異性轉(zhuǎn)移因子對(duì)禽流感病毒滅活疫苗具有明顯的增效作用，且發(fā)現(xiàn)口服途徑給藥的疫苗免疫增效作用優(yōu)于注射途徑給藥[12]。黃麗華等[13]用蛋白胨致熱法建立小鼠發(fā)熱病理模型探討免疫增強(qiáng)劑抗流感特異性轉(zhuǎn)移因子(STF)對(duì)試驗(yàn)性小鼠發(fā)熱的預(yù)防效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)STF處理的小鼠血清檢測(cè)有到抗流感抗體的產(chǎn)生，證明抗流感特異性轉(zhuǎn)移因子對(duì)試驗(yàn)性發(fā)熱小鼠有預(yù)防作用。

2.3 促進(jìn)細(xì)胞因子的活性 轉(zhuǎn)移因子是一種新型細(xì)胞因子類佐劑，不僅可以調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞mRNA的合成，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，還可以促進(jìn)其他細(xì)胞因子的合成和活性。TF可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞呈遞抗原，刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生淋巴細(xì)胞激活因子，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生干擾素。張方信等[14]應(yīng)用特異性TF免疫治療腫瘤病人后發(fā)現(xiàn)各細(xì)胞因子活性顯著增強(qiáng)，WBC明顯增加，且IL-1、IL-2活性及WBC的增加明顯高于化療者。表明TF作為細(xì)胞調(diào)節(jié)劑，可有效調(diào)節(jié)腫瘤病人的細(xì)胞因子水平。

2.4 促進(jìn)生長作用 王建文等[15]用0.5～1.0ml TF粗制品給雛雞口服，7d后與未TF的雛雞相比較，增重明顯，因此口服TF能顯著促進(jìn)雛雞生長發(fā)育。江青艷[16]等在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，注射脾臟TF對(duì)粵黃雞增重也有明顯的效果。同時(shí)，注射不同濃度TF的雞組在8周齡時(shí)，血液中T4和GH的水平均高于對(duì)照組，可能與脾臟轉(zhuǎn)移因子促進(jìn)粵黃雞的生長發(fā)育有關(guān)。

3 轉(zhuǎn)移因子在畜禽疾病防治中的應(yīng)用

3.1 TF在豬病防治中的應(yīng)用 轉(zhuǎn)移因子對(duì)豬的各種細(xì)菌、病毒性疾病的治療效果顯著，可以根據(jù)情況應(yīng)用轉(zhuǎn)移因子治療豬的各種疾病。張廣英[26]等報(bào)道了正常P-TF與特異性P-TF不僅對(duì)增加T細(xì)胞比值有顯著作用，而且對(duì)提高受體的抗體水平亦有顯著作用，表明P-TF具有提高受體細(xì)胞免疫和體液免疫的作用。郭定宗[17]等用豬傳染性胃腸炎弱毒疫苗分2次接種豬，取其脾臟制備特異性豬傳染性胃腸炎轉(zhuǎn)移因子TGE-TF，試驗(yàn)結(jié)果表明，TGE-TF能非特異性地增強(qiáng)小鼠吞噬細(xì)胞的吞噬功能。李猶平等[18]通過健康牛脾制備的轉(zhuǎn)移因子與豬繁殖與呼吸綜合征疫苗聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同作用，可顯著提高機(jī)體的免疫功能，提高疫苗免疫后的抗體水平。喬宏興等[19]對(duì)豬流行性腹瀉、豬傳染性胃腸炎分別使用TF(0.2、0.1、0.05ml/ kg)和氟本尼考與阿托品進(jìn)行治療，結(jié)果表明使用0.1ml/kg TF的劑量效果較好。而體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，轉(zhuǎn)移因子對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門氏菌具有明顯的抑菌作用，說明轉(zhuǎn)移因子對(duì)細(xì)菌病的預(yù)防和治療也能起到一定的作用。

