黃建輝福建省長汀縣農(nóng)業(yè)局福建長汀366300

鴨病毒性肝炎的診斷與防治

黃建輝福建省長汀縣農(nóng)業(yè)局福建長汀366300

鴨病毒性肝炎是由鴨甲型肝炎病毒引起的一種急性、烈性、高度接觸性傳染病，由于病毒血清型較多，且易發(fā)生變異而難以有效地免疫預(yù)防，導(dǎo)致該病一直成為危害養(yǎng)鴨業(yè)健康發(fā)展的重要疾病。本文就引起鴨病毒性肝炎的病原、流行病學(xué)、臨床癥狀、病理特征以及防治措施等方面進(jìn)行綜述，以期為臨床鴨病毒性肝炎的診斷與防控提供參考。

鴨病毒性肝炎診斷防治

鴨病毒性肝炎（Duck Viral Hepatitis，DVH）是由鴨甲型肝炎病毒（Duck Hepatitis A Virus，DHAV）引起的一種急性、高度接觸性傳染病。該病以發(fā)病急、傳播快、死亡率高為特征，主要感染3周齡以內(nèi)的雛鴨，成年鴨也可感染，但不發(fā)病[1]。

根據(jù)基因差異，病毒可分為DHAV-1（A型）、DHAV-2（B型）和DHAV-3（C型）三種不同的血清型。DHAV-1即為傳統(tǒng)的DHV血清1型；DHAV-2目前僅在我國臺灣地區(qū)有報道，也稱之為臺灣型；DHAV-3首次在韓國報道，也稱韓國型，但近年來在我國也陸續(xù)有報道[2-3]。目前，我國主要流行DHAV-1和DHAV-3，但DHAV-1亦出現(xiàn)新的致病型（或亞型），因此，給臨床診斷及防控帶來較大困難[4-5]。

當(dāng)前各地主要采用接種疫苗的方法來預(yù)防DHAV感染，由于其存在多個血清型，且各血清型間交叉保護(hù)率低，即使在免疫良好的情況下，鴨群依然受到來自不同型DHAV的威脅。另外，雛鴨感染DHAV后，傳播快、病程短、死亡率高的特點(diǎn)，使養(yǎng)鴨場一旦感染該病，必然損失慘重。因此，當(dāng)前該病依然嚴(yán)重威脅著養(yǎng)鴨業(yè)的健康發(fā)展。本文從DVH的病原、流行病學(xué)、臨床癥狀、病理特征以及防治措施等方面進(jìn)行綜述，以期為臨床養(yǎng)殖戶防控該病提供科學(xué)依據(jù)。

1 流行病學(xué)

DVH由Levine等于1945年首次在美國報道，并用雞胚在5年后分離鑒定出該病原為DHV-1，即現(xiàn)在的DHAV-1（A型）；之后在加拿大、英國、德國、意大利等諸多國家均有該病的報道，目前已呈世界性分布[6]。國內(nèi)黃均健于1963首次報道在上海某鴨場有DVH的發(fā)生，隨后諸多地區(qū)相繼有該病的報道，現(xiàn)我國大部分地區(qū)均有發(fā)生。DHAV感染宿主包括鴨（番鴨、半番鴨、北京鴨、櫻桃谷鴨）、鵝和鴿等[7-8]。鴨為該病的主要侵害對象，尤以3周齡以內(nèi)雛鴨為最，其感染后死亡率可高達(dá)80%以上；10日齡以內(nèi)的雛鴨感染后死亡率高達(dá)90%~100%；隨著日齡增大，感染后死亡率降低，4周齡以上很少發(fā)病，成年鴨也可隱性感染，但不發(fā)病。感染后雛鴨3 d開始發(fā)病，5 d死亡率可高達(dá)80%，1周后則基本不出現(xiàn)死亡。

該病毒主要通過與患鴨直接接觸后發(fā)生傳播，也可通過病原污染的飼料、飲水和用具等常規(guī)方式傳播，消化道為最主要的感染途徑，也有研究表明呼吸道在感染過程中同樣起很重要的作用，但不經(jīng)卵傳播。病毒感染性極強(qiáng)，雛鴨一旦感染，傳播速度快、死亡率高。成年鴨雖不發(fā)病，也不影響產(chǎn)蛋率，但會長期排毒。研究表明，感染后康復(fù)鴨，排毒可持續(xù)1~ 2個月[9]；自然條件下，該病毒不感染雞和火雞。

該病無明顯季節(jié)性，一年四季均可發(fā)生，但在孵化季節(jié)發(fā)病率會明顯增加。雛鴨發(fā)病率可達(dá)100%，1周齡雛鴨發(fā)病率可達(dá)95%，1~3周齡病死率為50%左右，4~5周齡發(fā)病率低，基本不發(fā)生死亡。

2 病原

DHAV屬于小RNA病毒科（Picornaviridae），腸道病毒屬（Enteroviurs）成員。病毒粒子呈球形或類球形，大小為20~40 nm，無囊膜。核衣殼為二十面體對稱結(jié)構(gòu)，含32個殼粒。病毒不能凝集任何動物的紅細(xì)胞，也不具有紅細(xì)胞吸附特性?？赏ㄟ^雞胚、鴨胚和鵝胚傳代增殖。病毒對乙醚、碳氟化物等大多數(shù)有機(jī)溶劑具有較強(qiáng)的抵抗力；對熱有一定的耐受作用，56℃作用1 h后仍有活性，62℃作用30 min方可滅活；可耐受pH3.0的酸性環(huán)境。自然環(huán)境中，病毒能在污染的鴨舍內(nèi)存活10周左右，在陰涼的糞尿中可存活37 d以上；在4℃環(huán)境中，可以存活2年以上；-20℃條件下則可存活長達(dá)9年[6]。

3 臨床癥狀

雛鴨感染后發(fā)病迅速，初期精神沉郁、厭食，軟弱無力、匍伏、低頭、眼半閉，呈昏睡狀態(tài)；隨后全身抽搐，身體側(cè)翻，脖子上仰，頭向背部彎曲，瀕死時雙腳呈劃水樣；死亡后雛鴨呈典型的“角弓反張”現(xiàn)象。部分可見排灰白色或綠色水樣糞便。雛鴨感染該病后潛伏期短，通常在感染后3~4 d內(nèi)、或出現(xiàn)癥狀后1 h左右發(fā)生死亡。臨床上以病程短、發(fā)病急、傳播快、死亡率高為主要特征。

4 病理變化

經(jīng)典的DVH以肝臟的病變?yōu)橹?，表現(xiàn)為肝臟腫大、質(zhì)脆易碎，表面有出血點(diǎn)或出血斑。腎臟腫大，切面凸起，表面血管充血，膽囊膨大，膽汁呈現(xiàn)褐色、淡綠色或淡茶色。脾臟腫大、出血。腦膜充血、水腫。另外，有時也可見心肌、胸腺、法氏囊、腦等器官呈現(xiàn)腫脹、出血或壞死性等癥狀。近期，傅光華等報道，DHAV-1出現(xiàn)新的致病型（或亞型），主要表現(xiàn)為胰腺泛黃，肝臟病變則不明顯，相關(guān)致病機(jī)制有待進(jìn)一步闡明[10]。