3.2 TF在禽病防治中的應(yīng)用 （1）王成森[20]將豬脾轉(zhuǎn)移因子與雞新城疫疫苗配合應(yīng)用，結(jié)果表明應(yīng)用TF試驗(yàn)組的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和血清抗體效價(jià)與單獨(dú)接種疫苗對(duì)照組相比較，差異顯著，說明TF與疫苗配合應(yīng)用時(shí)具有協(xié)同作用，可顯著地提高機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫功能，增強(qiáng)疫苗的免疫效果。（2）李富桂[21]等研究不同免疫增效劑對(duì)雞新城疫免疫效果的差異，發(fā)現(xiàn)雞TF和靈芝的效果最明顯，提高了疫苗對(duì)動(dòng)物疾病防治機(jī)體的保護(hù)率，且對(duì)減蛋綜合癥具有很好的作用，因此在臨床上首選雞TF為免疫增效劑。王進(jìn)軼等[22]制備新城疫特異性轉(zhuǎn)移因子(ND-STF)單獨(dú)或與LaSota弱毒疫苗協(xié)同感染試驗(yàn)雞，結(jié)果表明ND-STF能夠增強(qiáng)雞的細(xì)胞免疫和體液免疫能力，且口服效果最好。人工感染禽流感，同時(shí)肌注轉(zhuǎn)移因子，淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)移率明顯高于對(duì)照組，而抗體產(chǎn)生的也更快更高，且臨床癥狀減輕，死亡減少，病程縮短。

3.3 TF在其他動(dòng)物防治中的作用 人用轉(zhuǎn)移因子對(duì)幼年實(shí)驗(yàn)獼猴的部分生理生化指標(biāo)有顯著的影響，為合理利用TF和開展動(dòng)物專屬制品研究提供了基礎(chǔ)[23]。張廣英等[24]用羊毛脂、液體石蠟制成一定比例再與豬轉(zhuǎn)移因子混合接種家兔，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用 TF－P 預(yù)防兔瘟獲得滿意的效果，從而為兔瘟的防治開辟了新的途徑。

4 轉(zhuǎn)移因子研制和新劑型研究進(jìn)展

4.1 轉(zhuǎn)移因子研制方法 目前國內(nèi)生產(chǎn)注射用豬脾轉(zhuǎn)移因子的廠家很多，提取工藝也不盡相同，有超離心、超濾、透析凍干、葡萄糖凝膠層析、冷乙醇抽提等方法。國外已上市的轉(zhuǎn)移因子產(chǎn)品劑型有膠囊、粉針劑、水針劑、口服液、嚼片、口腔噴霧劑及外用軟膏等。而國內(nèi)上市的產(chǎn)品僅有粉針劑、水針劑、膠囊、口服溶液。

4.2 轉(zhuǎn)移因子在獸醫(yī)領(lǐng)域中的應(yīng)用現(xiàn)狀及應(yīng)用前景 TF作為一種免疫制劑，其臨床效果已得到肯定。大量的試驗(yàn)研究表明，轉(zhuǎn)移因子對(duì)活疫苗和油乳劑滅活苗均具有協(xié)同作用， 能提高機(jī)體細(xì)胞免疫水平，縮短機(jī)體免疫應(yīng)答期，促進(jìn)抗體的產(chǎn)生，并延長抗體高峰期，使之維持更長的時(shí)間。轉(zhuǎn)移因子安全，作用迅速，效果顯著，無藥物殘留，無明顯毒副作用，無抗原性，再加上來源廣，價(jià)格便宜等優(yōu)點(diǎn)對(duì)于目前用抗菌素或免疫球蛋白無法控制的某些動(dòng)物疾病的防治發(fā)揮了重要的作用。

家禽脾臟轉(zhuǎn)移因子作用效果與哺乳動(dòng)物的無顯著差別，我國肉禽養(yǎng)殖業(yè)發(fā)達(dá)，禽類的脾臟在屠宰中一般作為廢物處理。因此，開發(fā)禽類的轉(zhuǎn)移因子產(chǎn)品有著極為廣闊的市場(chǎng)前景。TF在動(dòng)物疾病防治中的巨大作用，將使其在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用更加廣泛，將對(duì)我國畜牧業(yè)的發(fā)展發(fā)揮更大的作用。

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