5 診斷

DVH主要發(fā)生在3周齡以內(nèi)雛鴨，根據(jù)上述臨床特征癥狀及主要剖檢病變，可作初步判斷。實(shí)驗(yàn)室針對DHAV的診斷方法主要有：病毒中和試驗(yàn)（VNT）、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGP）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、RT-PCR技術(shù)、免疫組化（IHC）等[11]。VNT是檢測DHAV最經(jīng)典的方法，該方法檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，是目前公認(rèn)的權(quán)威方法；但其操作繁雜，費(fèi)時、費(fèi)力、成本高，不利于快速診斷。AGP簡單快速，但其特異性和靈敏性不足，并且該方法對抗原、抗體要求較為嚴(yán)格。國內(nèi)外學(xué)者對DHAV抗原或抗體的ELISA檢測方法做了大量研究，該方法可分為間接ELISA、Dot-ELISA和雙抗體夾心ELSIA等，因其快速、準(zhǔn)確、廉價且適合批量檢測的優(yōu)點(diǎn)而備受推廣。RT-PCR同樣具有較高的敏感性和特異性，可快速、準(zhǔn)確地從多種樣品（組織、糞便、血液等）中將病毒檢測出來。目前針對DHAV，實(shí)驗(yàn)室常用ELISA和RT-PCR作為檢測方法。

6 防治措施

DVH感染雛鴨后發(fā)病急、傳播快、死亡率高，對于該病的防控，主要以疫苗和高免抗體為主，但也有報道稱某些中草藥具有抵抗DHAV的作用。目前，國內(nèi)外針對該病的防控做了大量研究，主要通過以下幾種手段。

6.1 弱毒疫苗DHAV可在雞胚或鴨胚上連續(xù)傳代，在一定代次內(nèi)，可使病毒毒力逐漸減弱而免疫原性保持不變。利用該特點(diǎn)，可將DHAV用雞胚或鴨胚連續(xù)傳代而制成弱毒疫苗株。Aspli（1954）和Reuss（1959）均通過雞胚傳代致弱的方式，獲得了DVH弱毒疫苗株。Hwang等（1971）發(fā)現(xiàn)，將DHAV-1通過雞胚連續(xù)傳至63代后獲得的弱毒疫苗株具有良好的免疫活性，肌肉注射3 d后即可抵抗DHAV-1強(qiáng)毒的攻擊。國內(nèi)，程安春、張小過、羅薇、鄭獻(xiàn)進(jìn)、張阿娥等分別研制了DHAV-1雞胚化弱毒疫苗株A66株、CH60株、MY株、E63株和VPY-70株，其中A66株和CH60株已獲國家新獸藥證書[12]。

有關(guān)DHAV-3，韓國學(xué)者Kim等利用臨床分離的DHAV-3（AP-04203）株，通過SPF雞胚連續(xù)傳至100代而獲得弱毒疫苗株AP-04203P100，且證實(shí)該疫苗株安全、毒力不反強(qiáng)、免疫原性好，以0.2 mL（103.0ELD50）肌肉注射免疫1日齡雛鴨2 d后，可對強(qiáng)毒株產(chǎn)生100%保護(hù)效果[13]。國內(nèi)，蘇敬良等將DHAV-3 B株經(jīng)鴨胚連續(xù)傳至53代后再以雛鴨傳至10代，試驗(yàn)證明，該傳代致弱株無毒力反強(qiáng)現(xiàn)象。免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果顯示，DHAV-3 B株54代弱毒株以5×105.9ELD50劑量頸部皮下接種雛鴨5 d后，可對強(qiáng)毒的攻擊產(chǎn)生100%的保護(hù)。表明該弱毒株免疫原性好、毒力穩(wěn)定，可作為國內(nèi)DHAV-3疫苗候選株[3]。謝小雨等以DHAV-3 Y株用SPF雞胚連續(xù)傳至第80代后，發(fā)現(xiàn)其對1日齡雛鴨已無致病性，且免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)顯示，該雞胚傳代致弱株肌肉注射免疫1日齡雛鴨7 d后，對強(qiáng)毒的保護(hù)指數(shù)為100%[14]。

6.2 滅活疫苗DHAV滅活疫苗指將臨床分離鑒定且具有免疫原性的DHAV直接接種健康雛鴨、禽胚或細(xì)胞后，收集致死雛鴨的肝組織或致死的禽胚組織（或細(xì)胞）作為制苗材料，將收集后材料進(jìn)行物理或化學(xué)方法滅活處理，再以不完全弗氏佐劑、白油或蜂膠等為佐劑而制成的疫苗。Gough等將病毒感染后致死的鴨胚組織，采用β-丙烯內(nèi)酯滅活后配與不完全弗氏佐劑進(jìn)行乳化，最早制成了DHAV-1滅活苗[15]。且該研究表明，僅以滅活苗為基礎(chǔ)免疫無法產(chǎn)生滿意的抗體，但免疫3次后的種鴨，其后代雛鴨可獲得有效的保護(hù)。國內(nèi)，胡建華等將DHAV-1接種11日齡雞胚后獲得的尿囊液（ELD50≥10-8.0/mL），與吐溫-80、司本-80、硬脂酸鋁和白油一起制成油包水型油佐劑滅活疫苗。結(jié)果顯示，免疫1日齡雛鴨7 d后，其攻毒保護(hù)率高達(dá)100%，且免疫期為1個月以上[16]。陳克強(qiáng)等以DHAV-1上海分離株接種9日齡雞胚后的死亡胚組織，制成雛鴨DHAV-1蜂膠滅活苗。通過實(shí)驗(yàn)室和臨床試驗(yàn)初步表明，該滅活苗對雛鴨具有良好的安全性和免疫原性，按0.5 mL/羽劑量肌注7 d后，攻毒保護(hù)率可達(dá)85.70%，保護(hù)指數(shù)為82.10%[17]。

6.3 高免抗體高免抗體可分為高免血清和高免卵黃抗體。高免血清最早被使用，其效果較好，但制作過程復(fù)雜、產(chǎn)量少、成本高，且易污染，當(dāng)前臨床上較少使用。卵黃抗體指通過免疫產(chǎn)蛋雞，然后在其生產(chǎn)的蛋黃中提取相應(yīng)的抗體，之后用于相應(yīng)疾病的預(yù)防和治療。因其制作簡便、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，現(xiàn)已成為治療DHAV的重要手段。如王平等（1980）使用高免血清和高免卵黃抗體成功控制了北京地區(qū)的DVH。此外，在高免抗體的使用中，需選擇與流行株血清型相對應(yīng)的抗體[18]。

6.4 其他研究表明，抗病毒中藥能直接殺傷病毒，同時刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生細(xì)胞因子，通過免疫細(xì)胞識別并吞噬病毒。中藥因其成本低、毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn)，而被廣泛運(yùn)用于DVH的防治。國內(nèi)學(xué)者對抗DHAV中藥復(fù)方制劑、中藥單體等進(jìn)行了大量的探索。周廣生等研制了復(fù)方蟾酥制劑，且證明該制劑比西藥金剛烷胺效果好，可用于預(yù)防和治療DVH[19]。另外，研究結(jié)果顯示，劉立云等研制的茵蒲清肝散、孫欲光等篩選的復(fù)方中藥“鴨肝寧”口服液和畢玉霞等篩選的參靈清瘟敗血口服液，同樣對DVH具有很好的防治效果。而某些中藥單體，如蘆薈、水飛薊素和金絲桃素等，對DHAV的感染也具有一定的治療作用[20]。

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Diagnosis and control of duck viral hepatitis

Huang Jianhui
(Changting County Agriculture Bureau,Fujian 366300)

Duck viral hepatitis(DVH),caused by the duck hepatitis A virus(DHAV),is an acute,highly contagious disease,which has represented a serious threat in duck industry.DHAV is difficult to prevent immunity effectively for it is easy to occur variation and has many serotypes.In this paper,the etiology,epidemiology,clinical symptoms,pathological features and prevention measures of duck viral hepatitis were summarized,in order to provide reference for the diagnosis and control of DVH.

Duck Viral hepatitis Diagnosis Control

A

1003-4331（2017）03-0016-03